日立高效液相色谱操作流程

高效液相操作方法,日立,双击打开此软件,开电脑，将仪器电源打开（共三个），再分别打开需使用的仪器模块，检测器最后打开，等待仪器自检完成后，打开软件。,选择需使用的检测器，点击右键,RI:示差检测器FLD:荧光检测器DAD:紫外检测器,点击右键，可以选择打开或离线打开（通常用于编辑方法和序列，处理数据）软件,新建方法,进入离线操作界面，编辑方法点击Method-New,点击Pump，设置参数,色谱柱最大耐受压,设置流动相比例,点击Sampler，设置参数,样品温度为室温时，将此温度设置为25度。其他参数无需修改,点击Oven，设置参数,设置柱温箱温度,点击检测器，设置参数,设置单个样品运行时间,检测波长在紫外区间，在此选择D2,检测波长,紫外检测器的参数设置,示差检测器的参数设置,设置单个样品运行时间,示差检测器使用前需进行冲洗，具体操作方法见后页。,荧光检测器的参数设置,点击Saveas，保存方法,选择保存文件的文件夹。如有需要，请在数据盘下新建文件夹，以名字命名，并将文件保存至此文件夹内,新建序列,进入离线操作界面，编辑方法点击Sequence-New,选择方法文件，后点击下一步,样品ID和数据文件两项均选择：日期和时间,填写运行样品数目，点击下一步,选择数据保存路径,第一个样品瓶所在样品盘位置，点击下一步,此页可不填写，直接点击下一步,此页可不填写，直接点击完成,点击Saveas,保存所建序列,仪器操作流程排气-冲洗柱前管路-连接色谱柱-采集基线-运行序列,打开软件（在线打开），点击控制，选择仪器状态，查看仪器当前状态。,若仪器出现错误请及时联系老师。绿色表示正常，红色表示仪器出错,将需使用管路插入流动相瓶内点击Turnon,打开泵打开排气阀（左转90度）点击Purge，出现下面对话框,选择管路，点击Purgeon计时5Min,点击Purgeoff.再依次选择其他需使用的管路，进行排气。排气结束请关闭排气阀,注意：为了避免盐溶液与高浓度有机溶剂混用，发生盐析出，若流动相中有盐溶液，在使用仪器前后应按照程序清洗管路和泵，避免生成沉淀，造成仪器管路堵塞。清洗方法参见后页。,1.点击ManualSet，出现左边对话框，可以设置色谱柱最大耐受压，流速及流动相比例2.设置流速3ml/min，冲洗柱前管路3.设置流速0.2ml/min，连接色谱柱4.提高流速，检查色谱柱连接是否有漏液5.关上柱温箱门,3.基线检查：点击Start,开始检查基线。在运行样品前，点击Stop，停止基线检查,1.打开方法文件，选择运行方法,2.点击Download，开始运行方法,4.单进样：点击Single多个样品:点击Sequence,打开编辑完成的序列文件,示差检测器：使用前需进行冲洗，点击Purgeon,冲洗时间30min以上，点击Purgeoff，冲洗结束。,数据处理,1.在打开数据之前，需首先打开方法文件，再打开数据文件。2.打开数据文件流程：点击文件数据打开选择数据,使用紫外检测器，需再此选择DAD-CH1通道,导出报告模板：RI和FLD通常选用“外标法”DAD通常选用“外标法CH1”,使用缓冲盐溶液作为流动相注意事项,注意：1.若使用缓冲盐溶液作为流动相，首先需将该流动相管路插入10%甲醇或乙腈溶液中，进行Purge，然后插入缓冲盐溶液中再次进行Purge，防止缓冲盐溶液遇有机溶液发生盐析出，堵塞管路。实验结束时，将使用过缓冲盐溶液的管路，插入10%甲醇或乙腈溶液中，进行Purge。2.连接色谱柱之前，使用10%甲醇或乙腈溶液，冲洗柱前管路；连接柱子后，使用5倍柱体积的10%甲醇或乙腈溶液进行过渡，或使用相同配比有机溶剂水溶液，例如，在使用40/60甲醇/磷酸盐缓冲液流动相之前，先使用5倍柱体积的40/60甲醇/纯水溶液冲洗色谱柱。实验结束时，先使用5倍柱体积的10%甲醇或乙腈溶液进行过渡，或使用相同配比有机溶剂水溶液。以250