实验一 酵母菌株的筛选分离_第1页
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文档简介

一、实验目的：1.通过酒母中酵母的筛选实验，熟悉微生物分离纯化、接种微生物操作实验；2.熟悉产酒精酵母的TTC显色平板等性能筛选实验；2、 实验材料与仪器：培养基：YPD培养基、MEB、TTC显色培养基；酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、TTC、0.1%吕氏碱性美蓝仪器：灭菌锅、恒温培养箱、厌氧培养箱；移液管、涂布棒，接种环，平板、三角瓶、试管（15*150mm）、硅胶塞、杜氏小倒管、纱布、报纸；3、 实验步骤：1.1 培养基的配制YPDS固体培养基（1L）：称取酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g溶于1L的水当中，分装到三角瓶中后加入2%琼脂粉，115灭菌20min；注：为抑制霉菌菌丝的生长。可在培养基中加入0.5%-1%的脱氧胆酸钠。YPD液体培养基（1L）：按YPDS配方配制，不加琼脂，121灭菌20min；TTC显色培养基：每100mlYPDS培养基中加入0.05g的TTC；1.2 酵母的分离纯化：1.2.1 梯度稀释 将酒样混匀后取1ml加入到9ml的无菌水中制成10-1浓度梯度，之后从中取出1ml再加入到9ml的无菌水当中，浓度梯度为10-2，依次往下推，分别制得10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释度的菌液；1.2.2 涂布 将稀释得到的10-2,10-3,10-4三个梯度的菌液取0.5 ml到预先倒好的TTC显色培养基平板中，沿一个方向均匀的进行涂布，然后将涂布好的平板用报纸包好避光培养，倒置于恒温厌氧培养箱中28培养2-3d。1.3 酵母的保藏将划线纯化后的酵母菌株接种在YPDS斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者，28培养1-2d，培养好后放置于4冰箱保存；四、 实验结果1、 对实验过程中所得到的实验结果进行拍照；注：左上图浓度梯度10-2，右上图浓度梯度10-3 左下图浓度梯度10-4，右下图为酵母菌株接种在YPDS斜面试管2、 记录所筛选到酵母菌株的颜色分级并进行编号； 酵母菌株的颜色随浓度梯度增加而变深，如颜色深：10-210-310-4五、思考题1、涂布之前稀释的目的？答：稀释涂布平板的目的是降低菌的浓度.浓度过高的菌会在培养基上长出过多的菌落,以至于没法挑出单菌落,那样就无法获得单一种类的菌,或者无法统计菌落数来计算菌液浓度了.2、 如何获得纯化的微生物菌株？答：1）划线分离法2）稀释分离法3）组织分离法3、 酵母菌TTC筛选的原理是什么？答：TTC（2，3，5一氯化苯基四氮哇）是一种显示剂。它对酵母的代谢产物发生呈色反应，通过它可以判断酵母中呼吸酶活力的大小，即酵母产酒精能力的高低
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