免疫细胞治疗(1季度培训)ppt课件

克利斯蒂娜的世界,45岁进入了肿瘤发病高峰，且肿瘤风险随年龄增加呈几何倍数上升65岁的老年人患肿瘤的几率是25岁年轻人的50多倍,40岁后肿瘤发病率逐年增长,恶性肿瘤离我们有多远?,我国每年新发肿瘤病例约为312万例平均每天8550人（全国每分钟有6人被诊断为癌症）肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、脑肿瘤和乳腺癌,肿瘤的治疗,攻克癌症人类的第一次,手术1809年德国医生McDowell第一次用手术切除卵巢癌，并取得36年生存期的良好效果。放疗1895年伦琴发现了X线,1896年即用X线治疗了第1例晚期乳腺癌。化疗化学治疗上世纪40年代用氮芥治疗恶性淋巴瘤取得显著疗效，自此开始了肿瘤的化学治疗。50年代以环磷酰胺、氟尿嘧啶合成为标志是化疗的第二里程碑，70年代顺铂及阿霉素进入临床并得以广泛应用是化疗的第三里程碑。90年代以后，抗肿瘤的新药不断推出。,ChesterSoutham:在五十年代首次给志愿者注射活的癌细胞,结果:注射的癌细胞在健康人体内不生长.注射的癌细胞在癌症病人体内可长成大肿瘤。结论：癌症病人体内失去健康人所具有广谱抗癌活性。研究项目受到伦理学及法律的极大挑战。研究结果为抗癌界带来极大提示，1968年被推选成全美抗癌学会主席。,Science，1957年一月125:158-160,首次证明人体内天然抗癌活性的存在,人体免疫与肿瘤的发生,临床信息部,肿瘤细胞免疫治疗,免疫器官,免疫细胞,免疫分子,免疫系统是人体的防御体系，一方面清除细菌、病毒等外来异物，另一方面清除体内衰老的无功能细胞以及发生突变的细胞。一个人身上每天有数万亿个细胞在复制，在复制中，约有万分之一到百万分之一的细胞会出现差错，也就是说，每天约有50-100万个细胞可发生突变。有的突变细胞进一步变为癌细胞。,免疫系统免疫防御、免疫监视、免疫自稳,.,“Inlarge,long-livedanimals,likemostofthewarm-bloodedvertebrates,inheritablegeneticchangesmustbecommoninsomaticcellsandaproportionofthesechangeswillrepresentasteptowardmalignancy.Itisanevolutionarynecessitythatthereshouldbesomemechanismforeliminatingorinactivatingsuchpotentiallydangerousmutantcellsanditispostulatedthatthismechanismisofimmunologicalcharacter.”SirFrankMacfarlaneBurnet诺贝尔生理学或医学奖1960,肿瘤免疫治疗理论“免疫监视”理论(ImmuneSurveillanceTheory),“肿瘤免疫编辑”(TumorImmunoediting）Elimination:免疫消除Equilibrium:免疫平衡Escape:免疫逃逸,发病时,健康时,肿瘤的潜伏期长达10年以上,癌细胞反复进行分裂，约30次后大小约0.7cm时，初次被影像学识别为“癌症”；早期癌症被发现时的大小约是1cm，重量约是1g，其中癌细胞的个数约是10亿个；据统计，肿瘤发展到临床诊断，所经过的时间约为10年，这期间是防治的黄金时间。,肿瘤的治疗,？,？,？,临床信息部,FDA批准第一个免疫细胞,树突状细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用,2010.4.29美国食品药品管理局批准Provenge(sipuleucel-T)，作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细胞，这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治疗。Provenge诱导作用是通过抗原提呈细胞(APCs)负载前列腺癌酸性磷酸酶（PAP）抗原，继而激活肿瘤特异的CD8+T细胞，诱导抗前列腺癌免疫应答。这是FDA首次批准的自体免疫细胞用于治疗肿瘤。,发病率高,病情进展缓慢,肿瘤相关抗原表达,化疗疗效有限,“非必需”组织,前列腺癌细胞免疫治疗获得成功的原因,PSA、PAP等,内分泌治疗无效的患者，此时肿瘤负荷较小，机体具有一定的抗肿瘤能力,NatRevImmunol.2010,10:580-593.,Provenge疫苗治疗晚期前列腺癌的机制,治疗结果,受试者：512名总体生存期：对照组:21.7个月，治疗组:25.8个月。3年存活率：治疗组32%，对照组23%。副作用：主要是发烧、发冷、疲劳和疼痛。,2011年诺贝尔生理学或医学奖,BruceA.BeutlerJulesA.HoffmannRalphM.Steinman,2011年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，美国、法国三位科学家因在免疫学方面的发现获奖。其中一半的奖金归于BruceA.Beutler和JulesA.Hoffmann，获奖理由是在“Toll样受体和先天免疫激活方面的发现”；另一半奖金归于RalphM.Steinman，获奖理由是“发现树突状细胞及其在获得性免疫中的作用”。美籍科学家比尤特勒和卢森堡籍科学家霍夫曼是因为发现“Toll样受体（Toll-likeReceptors，TLRs）及其配体”获得2011年诺贝尔生理学或医学奖,肿瘤的免疫治疗时代已经来临,权威医学杂志纷纷刊文，高度评价免疫细胞治疗技术的前景,肿瘤的免疫治疗时代已经来临,癌症免疫疗法是2013年最值得关注的六大科学领域之一,DC细胞治疗技术正走进肿瘤免疫治疗的前沿,临床信息部,个体化体细胞免疫治疗方案,根据不同肿瘤的生物学特性（肿瘤类型、分期和肿瘤的免疫源性）、患者的遗传背景（是否具有家族倾向？）、目前的病情状况（体质，免疫状况）、前期治疗方法、年龄等，在常规治疗的基础上，制定出适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案。,（一）针对老年肿瘤晚期患者，体质弱、免疫功能极度低下采取抽少量血多次回输的治疗方案,抽血30-40ml外周血,第1天,第3次CIK回输,第2次CIK回输,第4天,第8天,第12天,第14天,第16天,开始下一个疗程的治疗,第1次CIK回输,(二）化疗联合细胞治疗的增效方案,化疗前1天抽血50ml，进行CIK或D-CIK免疫细胞培养,第一周,第二周,7天,第1次开始化疗,第2次开始化疗,回输CIK或D-CIK等细胞,化疗前1天抽血50ml，进行CIK或D-CIK免疫细胞培养,（三）体细胞免疫治疗联合放疗的增效方案,放疗前抽外周血50ml，上午放疗前,放疗,放疗,放疗,两周后，当天放疗后回输免疫细胞,第2天周二,第3天周三,第1天周一,第4天周四,第6天周六,第7天周日,第5天周五回输培养的CIK、NK、D-CIK等细胞,休息,休息,（四）抗肿瘤效应细胞交替使用方案,第二周D-CIK,第三周NK,第四周D-CIK,抽血30ml,回输NK,抽血50ml,抽血30ml，回输NK细胞,抽血50ml，回输D-CIK细胞,第五周NK,第六周D-CIK,回输D-CIK,第一周NK,临床信息部,细胞产品,一、CIK细胞,CIK细胞(Cytokine-InducedKiller，CIK)，即细胞因子诱导的杀伤细胞，是一种新型的免疫活性细胞，该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力。,DC细胞寻找肿瘤细胞的“雷达”DC又称树突状细胞。它是目前发现的功能最为强大的专职抗原递呈细胞，也是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞，在免疫应答的诱导中具有独特地位。经临床研究的结果显示，DC细胞可促使患者T细胞增殖分化，还可激活B淋巴细胞，全面启动抗体免疫系统产生高效而特异的抗肿瘤效应，帮助重建肿瘤患者对肿瘤细胞的免疫监视功能。DC细胞的功能如同“雷达”，通过在体内随着血液全身各处主动搜索、识别肿瘤细胞，并把信息传递给免疫活性细胞，促进其激活和大量繁殖。,二、DC细胞,三、DC-CIK,通过负载肿瘤抗原的DC与CIK的有机结合（即DC-CIK细胞）能产生特异性和非特异性的双重抗肿瘤效应，二者具有一定的互补作用。DC-CIK细胞不仅能激发、增强肿瘤患者特异性抗肿瘤免疫应答，有效清除体内残留病灶，且在患者体内诱发免疫记忆，从而获得长期的抗瘤效应。DC-CIK自体细胞免疫治疗可以有效杀灭术后的残留肿瘤细胞，防治复发和转移，减轻放化疗的毒副作用，减轻患者痛苦，提高患者自身免疫机制和生活质量，延长患者生命。,扩增活化的自体淋巴细胞（AutologousImmunotherapyLymphocytes,AIL），又称为高效CIK细胞。是从患者自体外周血（50-100ml）中分离单个核细胞，经过体外激活扩增培养，得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群，主要效应细胞包括MHC限制性效应细胞（CD3+CD8+细胞毒性T细胞、CD3+CD4+辅助性T细胞）、非MHC限制性效应细胞（CD3+CD56+细胞、CD3-CD56+NK细胞），可有效辅助恶性肿瘤的治疗。,四、AIL细胞,AIL与CIK培养方法比较,50ml外周血,PBMC,A培养法：,B培养法：,A培养法（传统CIK）：DI：IFN-1000U.ml-1D2：OKT3mAb.100ng.ml-1、IL-21000U.ml-1、PHA100ug.ml-1,B培养法（AIL）：DI：IFN-1000U.ml-1D2：OKT3mAb.100ng.ml-1、IL-21000U.ml-1、PHA100ug.ml-1，AIL扩增试剂,自然杀伤细胞（Naturalkillercell，NK）是一种细胞质中具有大颗粒的细胞，来源于骨髓，主要存在于外周血、脾脏和骨髓中。对靶细胞杀伤时既不需特异性抗体参加，也不需抗原预先致敏。自然杀伤细胞可在接触病原体或肿瘤细胞后，立即发挥非特异性杀伤靶细胞的作用，尤其是对多种肿瘤细胞有迅速杀伤和溶解作用。因此，NK细胞对癌症的监视作用已越来越受到重视。,五、NK细胞,一、NK细胞是人体内抗癌活性的第一道防线，可直接杀死癌细胞，抑制肿瘤的生长及扩散；二、NK细胞会抑制肿瘤附近新血管的增生，因此可限制肿瘤取得所需要的养份进而限制肿瘤生长；三、NK细胞可直接改善并调节患者的免疫力及神经系统，间接提高患者之生活品质；四、副作用低或几乎无副作用。,NK细胞作用原理,六、iAPA-细胞,SOCS1是维持机体免疫耐受的重要分子,Si-YiChenetal.发现：SOCS1(SuppressorofCytokineSignaling1)是一种重要的免疫负调节因子(antigenpresentationattenuator,APA)，对DC细胞的抗原呈递起负调节作用，限制抗原呈递的时间和强度，从而限制自体抗肿瘤免疫反应。该研究第一次提出了抑制免疫负调控因子来增强DC疫苗的概念,NatureBiotechnol.2004;22:1521-2评述：NatureBiotechnol.2004;22:1546-53J.Clin.Invest.2006;116:90100,STAT,SOCS1,JAK,Cytokine,IFN,IFN,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-12,IL-7,IL-15,M-CSF,etc.,LPS,MyD88,TRAF6,IKK,IKK,RelA,p50,IB,IKK,IRAK,Mal,SOCS1,TLR配体,TAA,s-Flagellin,SOCS1-siRNA:解除DC免疫耐受(persistentandenhancedSignals2/3),肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen,TAA)intracellularSurvivin(Tcells)surfaceMUC1(TcellsandAb),分泌型FliC:TLR5ligandauto-andparacrineactivationofAPCs(enhancedSignals2/3),siSOCS1-TT,iAPA技术治疗肿瘤,iAPA-细胞,与传统免疫细胞治疗相比，iAPA技术的优势,结构新颖：iAPA因子包含抑制SOCS1的siRNA、肿瘤抗原（Survivin,muc1）和鞭毛蛋白。机制新颖：iAPA技术不但针对性增强DC免疫活性，而且去除了免疫负性调控因素，从而更有效的增强了免疫效应。创新靶点：iAPA技术作用的靶点独创性针对免疫活化通络上的关键性分子iAPA分子-SOCS1,44,45,2020年5月24日星期日,iAPA技术完全打破了传统的免疫治疗理念与方法，代表了免疫学理论的一场新的革命，为国际首创、世界一流。许多研究成果已分别发表在国际一流权威杂志，包括Naturebiotechnology、Naturemedicine与JCI等。,基础研究：国际首创世界一流为国际医学界所公认,CTL(CytotoxicTLymphocyte)，细胞毒性T细胞，其表面标志是CD8。这些细胞的功能就像一个“杀手”，它们可以直接攻击带有特殊抗原的靶细胞，在抗病毒感染和抗肿瘤免疫中具有极其重要的用，细胞毒性T细胞也被称为杀手T细胞。,七、CTL细胞,肿瘤浸润淋巴细胞（TumorInfiltratingLymphocytes，TIL）是通过采集患者胸腔积水或者腹水，经过体外激活扩增培养，得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群。它是新一代的特异性免疫活性细胞疗法，具有高效、特异