体内药物分析ppt课件

.,体内药物分析,哈尔滨医科大学药学院曲福军,.,第一篇总论1.体内药物分析:药物分析的的重要分支，是研究生物体中药物及其代谢物和内源性物质质与量变化规律的分析方法学。2.体内药物存在形式:药物进入体内后，经过吸收、分布、代谢和排泄过程，其化学结构与存在状态发生变化。其存在形式有四种。3.体内药物分析特点:药物浓度低、干扰多。除了少数情况，在最后进样之前都要采取适当的样品制备。样品制备是重要步骤，采用高灵敏度、高专属性分析方法是关键。,.,第一章绪论第一节体内药物分析意义、性质、对象和任务一、体内药物分析的意义以往：药物质量的认识和控制只重视药物的鉴别、检查、含量等。当今：药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程与药物疗效关系的进一步认识。发现化学等价而生物学不等价。,.,二、体内药物分析的性质1.药物临床前研究2.临床试验3.使用4.药物作用机制的探讨5.药物质量的评价6.用药规律7.安全、有效、合理用药8.保障人类健康长寿,.,（一）对象动物和人（二）任务1.方法学研究：提供合理的、最佳的分析条件；评价分析方法的灵敏度、专属性、准确度、精密度等；各种分析方法的关系。2.为药物体内研究提供数据3.为临床治疗药物检测提供准确的血药浓度测定值4.内源性物质的测定和研究：激素、儿茶酚胺、尿素5.滥用药物的检测：麻醉、精神药品、运动员应用兴奋剂等,三、体内药物分析的对象和任务,.,第二节体内药物分析的特点与要求一.体内药物分析的特点1.干扰杂质多2.样品量少在特定条件下采集，不易重新获得3.分析方法的的灵敏度和专属性要求高4.药物浓度低，有时需测代谢物5.测定方法有时要求简便、快速，以便为临床用药及中毒解救提供数据和情报6.实验室应具有多种项目分析的设备和能力7.工作量大，数据量大，结果分析复杂,.,二.分析方法的要求1.高灵敏度的检测方法2.建立高选择性、高专属性的分离方法3.达到方法学要求的精密度、准确度，且有稳定而高的回收率4.求解出有意义的参数,.,第三节发展概况和学科热点问题一.发展概况临床药理学和生物药剂学二.学科热点问题1.游离型血药浓度测定方法研究2.血药浓度游离型药物浓度（F）与总浓度（T）的比率（F/T）、唾液药物浓度（S）与血液药物浓度（P）比率，以及它们之间相关性的研究3.代谢物的检测与研究4.对应体的检测与研究5.体内微量元素的检测与研究,.,6.方便、快捷的样品制备与样品直接进样分析研究7.分析新方法、新技术的联用研究8.体内药物分析方法质量控制研究,.,第二章体内药物分析的相关基础理论概述第一节药物体内过程一.药物的吸收：1.给药途径：血管内和血管外2.药物吸收的影响因素（1）药物的理化性质：脂溶性、解离度（2）药物的转运类型（3）药物的剂型（4）吸收部位的血流状况（5）给药途经,.,3.药物吸收的部位1）胃肠吸收（1）胃吸收A:崩解后溶于胃酸才能吸收B:胃酸pH低，有机弱酸性药物易在胃中吸收C:pKa相近的情况下，分子状态药物中脂溶性大者吸收快D:药物在胃内滞留时间短，吸收有限E:有些药物胃刺激性大，胃内易分解,.,（2）小肠吸收A:药物在小肠停留时间长，小肠吸收面积大，为药物主要吸收部位。B:有机弱碱性药物易在小肠中吸收C:肠溶片、肠溶胶囊到达肠道后崩解、溶解、吸收，避免了药物的胃刺激,.,（3）胃肠吸收的影响因素A:剂型及理化特性B:食物（延缓药物的吸收，不影响最终吸收总量）C:胃肠道的功能D:药物的首关效应E:药物的相互作用,.,2）注射部位的吸收（1）优点A:适于胃肠中易降解的药物B:大量而迅速地在肝脏首过代谢的药物C:促进药物的药理作用尽快发生D:保证患者用药的依从性（2）特点A:脂溶性药物必须有一定的水用性B:脂溶性药物对其跨膜转运有帮助C:注射部位血液循环状态影响药物吸收D:不同的肌肉群吸收药物的速度不同,.,3）黏膜与皮肤吸收（1）黏膜吸收A:药物吸收量少，主要发挥局部作用B:适合首过效应显著的药物（2）皮肤吸收A:脂溶性药物易自皮肤吸收B:炎症、创伤性皮肤和单薄部位的皮肤易于药物吸收C:除产生局部作用外，有些药物也能产生全身作用,.,4）其他部位的吸收（1）直肠给药的吸收A:防止药物对消化道的刺激B:直肠给药不能避免首过效应C:直肠给药通常为液体制剂或栓剂D:吸收表面积小，吸收的量小，不规则,.,（2）肺部药物的吸收A:挥发性、气体性药物亦被动扩散的方式吸收B:颗粒越小吸收越快，大于20m易在支气管沉积，小于1m颗粒直接达到肺泡吸收C:适合麻醉药和平喘药,.,二.药物的分布：1.药物分布的影响因素（1）药物的化学结构与理化性质A:有机弱酸性药物分布细胞外液（pH7.4）B:有机弱碱性药物分布细胞内液（pH7.0）C:蛋白结合率高的药物主要分布于细胞外液D:游离型、未解离的脂溶性药物分布于细胞内E:能与细胞内组分结合的药物分布于细胞内,.,（2）血流量与膜通透性A:灌注速度（每分钟通过单位容积组织的血液毫升数）组织灌注速度差异大（10-0.02ml/min），药物在血流丰富的组织的分布比血流少的组织迅速。B:膜的通透性药物穿越的屏障可为单层的细胞，也可为数层细胞。小分子药物（100-200）外，大多数药物不能通过细胞间隙转运，而以一定的转运机制通过细胞。,.,（3）体内的特殊屏障A:血脑屏障缺少细胞间隙孔道，缺少具有吞噬功能的的囊泡，全部由星形胶质细胞包围。是由毛细血管壁和神经间质细胞形成的屏障。药物转运以被动扩散为主，高解离度、非脂溶性、蛋白结合率高的药物难于进入脑组织。反之易进入脑组织。炎性病变可以改变其通透性。,.,B:胎盘屏障药物转运以被动扩散为主母体中的药物多数能通过胎盘屏障进入胎儿体内脂溶性药物易通过胎盘分子量大小影响胎盘转运的因素注意药物的致畸作用,.,（4）药物与蛋白结合（药物的体内过程示意图）A:游离型与结合型药物药物和蛋白结合是可逆的平衡血浆蛋白：白蛋白、a-酸性糖蛋白、脂蛋白药物总浓度（Ct）药物的血浆蛋白结合率药物与蛋白结合是以非共价键的形式B:蛋白结合的影响因素药物的浓度和蛋白的含量药物与蛋白结合点的的亲和力蛋白结合位点的数目,.,C:竞争性血浆蛋白结合血浆蛋白结合率是新药审批时必须申报的研究资料药物在蛋白同一结合位点的结合是非选择性的理化性质相近的药物可竞争性的结合相同的位点被置换下来的药物的游离浓度显著增高有意义的情况是被置换药物蛋白结合率大于90%,.,三.药物的生物转化：1.药物代谢的反应类型及过程（1）药物代谢的化学途径及部位A:主要在肝脏进行B:血液、胃肠道、肺、皮肤、肾脏等也发生C:亚细胞水平：药物代谢酶位于内质网、微粒体、胞液等内D:最重要的药物代谢酶为微粒体混合功能氧化酶系统E:许多药物均可通过细胞色素P450系统氧化,.,（1）药物代谢的反应类型及特征A:药物代谢反应相反应、相反应B:氧化反应常见的碳原子氧化C:还原反应分子中的酮基被还原成醇基D:水解反应酯酶和酰胺酶水化和分解酯类和酰类化合物E:结合反应药物经过相反应，分子中增加了极性基团，然后再发生相反应，从尿液中排出。F:相反应的结合剂葡萄糖醛酸等G:乙酰化反应类似于结合反应，是异烟肼、磺胺类等代谢的主要途径，是一种特殊的代谢形式，代谢物的极性低于母体药物,.,（2）药物代谢产物的药理活性A:代谢产物失去药理活性B:原来无活性转化成有活性C:药理作用类型发生改变D:产生有毒性物质,.,（3）影响药物代谢产物的因素A:药物代谢的个体差异不同种族之间；遗传因素（多态性，快代谢和慢代谢）；环境因素B:年龄和性别对药物代谢的影响C:药物相互作用对药物代谢的影响主要表现在肝药酶的诱导和抑制作用D:疾病对药物代谢的影响,.,三.药物的排泄：器官（肾脏、肝胆、肠道等）。1.肾排泄肾脏是排泄药物和代谢物的重要器官。药物的排泄率=肾小球滤过率+肾小管分泌率-肾小管重吸收率（1）肾小球滤过A:临床以内源性肌酐清除率为肾小球滤过率指标125ml/min。B:肾小球滤过率代表肾功能C:能滤过游离型药物或代谢物，结合型药物不能滤过,.,（2）肾小管的主动分泌A:主动转运过程B:分泌机制相同的两类药物合用，竞争性抑制药物分泌C:药物的排泄率大于滤过率，肾小管主动分泌参与药物代谢（3）肾小管的重吸收A:药物的排泄率小于肾小球滤过率，肾小管重吸收B:主动重吸收将肾小管内溶质主动转运到肾小管外的组织C:被动重吸收,.,2.胆汁排泄是排泄药物消除的另一重要途径。原型药物的排泄较少，代谢物排泄多。A:水溶性大的药物和代谢物易通过此途径排泄B:血药浓度与胆汁药浓度相等为被动排泄C:血药浓度低于胆汁药浓度主动排泄D:胆清除率=胆汁流量X胆汁浓度/血浆药物浓度E:但药物排泄具有肠肝循环特点,.,3.其他排泄途径呼吸道、外分泌腺等A:挥发性和醇类药物可经非呼出排泄，次要B:乳汁药物排泄注意对新生儿的影响C:影响药物乳汁分泌的因素母体血浆稳态浓度药物分子量大小药物血浆蛋白结合率药物的脂溶性,.,第二节血药浓度与临床效应的关系一.药物效应的个体差异1.药效学及其与血药浓度的关系A:药效学是研究药物对机体作用的性质、作用的机制以及药物作用的“量”的规律的科学。B:血药浓度的变化与药理作用的“量”有密切关系,.,（1）时效关系和时效曲线时-效关系：用药之后随着时间的推移，药物作用动态变化的过程。时-效曲线：时间为纵坐标，药物作用强度为横坐标作图A:起效时间B:最大效应时间C:疗效维持时间D:作用残留时间,.,（2）时效曲线与血浆药-时曲线药-时曲线：药物浓度-药物效应曲线：A:最小有效血浓度B:最大效应血浓度C:疗效维持血浓度范围D:作用维持时间E:有效血药浓度范围F:特殊情况代谢物发挥药理作用；药物浓度增高药效不增高等；代谢产物T1/2较长，且有活性，原形药物浓度降低，仍保持药理作用,.,（3）药物蓄积、作用蓄积和中毒反应药物蓄积：在前次给药的体内药物尚未完全消除之前第二次给药，会产生体内药物蓄积。作用蓄积：在前次给药的“作用残留时间”内第二次给药，会产生药物作用蓄积。中毒反应：药物蓄积或作用蓄积达到一定程度就会产生毒性反应,.,2.药物临床效应的个体差异A:药物方面B:机体方面C:遗传方面D:环境方面,.,二.游离型药物浓度与药效的关系目前，血药浓度及药动学研究都是通过测定总浓度，一般总浓度能反映药效，有时不能反映药效。A:与血浆蛋白有高亲和力的，血浆蛋白结合呈明显的浓度依赖性，可导致游离形药物的非线性药代动力学。B:疾病（肝、肾疾病）改变药物与血浆蛋白的结合率D:有些药物血浆蛋白结合率存在这个体差异E:药物作用强弱与细胞外液浓度相关，细胞外液浓度与血液浓度相关,.,三.活性代谢物与药效的关系A:许多药物在体内形成具药理活性的代谢产物B:全部的药效和毒性均有特定的代谢物产生时，应阐明药理效应与代谢物浓度之间的关系C:原形药物和代谢物均有药理活性效应可能是两者相加也可能是更复杂的关系,.,四.有效血药浓度范围有效血药浓度范围是一个统计结论，对绝大多数患者适用，应具体情况具体分析A:患者的病理生理、年龄、联合用药等判断B:药物治疗几种疾病，有效血药浓度会随病种改变C:病人间存在着显著的个体差异，可能表现在疗效和毒性反应中,地高辛有效浓度范围：0.8-2.2ng/ml（与年龄和疾病相关）,.,第三节血药浓度与合理用药一.与血药浓度相关的药代动力学参数1.药-时曲线反映了药物的吸收、分布、代谢、排泄过程2.药-时曲线下面积（AUC）反映药物吸收的总量和程度3.峰值血药浓度（Cmax）常用于阐述血药浓度与毒性反应关系4.达峰浓度时间（Tmax）机体对药物的吸收快慢5.生物利用度（f）是药物吸收速度和程度的量度,.,6.表观分布容积（Vd）t时体内药物总量与血药浓度的比值Vd=Dt/Ct，用于推测药物在体内分布的广泛程度和组织对药物的摄取量。2.5-36L组织分布少；=36L均匀；36L分布强7.半衰期（T1/2）药物消除一半需要的时间（T1/2ke、T1/2）是判断药物在体内残留的重要参数8.稳态血药浓度（Css）以一定的时间间隔，用相同的剂量给药，则血药浓度叠加，当药物的吸收速率与消除速率相等时，血药浓度在一定水平波动。Cssmax；Cssmin,.,二.根据T1/2确定给药次数1.超快速消除类药物（T1/21h）药物的吸收、消除快不宜在体内蓄积。日多次给药2.快速消除类药物（T1/2=1-4h）药物的吸收和消除偏快往往忽视体内蓄积。长期使用毒性增加3.中速消除类药物（T1/2=4-8h）3-4次/日4.慢速消除类药物（T1/2=8-12h）2-3次/日5.超慢速消除类药物（T1/2=12-24h）1次/日或1次/隔日,.,6.非线性药代动力学类药物血药浓度检测确定给药剂量7.T1/2和抗菌药物后效应（PAE）与临常用药间隔抗菌药物的T1/2短，2-3次/日。对PAE认识，给要间隔根据MIC、MBC、PAE综合8.通过T1/2估算体内药物浓度A:一次用药或长期用药后停药5个半衰期消除97%B:连续用药5个半衰期，血药浓度达稳态，这时可检测血药浓度,.,第四节血药浓度测定种类一.游离型和结合型药物总浓度测定二.游离型药物浓度测定1.药物和血浆蛋白结合率80%2.药物治疗指数窄3.游离药物血浆浓度受生理和病理影响大4.药物的分布容积0.99；生物学法R0.98。3）需分区制备标准曲线（最高和最低浓度比100）三）准确度指用该法测得的生物样；样品中待测药物的浓度与其真实浓度的接近程度。1.测定法取空白生物基质数份，照“标准曲线下”配制，至少选标准曲线的高、中、低3个浓度样品。每个浓度5个平行样，每个样测定一次。与随行的标准曲线同测定,.,2.结果计算与限度分析1）用随行的标准曲线计算测得浓度（内、外标），测得值M的平均值M平与配制理论值（A）比，计算回收率（RR）或相对误差（RE）2）RR=M平/A100；RE=（M平-A）/A1003）RR在85-115%内，低浓度80-120%；RE15%，低浓度20%四）精密度指用1次测定结果与多次测定结果的平均值的偏离程度。表示分析方法的可重复性。1.表示方法方法精密度用SD或RSD表示，RSD=SD/X平均1001）批内RSD又称日内RSD2）批内RSD又称日间RSD,.,2.测定方法1）批内RSDA:同一分析批（日内）B:随行标准曲线C:高、中、低3种浓度，每种浓度5个平行样，每样测定一次。D:计算日内RSD2）批间RSDA:5个工作日，每个工作日完成一个分析批测定B:每一个分析批随行1条标准曲线C:每一个分析批测高、中、低3种浓度样品，每种浓度1个样，每样测定1次。D:用随行的标准曲线计算日间RSD,.,3.限度要求药代动力学、生物利用度：g/ml水平RSD10%；ng/ml水平RSD15%，在最低检测浓度附近RSD20%五）定量限A:方法定量限(LOQ)与检测限(LOD)均表示分析方法检测低浓度样的能力，通常称为方法灵敏度B:LOD指在噪音水平下识别生物样本中药物的最低浓度C:当信噪比（S/N）3时，该信号有效。将S/N=3时样品的浓度作为LODD:LOQ指保证具有一定可靠性的前提下，该方法能准确测定生物样品中药物的最低浓度E:LOQ的检测响应值为LOD的两倍以上，为S/N=10时的样品浓度,.,作为LOQ的估计值。F:体内分析中标准曲线的LOQ估计LOQ1.测定方法取同一生物基质，制备至少5个独立的生物样本，其浓度应使S/N10，依法进行准确度、精密度验证2.限度要求A:生物样本测得的LOQ平均浓度在其表示浓度的20%B:生物样本测得的LOQ其RSD20%C:LOQ小于测定3-5半衰期后生物样品中的药物浓度或小于Cmax的1/10六）稳定性1.方法稳定性,.,A:考察待测物的标准物、其分析溶液在室温、光照等稳定性B:方法建立过程中考察模拟生物样本预处理、室温或冰箱贮存、冻融等稳定性。2.生物样品稳定性1）短期稳定性考察模拟生物样品在室温、4C或-20C、冻融循环的稳定性2）长期稳定性考察实际生物样品经长期冰冻（-20C或-80C）后稳定性。期限为从生物样本采集到分析完毕3.测定方要求1）测定方法与限度要求A:高、中、低3个浓度样本，置于适当的容器内，在不同,.,条件、不同存放时间后，每个样本重复测定3次以上，其平均值应在零时的5%内。B:考察时间在一个工作日以上，则应与新制的样品在相同条件下的测得值比较。C:若生物样本的长期稳定性考察，可与液态氮中保存的生物样本，在相同条件的测定值比较2）稳定性期限要求A:在室温条件下仅需观察1日内稳定性B:在冰箱（4C、-20C、-80C）中应考察数个工作日内的稳定性C:血浆冻融至少经历2个循环（冻-融-冻-融）以上。每次冷冻时间在24h以上,.,七提取回收率主要考察生物样本在制备过程中造成的待测组分的损失1.测定方法A:取空白生物基质数份，制备高、中、低3个浓度模拟样本，每种浓度5个平行样本，每个样本测定一次B:另取等量的相同3个浓度的标准溶液，进样测定C:计算AT/AS100，在相同条件的测定值比较D:提取回收率测定，若采用内标，内标物应在提取之后，溶剂挥发之前加入，溶剂挥发后测定E:内标法测定生物样品，应测定内标物的提取回收率。仅制备一个浓度，5个平行样本，同法测定、计算,.,2.限度要求A:待测物的提取回收率高、中、低3个浓度均50%，且高中的RSD15%，低浓度RSD20%。B:内标物提取回收率50%，RSD15%八.质量控制1.质控（QC）样品A:将已知待测物加到空白基质中，配制的模拟生物样品，用于整个分析的质量控制，一般高、中、低3个浓度的质控样。B:质控样品池，试验研究初配制，与实际生物样相同条件下同时保存C:制备质控样品时，不能用制备标准曲线用的标准液，另配。,.,2.质量控制A:未知样品的测定在方法确定后进行，每个样品测定一次，必要时复测。B:每批生物样品测定的同时应建立相应的标准曲线，并随行间隔测定高、中、低QC样品，根据QC分析数据的可靠性。1）测定法QC样品以高低或低高顺序以一定间隔，均匀地插入整个分析批，与生物样本同时测定，并用随行标准曲线计算。2）限度要求每一分析批内，随行穿插6个QC样品。有4个在正常浓度的80%-120%内，RSD20%。允许有2个（不是同一种浓度）超出各自正常值的20%。,.,第二篇分析方法第五章光谱分析法第一节比色法1）定义紫外-可见光通过某种物质时，一部分光被吸收，从而引起该物质分子的外层电子能级跃迁。利用被测物质在特定波长或一定波长范围内的吸收度来测定药物的含量。又称吸收光度法。2）定量方法A:范围400-760nm可见。定量依据A=ECLB:是用于待测物本身有颜色或能与显色剂作用显色的被测组分，体内药物分析易受内源性杂质干扰。,.,C:生物样品采用标准曲线法D:检测灵敏度低，大于1g/ml的生物样本；选择性差，代谢物和内源性物质干扰测定第二节紫外分光光度法一.概述A:范围200-400nm可见。定量依据A=ECLB:是用于有紫外吸收的药物，灵敏度略高于比色法C:需经样品的萃取、纯化才能得到好的分析效果二.方法与应用1.直接紫外分光光度法A:样品中的杂质在测定处无干扰B:生物样品中待测物的浓度较高，达到检测限,.,2.差示分光光度法1）基本原理简称A法在两种不同的环境中，待测物以不同的分子形式存在，其吸收光谱有明显的区别。而共存的物质不受这种环境变化影响，吸收光谱无变化。2）测定方法A:两份相同的共试品溶液，经过不同的处理后，一份置于样品池中，一份置于参比池中测其差值（A）B:波长的选择，差示法C:数学依据D:必须通过试验证明生物样本中的干扰物被消除，A杂质=0,.,3.双波长分光光度法1）基本原理吸收光谱部分重叠的a、b两组分混合物中，若消除b的干扰测定a，可从b的吸收光谱上选择两个吸收度相等的波长1和2。测定混合物在两波长处吸收度的差。2）测定波长和参比波长的选择A:选择方法B:数学依据C:干扰组分在两个波长处有相同的吸收度Ab=Ab1-Ab2=0D:待测物在两个波长处的吸收度差值Aa足够大,.,第三节荧光分析法一.概述A:是利用物质发射荧光的特性进行分析的光学分析法。B:荧光分析的特点灵敏度高；选择性好二.基本原理1.荧光的发生2.分子结构与荧光的关系能够发射荧光的物质具备：必须有强的紫外-可见光吸收；一定的荧光效率1）荧光效率（f）表示物质发射荧光能力大小2）分子结构与荧光特性A:共轭结构,.,B:分子的取代基-OH、-OR、-NH2、-CN等荧光增强；-COOH、NO2、-C=O、-NO等荧光减弱；-R、-SO3H等荧光不变。3.激发光谱和荧光光谱1）激发光谱是指激发光的波长与发射荧光强度的关系曲线2）荧光光谱是指荧光波长与发射光强度的关系曲线4.激发波长ex和荧光波长em选择1）根据激发光谱和荧光光谱选择ex和em2）ex和em的距离20-30，理想的为503）若激发波长有几个强度适宜的峰，选择波长最长峰5.荧光强度与物质浓度的关系A:物质发射荧光的强度F=2.3kfI0ECL,.,B:F=KC前提是ECL0.05，故荧光分析法为稀溶液分析法6.定量分析方法1）标准曲线法2）比例法A:如标准曲线通过原点，可选择线性范围内，用比例法测定B:方法取已知量的标准品，配制一标准液（Cs），Cs在线性范围内。在相同条件下测定荧光强度（Fs、Fx），计算试样浓度（Cx）7.影响荧光强度的因素温度；溶剂；pH；荧光淬灭剂；激发光照射；散射光等三.方法与应用1.常规方法,.,1）直接测定法用于自身能产生荧光物质2）间接法无荧光或荧光弱的药物，与荧光试剂反应产生荧光2.胶束增溶增敏荧光分析法1）胶束溶液为一定浓度的表面活性剂，有一个亲水基团和一个疏水基团，极性溶液中几十个分子聚集成团，内疏水，外亲水2）一定浓度下（临界浓度）形成胶束，直径为3-6nm3）极性小的难溶溶水的荧光物在胶束液中溶解度显著增加温度；溶剂；pH；荧光淬灭剂；激发光照射；散射光等4）胶束溶液对荧光物质有增溶、增稳、增敏等特点,.,3.荧光探针法1）基本原理许多药物本身无荧光，从无荧光到有荧光需要使用荧光探针2）荧光探针的优点A:经衍生化后增加响应值，提高灵敏度和选择性B:有稳定分析物的作用，活泼、挥发性药物C:有助于化学基团的确定4.荧光淬灭法,.,第四节原子吸收分光光度法原子吸收光谱法是基于蒸汽相中被测元素的基态原子对其原子共振辐射的吸收来测定样品中该元素含量的一种方法一.原子吸收光谱法的特点1.优点灵敏度高；精密度好；选择性强；应用范围广；易于自动化2.缺点标准曲线的工作范围窄，一个数量级。二.原子吸收分光光度计1.光源作用是发射被测元素基态原子所吸收的特征共振辐射1）对光源的要求,.,A:发射辐射波长的半宽度要明显小于吸收线的半宽度B:辐射强度要有足够大C:稳定性能好D:使用寿命长2）原子吸收最重要的光源为空心阴极灯，含有被测元素。2.原子化器1)功能在于将试样中待测元素转化为所需的基态元子蒸汽2)实现原子化法可分为两类A:火焰原子化法B:非火焰原子化法3.单色器将所需的共振吸收线分离出来。4.检测系统由检测器、放大器、对数变换系统组成,.,三.定量分析方法1.标准曲线法2.标准加入法A:当样品基体影响较大，又没有纯净的基体空白或纯净物中极微量原元素时应用此法B:分取几份等量的被测样品，其中一份不加入被测元素，其余各份分别加入不同已知量的被测元素得C1、C2、C3Cn。绘制曲线，求待测样品微量元素浓度。3.内标法往标准液和样品中加入一定量的，所有样品中均没有的内标元素1)分别测定待测元素和内标的吸收度2)吸收度的比标准曲线法定量,.,第六章.色谱分析法是一种物理或物理化学的分析方法。其分离原理主要是利用物质在流动相和固定相中的分配系数或吸附能力的差异达到分离第一节薄层色谱法一.概述A:薄层色谱（TLC）是指将固定相均匀的涂在光洁的玻璃等表面形成薄膜，将待分离物点在薄层半的一端，于展开室中，展开剂借毛细作用从薄层点样的一端展开到另一端，使不同的物质得到分离。B:根据机制不同分分配色谱；吸附色谱；离子交换色谱；凝胶色谱,.,二.薄层扫描法是指利用薄层扫描测定薄层色谱斑点含量的一种方法1.实现操作的规范化和自动化1）光谱测定用于物质的定性鉴别2）色谱测定用于体内药物的定量分析2.薄层色谱的优化法1）薄层色谱分离条件的依据A:被分离物的性质B:吸附剂的活性C:展开剂的活性展开剂千变万化，找到与被测药物、吸附剂相匹配的展开剂是获得好的分离效果的关键。D:理想的分离Rf=0.2-0.8间，清晰集中、分离度佳的一组斑点,.,E:展开剂的确定方法三.定量分析1.外标一点法用一种已知对照品与样品溶液测定1）计算m样/m对=A样/A对2）要求对照品和样品多点几个平行样A平均值计算；A样与A对要接近；点样要准确2.外标两点法是指用两种浓度的标准液与样品液对比的定量法A:在点样量与A处于直线范围内时未知样的含量m样=a+bA样B:对照品和样品多点几个平行样A平均值计算3.标准曲线法4.内标法,.,第三节气相色谱一.概述1.优点选择性好；灵敏度高；用样量少；分析速度快2.缺点挥发性；热稳定二.仪器简介1.载气1）载气由高压气瓶共给，经压力调节器、净化气、稳压调节后进入色谱，流量、温度、基线稳定后进样。2）载气携带样品进入色谱柱分离3）常用的载气2.进样1）气体样品微量注射器和气体自动进样阀，量0.1-1ml,.,2）液体进样微量注射器和液体自动进样阀，量0.1-1l。3.色谱柱1）由柱管和固定相组成，分离作用。有两种2）填充柱内径4-6mm，长1.5-4m，键合苯基，甲基聚硅氧烷3）毛细管柱弹性石英，内径0.1-0.5mm，长数十米-数百米4.检测器1）氢焰离子化检测器（FID）A:凡是氢-火焰中能电离的药物都可被检测B:无机药物和惰性气体C:药物萃取、浓集的残渣用CS2溶解进样D:最小检测浓度100ng/ml，最小检测量1ng,.,2）氮-磷检测器（NPD）是利用有机药物分子通过氢-空气火焰产生热电离测定A:检测器火焰处设有加热的碱金属盐，对氮、硫、磷敏感。灵敏度10-9g/mlB:可检测分子中含有氮、硫、磷的药物C:氮杂环类药物，氮在母核中，NPD同时检测原形药和代谢物D:氮在药物的侧链，NPD只能检测原形药3）电子捕获检测器（ECD）是一种有选择性的高灵敏度检测器A:对含有电负性原子或官能团的有机和无机物检测敏感B:需要高纯度的氮气C:体内分析中用于具有吸电子基团的有机药物，其原理为：,.,4）质谱检测器GC-MS可获得被测药物的质谱图三.定量分析1.系统适应性试验用规定的对照品进行试验和调整，应达到规定的要求1）色谱柱的理论塔板数（n）A:选定的条件下，供试品、内标等进样，计算(n)B:n=5.54(tR/W1/2)2C:如理论塔板数不符合要求，重新建立方法2）分离度（R）定量分析时，提高准确度A:定量分析时，提高准确度B:R=2(tR2-tR1)/(W1+W2),.,3）重复性取该项下的对照品溶液，连续进样5次，其峰面积的值RSD2.0%4）脱尾因子（T）A:保证精密度、准确度，特别是峰高定量B:T=W0.05h/2d12.内标法1）内标法的基本原理将一个已知量，样品中不含有的纯物质加样品中，GC分析。2)内标物的选用原则A:内标和被测物只差一个元素B:内标和被测物为同系物,.,C:内标