血细胞计数板的使用

血血球球计计数数板板 后后期期整整理理：豆豆儿儿 ?培养液中酵母菌种群数?的动态?化?是新课标教材?必修 3?稳态?境?中的学 生?组实验， 该实验通过探究培养液中酵母菌种群数?的?化， 尝试建构种群增长的数学模 型并用数学模型解释种群数?的?化， 说明?约种群个体数?化的种群外部?境因素和种 群内部因素? 在该实验中，需要?定酵母菌细胞数?定细胞数目的方法有显微镜直接计数法? ?板菌落计数法? ?电?法等， 教材采用的是较?简便? 快? 直?的显微镜直接计数法? 因?，学会使用血球计数板进行准确计数，是该实验?否的关键? 虽然?同?本的教材推荐使用的血球计数板的规格?同，人教?建议使用 2mm2mm 0.1mm 方格，?教?推荐使用 1mm1mm0.1mm 方格，但是血球计数板的使用原理和方法 是相同的? 笔者通过近?来对该实验的摸索， 对血球计数板的使用和命题方面?在的一些问 题进行了?析总结? 一?血血球球计计数数板板的的使使用用原原理理 显微镜直接计数法是将小?待?样品的悬浮液置于一种特别的?有确定面?和容?的 载玻?又?计菌器?，于显微镜?直接计数，然后推算?含菌数的一种方法?血球计数 板是常用的计菌器之一? 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器， 由一块?普通载玻?厚 的特?玻?的玻?中有四条?的槽，构?个?中间的?较宽，?中间又被一 短横槽隔?两半，?半边?面刻有一个方格网?方格网?刻有 9 个大方格，?中只有中间的 一个大方格?计数室?一大方格的长和宽各? 1mm，深度? 0.1mm，?容? 0.1mm3， 即 1mm1mm0.1mm 方格的计数板?大方格的长和宽各 2mm，深度? 0.1mm，?容? 0.4mm3，即 2mm2mm0.1mm 方格的计数板?在血球计数板?，刻有一些符号和数?(?图 一)，?含义是?XB-K-25 ?计数板的型号和规格，表示?计数板? 25 个中格?0.1mm ?盖 ?盖玻?后计数室的高?1/400mm2表示计数室面?是 1mm2，? 400 个小格，?小格面?是 1/400 mm2? 计数室通常?有两种规格?一种是 1625 型，即大方格内? 16 中格，?一中格又? ? 25 小格?另一种是 2516 型，即大方格内? 25 中格，?一中格又? 16 小格?但是 ?管计数室是哪一种构?，它们都有一个共同的特点，即?一大方格都是由 1625=2516=400 个小方格组? 1?1625 型型的的计计数数板板 将计数室放大，?它含 16 中格，一般?四角?1?4?13?16 四个中方格?100 个小方格?计数?图?将?一中格放大，? 25 个小格?计数重 复 3 次，?均值?计数完?后，依?列公式计算? 酵酵母母细细胞胞个个数数?1mL=100 个个小小方方格格细细胞胞总总数数/ 100 40010000稀稀释释倍倍数数 2?2516 型型的的计计数数板板 中央大方格以双线等? 25 个中方格，?个中方格又? 16 个 小方格，供细胞计数用?图?一般计数四个角和中央的五个中方格?80 个小方格? 的细胞数?计数重复 3 次，?均值?计数完?后，依?列公式计算? 酵酵母母细细胞胞个个数数?1mL 80 个个小小方方格格细细胞胞总总数数/ 80 40010000稀稀释释倍倍数数 c d 血球计数板的构?2516? a?顶面? b?侧面? c?放大后的网格 d?放大后的计数室 ?血血球球计计数数板板的的使使用用方方法法?骤骤 使用血球计数板计数时，按照如?的实验?骤进行? 1?镜检计数室?在?样前，?对计数板的计数室进行镜检?若有污物，则需清洗，? ?后才能进行计数? 2?样品?将清洁?燥的血球计数板的计数室?盖专用的盖玻?，用?管?稀释 后的酵母菌悬液，滴于盖玻?边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防?产生 气泡， 充入细胞悬液的?以?超过计数室?面?盖玻?之间的矩形边缘?宜? 多余培养液? 用滤纸?去? 3?计数?稍待?刻?约 5min?，待酵母菌细胞全部沉降到计数室?部后，将计数板放 在载物?的中央，?在?倍镜?找到计数室所在?置后，再转换高倍镜?察?计数并记录? ?血血球球计计数数板板的的使使用用注注意意?项项 ?培养液中酵母菌种群数?的动态?化?实验是一个历时较长?7 天左右?的实验，? 前一定要做好周密的计划，定程序?定时间?定人员?天采用抽样检?法使用血球计数板 对酵母菌进行计数，在计数时?从以?几方面注意? 1?天同一时间，各组?本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录， 连续?察 7 天? 2?从试管中?培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几?，?样使酵母菌?布均 匀， 防?酵母凝聚沉淀， 提高计数的代表性和准确性， 求得的培养液中的酵母菌数?误差小? 3?如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，?当对培养液进行稀释以便于酵母菌的 计数?体方法是?摇匀试管，? 1mL 酵母菌培养液，?入?倍的无菌水稀释，稀释 n 倍 后，再用血球计数板计数，所得数值?以稀释倍数?以?小方格内含有 45 个酵母细胞? 宜?特别是在培养后期的样液需要稀释后计数? 4?活酵母有芽殖?象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即?作?两个菌体计数，若 芽体小于母细胞一半时? 1 个酵母细胞? 5?对于压在方格界线?的酵母菌?当计数同侧相邻两边?的菌体数， 一般?采?“数? 线?数?线，数左线?数右线”的原则处理，另两边?计数?计数时，如果使用 16 格25 格 规格的计数室，要按对角线?，?左?右?左?右? 4 个中格(即 100 个小格)的酵母 菌数?如果规格? 25 格16 格的计数板，除了? 4 个对角方?外，?需再数中央的一个 中格(即 80 个小方格)的酵母菌数? 6?计数一个样品要从两个计数室中计得的?均数值来计算，对?个样品?计数?次，再 ?均值?计数时?时调节焦距，才能?察到?同深度的菌体?按公式计算? 1ml?或 10mL?菌液中所含的酵母菌个数? 7?血球计数板的清洁 血球计数板使用后，用自来水冲洗，?勿用硬物洗?，洗后自行晾?或用?风机?， 或用 95%的?醇?无水?醇?丙酮等有机溶剂脱水使?燥?通过镜检?察?小格内是否 残留菌体或?他沉淀物?若?净，则必须重复清洗直到?净? 四四?关关于于血血球球计计数数板板的的命命题题 由于实验?培养液中酵母菌种群数?的动态?化?是新教材新增?的实验，在各地各类 命题中都关注了?一实验， 并对血球计数板的使用进行了命题设计? 从近?来的各类试题来 看， 试题考查的角度?同， 大多数是关于细胞数?的计算， ?有关于使用原理和方法的考查， 但有的试题明显?血球计数板的实际使用?相符合? 例 1 在用血球计数板?2mm2mm 方格?对某一稀释 50 倍样品进行计数时，发现在一 个方格内?盖玻片?的培养液厚度为 0.1mm?酵母菌平均数为 16，据?估算 10mL 培养液 中有酵母菌 个? ?参考答案? 2107? 解析一? 例 1 将整个计数室 2mm2mm 方格作?实验计数的空间， 并按照公式? a/4105 ?稀释倍数?来计算 10mL 培养液中的酵母菌的数?a ?所计数酵母菌的?均数? 血球计数板的实际操作?相符，?在有科学性错误? 例 2 通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为 1mm1mm0.1mm 方 格，由 400 个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 后再计数? 若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有 5 个酵母菌，则 10mL 该培养液中酵母菌总数 有 个? ?参考答案?稀释?2108? 解析?例 2 设计了血球计数板的规格，?考查了血球计数板的使用方法，较例 1 更科 学合理?根据公式?540010000102108 ? 例 3 检测员将 1 mL 水样稀释 10 倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量?将 盖玻片放在计数室?， 用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室， 并用滤纸吸去多余液体? 已知每个计数室由 2516400 个小格组成，容纳液体的总体积为 0?1 mm3? 现观察到图中该计数室所示 a?b?c?d?e 5 个中格 80 个小格内共有蓝藻 n 个，则? 述水样中约有蓝藻 个?mL? ?参考答案?5n105 ? 解析? 从例 3 来看， 是按照血球计数板的原理进行设计试题的， ?添?了相?的图示， 题意一目了然?按照前面所述的公式，?难得?确答案?酵母细胞个数?1mL80 个小 方格细胞总数/ 80 40010000稀释倍数n/ 8040010000105n105 ? 例 4?2008 江苏高考 31?4?在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原 液计数的做法是错误的，?确的方法是 和 ? ?5?实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，?确的方法 是 ? ?参考答案?4?摇匀培养液后再取样 培养后期的样液稀释后再计数?5?浸泡和冲洗? 解析四?例 4 ? 2008 ?江?省高考试题第 31 题的第?4?5?两小问?试题的设计 从血球计数板的实验方法入手， 需要对实验操作的?误进行判断， ?起以前关于数?的计算 的试题，更增强了操作性?实际?，对血球计数板的使用，?少学校并没有真?做，而是教 师讲解，学生死记硬背，?学生只知?一，?知?，?是导致学生答题失?的?要原 因? 综?所述，通过对血球计数板的使用和复?答题，?真?体会到，要认真对