分子生物学试题及答案

分子生物学问题及答案一、名词解释1.cDNA和cccDNA:cDNA是由mRNA逆转录酶合成的双链DNA，cccDNA是游离到染色体外的质粒双链封闭环状DNA。2 .标准折叠单元：蛋白质二级结构单元的-螺旋和-折叠可以通过各种连接多肽构成特殊几何序列的结构块，这样确定的折叠类型一般称为超二级结构。 大多数三维结构能够描述为其折叠类型，甚至它们的组合类型，因此也被称为标准折叠单位。3.CAP :环腺苷酸(cAMP )受体蛋白CRP(cAMP receptor protein )，cAMP与CRP结合的复合体称为活化蛋白CAP(cAMP activated protein )4 .回文序列： DNA片段上一段所具有的反互补序列是限制酶切部位。5.micr na :互补干扰RNA或反义RNA，与mRNA序列互补，抑制mRNA翻译。6 .核酶：具有催化活性的RNA在RNA剪切加工过程中发挥自催化作用。7 .模型体：蛋白质分子的空间结构中存在立体形状与拓扑结构非常相似的局部区域8 .信号肽：蛋白质合成过程中n末端有1536个氨基酸残基的肽片段，可诱导蛋白质跨膜。9 .弱化子：抑制操纵区与结构基因之间转录作用的核苷酸序列。10 .魔斑：细菌生长过程中氨基酸全面缺乏，细菌就会发生应急反应，停止所有基因的表达。 引起该应急反应的信号为鸟苷四磷酸(pppppp )和鸟苷五磷酸(ppGpp )。 由于PpGpp和PpGpp的作用不仅对一个或多个操作元件产生多重影响，因此他们被称为超级控制元件或魔斑。11 .上游启动子元件：是指调节启动子活性的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA和增强子、弱化子等。12.DNA探针：在已知带标记序列DNA中检测未知序列，筛选目标基因等方面得到广泛应用。13.SD序列：核糖体和mRNA的结合序列，起着控制翻译的作用。14 .单克隆抗体：决定群集只对单一抗原起作用的抗体。15 .考斯质粒：人工构建的外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16 .蓝白斑筛选：含LacZ基因(编码-半乳糖苷酶)的该酶分解显色基质X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷酶)产生蓝色，使菌株变蓝。 外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株变白，筛选重组细菌。 叫做蓝白斑滤光片。顺式作用因子： DNA中有特殊的碱基序列，是调控基因表达的基因因子。18.Klenow酶： DNA聚合酶片段，仅从DNA聚合酶总酶中去除53外切酶活性19 .锚点PCR :用于放大已知一端阵列的目的DNA。 在未知序列的一端加上聚dG的尾巴，分别以聚dC和已知序列为引物进行PCR扩增。20 .融合蛋白：真核蛋白基因与外源基因相连，同时表达翻译的原基因蛋白与外源蛋白相结合的蛋白质。二、填空1. DNA的物理图像是DNA分子的(限制酶酶解)片段的排列顺序。2. RNA酶的剪切分为(自催化)、(异体催化) 2种。3 .原核生物有(IF-1 )、(IF-2 )和(IF-3 )三个起始因子。4 .蛋白质跨膜需要(信号肽)的诱导，蛋白质伴侣的作用是(肽链自然构象上折叠的蛋白质)。5 .启动子中的元件通常分为(核启动子元件)和(上游启动子元件) 2种。6、分子生物学的研究内容主要包括(结构分子生物学)、(基因表达和调控)、(DNA重组技术)三个方面。7 .证明DNA为遗传物质的两个重要实验(肺炎球菌感染小鼠)、(T2噬菌体感染大肠杆菌)两个实验中主要论点的证据是(活体吸收的外来DNA改变了其遗传潜力)。8.hnRNA与mRNA的区别主要有两个： (hnRNA在转化为mRNA的过程中被切断，(mRNA的5 末端有m7pGppp帽子，mrna3末端有聚腺苷酸(polyA )尾巴)。9 .蛋白质组学的优点是(子单元是DNA利用的经济方法)(在蛋白质组学过程中可以减少随机错误对蛋白质组学活性的影响)(活性可以非常有效且迅速地开关)。10 .蛋白质折叠机制最初的成核理论的主要内容是(成核)、(结构的充实)、(最后的位错)。半乳糖一方面对细菌有双重作用(可以作为碳源供细胞生长) (也是细胞壁的成分)。 依赖于camp-CRP的启动子S2需要进行背景水平的永久型合成，依赖于camp-CRP的启动子S1需要调节高水平合成。 g有时转录从(S2)开始，g无时转录从(S1)开始。12.DNA重组技术又称(基因克隆)或(分子克隆)。 最终的目的是(将一个生物体的遗传信息DNA转移到另一个生物体)。 典型的DNA重建实验通常包括以下步骤提取供体生物的目标基因(或外源基因)，酶与另一DNA分子(克隆载体)连接，形成新的重组DNA分子。将该重组DNA分子转移到受体细胞中，复制保存到受体细胞中的过程称为转化。对吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。大量培养含重组DNA的细胞，检查外援基因是否表达。13 .质粒的复制类型有两种：受宿主细胞蛋白质合成严格控制的质粒(严格型质粒)，不受宿主细胞蛋白质合成严格控制的质粒(松弛型质粒)。14.PCR的反应体系应具备下列条件：a .分离的目标基因的2条链的各一端的序列互补的DNA引物(约20碱基左右)。b .热稳定性的酶： TagDNA聚合酶。c，dNTPd .作为模板的目的DNA序列15.PCR的基本反应过程有(改性)、(退火)、(拉伸) 3个阶段。16、转基因动物的基本过程通常如下：将克隆的外源基因导入受精卵或胚胎干细胞核接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性子宫完成胚胎发育，生长为后代，具有外源基因利用产生外源蛋白质的动物作为家畜，培育新的纯系统。杂交瘤细胞系的产生是(脾b )细胞和(骨髓瘤)细胞杂交而成，(脾细胞)可利用肌苷(骨细胞)提供细胞分裂功能，因此可在HAT培养基中生长。18 .随着研究的深入，第一代抗体称为(多克隆抗体)、第二代(单克隆抗体)和第三代(基因工程抗体)。19 .目前昆虫病毒的基因工程改造主要集中在棒状病毒上，出现在引进中(外来病毒蛋白基因)。 (打乱昆虫正常生活周期的基因) (修饰病毒基因)。20 .哺乳类RNA聚合酶启动子中常见的与元素TATA、GC、CAAT相对应的转化蛋白质因子分别为(TFIID )、(SP-1 )和(CTF/NF1)。21.RNA聚合酶ii基本转录因子具有TFII-D、TFII-D、TFII-D和TFII-D的结合顺序。 其中，TFII-D的功能是(与TATA案例结合)。22 .与DNA结合的转录因子多以二聚体的形式发挥作用，转录因子与DNA结合的功能区域常见以下种类(螺旋-角螺旋)、(锌指型体)、(碱性-亮氨酸紧固型体)。2-3 .限制酶的切断方式分别有(在对称轴5侧切断而产生5粘着端)、(在对称轴3侧切断而产生3粘着端(在对称轴切断而产生片段)这3种。24 .质粒DNA的三个不同排列分别是(SC排列)、(oc排列)和(l排列)。 电泳中最前面的是(SC配置)。25 .外源基因表达系统主要有(大肠杆菌)、(酵母)、(昆虫)和(哺乳类细胞表)。26 .转基因动物常用的方法有(逆转录病毒感染法)、(DNA微注射法)、(胚胎干细胞法)。三、简答1 .分别谈五种以上RNA的功能？RNA tRNA转运氨基酸核糖体由RNA rRNA核糖体组成信使RNA mRNA蛋白合成模板非均匀核RNA hnRNA成熟mRNA的前体小核RNA snRNA参与hnRNA的切割小细胞RNA scRNA/7SL-RNA蛋白质内质网定位合成的信号识别体的构成成分反义RNA anRNA/micRNA在基因表达中发挥调节作用具有核酶Ribozyme RNA酶活性的RNA2 .原核生物和真核生物启动子的主要区别是？原核生物TTGACA - TATAAT-开始部位-35 -10真核生物增强子-GC -CAAT-TATAA5mGpp起始部位-110 -70 -253 .天然质粒的人工构建主要表现在什么方面？天然质粒常常存在缺陷，因此不适合作为基因工程的载体，必须改造和构建a .加入适当的选择标记基因，如2个以上，易于选择，通常为抗生素基因。b .增加或减少适当的酶切部位，便于重组。c .缩短长度，剪切不需要的片段，提高导入效率，增加装载量。d .改变复制因子，放松紧张，多拷贝少拷贝。e .根据基因工程的特殊要求后置特殊基因要素4 .以筛选组织特异cDNA的方法为例进行说明制备2种细胞组，目标基因在一个细胞中表达或高表达，在另一个细胞中不表达或低表达，通过杂交对比发现目标基因。例如，在肿瘤的发生和发展过程中，肿瘤细胞表达不同于正常细胞表达水平的mRNA，因此可以通过差异杂交筛选与肿瘤相关的基因。 也可以利用诱导的方法筛选诱导表达的基因。5 .杂交瘤细胞系的产生和筛选？加入脾b细胞骨髓瘤细胞、聚乙二醇(PEG )促进细胞融合，在HAT培养基培养(含肌苷、氨基嘌呤、t )的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。在细胞融合物中脾脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨骨融合细胞：肌苷不可利用，但可利用叶酸还原酶合成嘌呤。 氨氨蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，无法生长。骨-脾融合细胞： HAT可生长，脾细胞可利用肌苷，骨细胞可提供细胞分裂功能。6、用双氧封端法(Sanger法)测定DNA一级结构的原理和方法是什么？原理应用核苷酸链终止剂2，3双脱氧核苷酸终止DNA的延长。 由于缺乏形成3/5/磷酸二脂键所需的3-OH，参与DNA链时，该DNA链不能进一步延长。 根据碱基对原则，每当ddNTP聚合酶需要加入正常延伸的ddNTP链中时，ddNTP就加入ddNTP，使得脱氧核苷酸链延伸可能终止的第二个加入dNTP，并允许DNA链延伸至下一个加入ddNTP 根据这个方法，可以得到以ddNTP结尾的长DNA片段。该方法分为4组ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP作出反应后，可以在聚丙烯酰胺凝胶电泳或游泳带读取DNA序列。7 .激活蛋白(CAP )对转录的正调控作用？环腺苷酸(cAMP )受体蛋白CRP(cAMP receptor protein )由cAMP和CRP结合而成的复合体称为活化蛋白CAP(cAMPactivated protein )。 大肠杆菌在葡萄糖缺乏的培养基中生长，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖(Lac )等启动子的功能。 一些依赖于CRP的启动子缺乏一般启动子的典型-35区序列特征(TTGACA )。 RNA聚合酶难以结合。CAP的存在(功能):能显着提高酶与启动子的结合常数。 主要表达以下两个方面：CAP通过改变启动子的构象和酶的相互作用，帮助酶分子正确定向，与-10区结合，发挥置换-35区功能的作用。CAP抑制RNA聚合酶与DNA中其他部位的结合，提高其与特定启动子结合的概率。典型的DNA重组实验通常包括什么步骤？a .提取供体生物的目标基因(或外源基因)，酶与另一DNA分子(克隆载体)连接，形成新的重组DNA分子。b .将该重组DNA分子转移到受体细胞中，复制保存到受体细胞中的过程称为转化。c .吸收重组DNA的受体细胞的筛选与鉴定。d .大量培养含重组DNA的细胞，检查外援基因是否表达。9 .基因文库重组筛选列举了3种方法，过程简述如下。抗生素耐药筛查、耐药插入失活、兰白斑筛查或PCR筛查、差分筛查、DNA探针许多克隆载体具有抗生素耐药基因(氨苄青霉素、四环素)。 质粒被移植到大肠杆菌中后，该菌获得耐药性，未被移植的物质不具有耐药性。 无法区分是否重组。在含有两个耐药基因的载体中，当外源DNA片段插入一个基因中，该基因失活时，分别用含有不同药物的两个平板对照筛选阳性重组子。 例如，在pucch质粒中含有LacZ基因(编码-半乳糖苷酶)的酶将作为显色基质的X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷酶)分解而产生蓝色，使菌株成为蓝色。 外源DNA插入后，L