猪传染性胸膜肺炎

华中农业大学动物传染病房武汉科前动物生物制品有限责任公司，猪传染性胸膜肺炎porcinecontagiouspleuropneumonia，一、猪传染性胸膜肺炎porcinecontagiouspleuropneumonia (1)发生与危害(2)主要临床症状(3)流行病学特征(4)诊断方法与(5) 疫苗防治，(1)猪传染性胸膜肺炎的发生和危害，胸膜肺炎放射杆菌(APP )引起猪的高接触传染性，致死性呼吸道感染。 急性和亚急性病例以纤维素性出血性胸膜肺炎为主要特征，慢性病例以纤维素性坏死性胸膜肺炎为主要特征。 被称为“猪接触性传染性胸膜肺炎”、“猪嗜血杆菌胸膜肺炎”。 猪呼吸困难，急性死亡的最急性型死亡率为80-100%，慢性耐过猪生长缓慢日增减约5-33.6%，饲料报酬减少约4.6-25.5%6.耐过猪因扁桃体存在细菌而成为潜在感染源，使该病向猪扩散。 7 .本病易与猪繁殖和呼吸综合征、伪狂犬病、猪嗜血杆菌病等混合发生，给世界各国养猪业带来巨大经济损失，已成为当前主要猪病之一。 近年来，该病在世界范围内蔓延，在欧洲、美国、亚洲等多个国家和地区都有发生。 在美国、加拿大、丹麦、瑞士等主要养猪国，本病已成为猪的主要传染病。 9.2000、2002、2004年分别在澳大利亚、美国、德国召开的第16、17、18次国际猪病会和2003、2005年分别在韩国、菲律宾召开的第1、2次亚洲猪病会上，设立了猪传染性胸膜肺炎研讨会猪传染性胸膜肺炎的世界分布、欧洲、美国、澳大利亚、亚洲、南非、猪传染性胸膜肺炎在我国的流行和分布，自1990年确定猪传染性胸膜肺炎以来，本病已在我国20多个省市发生和流行，受灾严重。 目前，APP中15个血清型外毒素(RTX )是主要毒性因子，其中ApxI和ApxII毒性最强。 血清型APP均产生ApxIV，仅在体内产生，因此ApxIV可用于特异性诊断和鉴别诊断。 病原：胸膜肺炎放射杆菌Actinobacilluspleuropneumoniae，APP，在我国流行的优势血清型，在“9.5和10.5”期间，在全国各地检测到猪血清100，000件以上，阳性率在53%左右，也有超过70%的人。 我们从湖北、湖南、广东、浙江、上海、河南、山东、广西、福建、江西等10个省的呼吸道症状猪肺中分离出100多株APP，主要流行血清型为1、2和7型。 (二)本病的主要临床症状是APP感染猪，不同年龄猪可感染，但25月龄易感染。 主要特征为急性期体温升高，呼吸困难严重，张口呼吸，呈犬座位，慢性期阵咳，消瘦。 该病发生在外在因素影响较大，一般无明显季节性，多见于晚秋冬春季，气温急剧变化的潮气、通风不良、饲养密集管理不善等条件下，尤其多发于重组、增加压力因素。 发病率因各地管理系统和预防措施而异，一般较高，为8.5100%。 死亡率根据环境和菌株的毒性，在0.4%100%之间。 近年来各地发病情况显示，哺乳仔猪的发病率和死亡率高，但育肥仔猪的死亡率不高，略高于正常死亡率。 本病的感染途径为呼吸道，通过咳嗽、打喷嚏传播。 猪在感染链中可能起重要作用。 根据病程不同，可分为最急性、急性、亚急性和慢性4种临床发病形式。 最急性：突然发病，体温升至41.5，抑郁、厌食，病猪卧床，无明显呼吸症状。 一般在一两天内突然死亡。急性：同一轮或不同轮多数猪同时发病，体温40.5-41，抑郁，拒食，咳嗽，呼吸困难，有时张口呼吸，呈犬坐姿，首先鼻、耳、腿皮肤甚至全身皮肤发绀，心脏衰弱常见，病程因肺病变和治疗开始时间而异，死亡3 .亚急性或慢性：经常从急性变化，体温不升高或稍微不升高，无食欲，阵咳或间断咳嗽，体重增加率下降。 慢性感染群中，多数隐性感染猪受到其他病原微生物侵害，临床症状可能会恶化。 尸检病变：尸检的主要病变为肺炎和胸膜炎，肺炎大部分为两侧性，心叶、尖叶和部分隔叶相关，隔叶上病灶常局部，界线清晰，肺炎区暗，坚固，剖面脆弱。 急性：以出血性纤维素性胸膜肺炎为特征，胸腔内有血样液体。 急性死亡病例，气管和支气管充满泡状血样粘性渗出物。 2 .慢性：以纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征，大部分慢性病例，大小结节，这些脓肿样结节被厚结缔组织膜包裹，部分区域胸膜粘连。 多数病例肺部病变消失，仅留下局限性胸膜粘连。 3、自然病例常见胸膜肺炎放射杆菌与多杀性生物杆菌协同作用，形成复杂的呼吸道疾病综合征。 急性：呼吸困难急性死亡心包积液、纤维素性化脓性坏死性胸膜炎、肺炎、纤维素性、出血性、坏死性肺炎、淋巴结肿大、APP血清7型菌接种小鼠死亡情况、2108CFU组、2109CFU组、6109CFU组、APP-1型(弱毒株shope4071)108菌量气管内注射19h 口、鼻腔流出大量血水样渗出物，感染的生存猪2个月后慢性，生长缓慢，僵化，毛粗，毛粗，人工接种APP血清的1型12h内死亡病理变化，人工接种APP-1型菌7天后肺病变，化脓灶，化脓灶，人工接种APP-1型菌7天后喉和肺病变， 喉化脓灶、胸腺体出血、肺大致外观、垂鼻接种APP-1型菌2天后(背部皮肤变红)，APP人工感染急性死亡病例(接种后死亡36小时)、APP人工感染急性死亡病例(接种后死亡36小时)、肺充血、化脓灶、APP人工感染急性死亡病例(接种后死亡36小时)、 喉脓性灶、APP人工感染急性死亡病例(接种后死亡36小时)、脾脏边缘出血性梗塞、鼻粘膜肿胀、充血、APP人工感染急性死亡病例(接种后死亡36小时)肠道病理解剖变化、APP人工感染急性死亡病例(接种后死亡36小时)、急性致死猪外观：皮肤变紫，心包积液、粘连；(3) 诊断方法、临床症状和尸检病变均可初步诊断本病，需要病原分离检测和血清学诊断方法。 病原学诊断方法(1)病原分离鉴定，(2)PCR诊断方法华中农业大学自1996年以来，建立了ApxI、ApxIII、ApxIV、omlA (外膜蛋白)、tfb (转铁蛋白) PCR诊断方法。 ApxIV仅在体内表达，体外表达，因此ApxIV-PCR作为鉴别诊断，可以结合目前我国商品化最多的灭活疫苗，区别灭活疫苗免疫猪和野毒感染猪，净化并最终根除猪传染性胸膜肺炎。ApxIV-PCR扩增特异性试验结果表明，MDNAmarker2000阳性对照1-13 14:APP血清1-13和15型标准株15:TM/SN液体培养基16:PPLO液体培养基17:猪副嗜血杆菌18多杀性生物杆菌19:支气管败血波杆菌20:大肠杆菌21葡萄球菌22:链球菌23阴性对照(无菌水) ApxIV-PCR放大灵敏度试验结果， m:DNA marker 20001-10:app (109-100 ) cfu/ml阳性对照-阴性对照，ApxIV-PCR放大临床样品试验结果3 .血清学诊断快速玻璃片凝集(RSA )试验管凝集(TA )试验2-巯基乙醇试验管凝集(LAT )试验环状沉淀(RP )试验试验补体结合反应(CF )间接凝血(1HA )试验免疫荧光(1F )试验酶联免疫吸附试验(ELISA):ApxI-、ApxII-、ApxIII-、ApxIV-ELISA，(1)目前比较常用的诊断方法：间接凝血试验(IHA )和酶联免疫吸附试验(ELISA )。 (2)本实验室建立了ApxI-、ApxII-、ApxIII-、ApxIV-ELISA的诊断方法，并以ApxII-ELISA、ApxIV-ELISA为试剂盒进行了研制。 试剂盒灵敏度高、特异性，且ApxIV-ELISA配合灭活疫苗使用，具有鉴别诊断的特点，目前已在临床上大量使用。 APPELISA诊断试剂盒近年来APP耐药现象越来越常见，常用药物对该病无明显疗效。 本实验室已分离的100多种APP菌株对14种药物的敏感性测定结果表明，这些菌株仅对头孢菌素、庆大霉素和氯霉素敏感，其他11种药物无效。 随着无药物残留，对绿色食品需求的期待越来越高，抗生素在动物饲料中的应用限制也越来越严格。 严格限制抗生素在本病预防和控制等方面的应用，逐渐被禁止。 因此，疫苗接种已成为预防和控制该病的主要措施。 (四)疫苗免疫预防、灭活疫苗，目前临床应用主要是亚基疫苗和灭活疫苗。 在我国，商品化疫苗有亚单位疫苗。 由于亚基疫苗成分单一，免疫保护非常有限，不能为异源APP血清型感染提供交叉保护，而且通过物理或化学方法提取纯化蛋白，制备亚基疫苗的生物活性差，成本高，需要多次注射。 灭活疫苗具有可以降低同种血清型菌感染的死亡率、安全、不喷药、不返祖、强返、易贮藏和运输等优点。 因此，使用最多的是灭活疫苗。 猪胸膜肺炎放线杆菌血清型多，血清型间交叉免疫保护率不高，灭活疫苗来源效果也各不相同，因此必须根据病原流行情况及其菌种毒性、免疫原性来确定生产用菌种。 流行病学调查显示，我国流行的胸膜肺炎放射杆菌血清型主要为1、2和7型。 华中农业大学动物传染病研究室将自身分离鉴定的1，2和7型胸膜肺炎放射杆菌菌株按血清型分为3组，在同一血清型不同菌株间进行了各种形态、生化、毒性和免疫原性试验，毒性强，免疫原性好，组成均匀， 选择性质稳定的猪胸膜肺炎放射杆菌血清1型(JL9901株)、血清2型(XT9904株)和血清7型(GZ9903株)作为生产用菌种，开发1、2、7型三价疫苗安全性高，产生抗体水平高，免疫猪能抵抗所有血清型菌攻击。猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗是目前国内唯一获农业部认可的商品化胸疫苗兽药活字(2006)170041060、国家九五、十五科技突破难关的成果是目前国内唯一获得认可文号的胸疫苗国内分离出来的优势菌株，垄断了国内流行的主要血清型， 免疫原性强免疫保护率高的天然毒素，更全面先进的发酵技术，新型浓缩和乳化技术，猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的主要特点，细菌发酵槽系统，计算机自动记录数据，结果表明：1:疫苗最小使用日龄小猪，不同接种途径一次单剂接种的安全性， 灭活疫苗分别以2ml接种35-40天龄灭活仔猪后，仔猪无临床症状，呼吸状况、精神状况、食欲等正常无异常变化。 另外，作为TSB培养基接种的对照猪体温也不上升(P0.05 )，疫苗的安全性高。 1、安全性，结果2 :仔猪单剂量反复接种的安全性，疫苗通过颈部肌肉以2ml量反复接种的35-40日龄断奶仔猪和注射tsb培养基的对照猪在整个观察期内未出现猪胸膜肺炎的临床症状，体温也未上升。 结果3 :疫苗对35-40日龄仔猪单体重复接种的安全性，结果4 :疫苗对孕90日母猪安全，观察期间未见不良反应，最后生育成绩相同，试验组和对照组未见流产、死胎、木乃伊或弱子。 此外，疫苗不影响母猪的繁殖性能。 三价灭活疫苗表明对妊娠90天的母猪是安全的。 结果5 :孕母猪疫苗接种后生育成绩统计，仔猪免疫4周，多血清型IHA试验和1，2，7型琼脂扩散试验检测免疫猪和对照猪抗体水平。 结果疫苗免疫仔猪后4周间接凝血试验抗体水平达到1:16以上，保护性IHA抗体水平。 琼脂扩散试验检测血清1，2和7型特异性抗体，抗体均阳性，介于1:4-1:16之间。 具体结果如下： 2、抗体水平，结果：1:仔猪免疫后4周间接凝血抗体水平，疫苗免疫后4周，间接凝血试验抗体水平为1:16岁，达到保护性IHA抗体水平。 结果：2:仔猪免疫后4周抗体水平(血清1型琼脂扩散试验)，结果：3:仔猪免疫后4周抗体水平(血清2型琼脂扩散试验)，结果：4:仔猪免疫后4周抗体水平(血清7型琼脂扩散试验)，结果：仔猪免疫后间接凝血抗体消长情况，表示疫苗免疫后2周抗体变阳， 有效价格在1:16左右，4周后达到保护线水平，随后逐渐上升，60-120天处于抗体水平的高峰，直至免疫后35-40天龄的小猪免疫不同时间的抗体水平和攻击，结果3、免疫保护率、疫苗免疫小猪后间接凝血抗体检出1:16以上对照组中，用APP-1攻击毒，猪全部死亡的APP-2、APP-7攻击毒的对照组全部发病。 具体效果如下：结果1 :疫苗免疫后28天攻击毒品(APP-1攻击)，血清1型菌攻击后猪呼吸困难，血清1型菌攻击(10亿)后猪12h内4/4急性死亡，结果2 :疫苗免疫后28天攻击毒品情