幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序(胶体金法)

幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测方法(胶体金法)1.目的可用于人体血液样本中胃幽门螺杆菌尿素酶抗体的定性检测，也可用于消化道胃幽门螺杆菌感染的临床辅助诊断。2.范围适用于幽门螺杆菌尿素酶抗体的临床检测。3.检验原则该试剂盒应用渗滤间接法原理将幽门螺杆菌尿素酶固定在硝酸纤维素膜载体上，待测血清中的幽门螺杆菌尿素酶抗体IgGY与抗原结合形成抗原抗体复合物，加入胶体金标记的小鼠抗人IgG单克隆抗体与复合物结合，根据是否形成肉眼可见的红色圆形斑点(T端)来判断结果。兔抗鼠IgG固定在硝酸纤维素膜的质控区，与胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体结合形成红色圆形斑点(C端)。4.主要部件4.1感应板：一个小塑料盒，上下4.2cm2.8cm0.7cm，中间有一个直径为0.90.05cm的小孔。小塑料盒内主要是固定有幽门螺杆菌尿素酶抗原的硝酸纤维素膜和吸水材料。4.2试剂1:0.02摩尔/升的PBS溶液，pH 7.4，含吐温-20。4.3试剂二：主要含有胶体金标记的小鼠抗人IgG单克隆抗体、稳定剂和防腐剂。5.储存条件和有效期产品应储存在2-8且不能冷冻。有效期为9个月。开箱后未使用的反应板应存放在2-8的密封袋中，并在一个月内用完。6.样本要求6.1样品采集：静脉血的采集按照临床采血技术规范进行。将收集的静脉血置于室温下的水浴中30分钟或37下15-20分钟，然后以低速(2000 rpm -3000 rpm)离心5-10分钟以分离血清。6.2样品保存：如果分离的血清不能及时检测，样品应保存在2-8的温度下。如果保存时间超过7天，样品应保存在-20以下，并应避免反复冻融，以免降低抗体滴度。6.3当明显溶血(血红蛋白浓度 1.96 g/l)、黄疸(胆红素浓度 40.1 umol/l)和高脂血症(甘油三酯浓度 7.0 mmol/l)影响血清通透性，明显增加反应膜的背景色，影响结果的判断时，此类标本不适合使用。7.检测步骤7.1向反应板孔中滴入两滴试剂1，直至完全渗透；7.2将100微升血清滴入反应板孔中，直至完全渗透；7.3向反应板孔中滴入两滴试剂1，直至完全渗透；7.4将两滴试剂二滴入反应板孔中，直至完全渗透；7.5向反应板孔中滴入两滴试剂1，直至完全渗透；7.6运行后5分钟内的判断结果。8.测试结果的判断阳性：红色圆形斑点出现在c端，红色圆形斑点出现在反应板孔的t端，对幽门螺杆菌尿素酶抗体呈阳性。阴性：红色圆形斑点出现在反应板孔的c端，没有红色圆形斑点出现在t端，对幽门螺杆菌脲酶抗体呈阴性。故障：反应板孔的C端没有红色圆点，或C端和T端没有红色圆点，表示故障。这可能是由于不正确的操作或套件故障，应重试。9.参考范围正常：阴性，异常：阳性。10.临床意义10.1本方法仅用于人体血液中幽门螺杆菌尿素酶抗体的定性检测。10.2阳性结果仅表明抗胃幽门螺杆菌尿素酶抗体的存在不能作为判断胃幽门螺杆菌感染的唯一标准，诊断应结合临床症状和其他诊断技术。根据询问的结果，如果在3-6个月内没有进行根除治疗，阳性结果就是目前的感染。如果在3-6个月内进行根除治疗，阳性结果是疑似感染，这需要其他检测方法或在一段时间内重复检测。10.3患者已感染幽门螺杆菌，其抗体也在体内存在很长时间，因此阳性10.4阴性结果表明在样品中未检测到幽门螺杆菌抗体，但不能完全排除胃幽门螺杆菌感染的可能性。可能是胃幽门螺杆菌的脲酶抗体没有出现，或者抗体水平太低而不能用该试剂盒检测。根据询问的结果，如果在3-6个月内进行治疗，则阴性结果是成功的根除治疗。如果在3-6个月内不进行根除治疗，阴性结果是幽门螺杆菌没有被感染。11.检查方法的局限性11.1本试剂仅用于检测幽门螺杆菌尿素酶抗体，不直接检测幽门螺杆菌，因此阳性结果不能确认为幽门螺杆菌感染。检测结果仅供临床参考，不能作为诊断或排除病例的依据。为达到诊断目的，对患者病情的诊断应结合对患者临床症状和体征的综合分析及其他检测结果。11.2抗体含量低的血清样本可能无法检测。一些感染幽门螺杆菌的患者不产生抗体或产生少量抗体。此时，可能会显示负面结果。11.3当试验结果与临床结果不一致时，应使用培养基进行培养或其他诊断方法。11.4在感染的初始阶段，如果不产生IgG或滴度非常低，将导致阴性结果。应提示患者在7-14天内复查。复查时，应同时检测上次采集的样本，以确定血清转阴或滴度是否明显增加。11.5对于免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，血清学抗体检测的参考值有限。12.产品性能指标12.1渗透时间：膜的渗透时间小于60秒。12.2符合率：阳性符合率和阴性符合率均为100%。12.3批内精度：阳性参考和阴性参考的检测重复性为100%。12.4批间精度：阳性参考和阴性参考的检测重复性为100%。12.5最低检测限：阳性对照品稀释至1:2，阴性对照品作为最低检测限。12.6交叉反应：本试剂盒的检测与解脲脲原体抗体阳性血清发生交叉反应，未发现与下列病原体抗体阳性血清发生交叉反应：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和克雷伯氏菌。12.7干扰试验：当样品中含有乙二胺四乙酸、柠檬酸钠、肝素等抗凝剂时，结果不受影响。当射频浓度高于350国际单位/毫升时，将出现假阳性。抗核抗体和ENA自身抗体通常不会影响检测结果。血清中的胆红素、血红蛋白和血脂在正常情况下不会影响检测结果，但当其浓度分别超过40.1微升/升、1.96微升/升和7.0微升/升时，检测结果会受到干扰，此类标本不适合使用。13.笔记13.1本产品仅用于体外测试。13.2在盒子标签上标明的有效期内使用。13.3采血后尽快分离血清或血浆，以避免溶血。只有清晰的非溶血性样本可用。13.4请将低温保存的血清或血浆样品恢复至室温，并在不重复冻融的情况下使用。13.5试验中的所有