分子生物学试题及答案(深大整理版)

一、名词说明1.cDNA和cccDNA:cDNA是mRNA通过逆转录酶合成的双链DNA。CccDNA是染色体上的游离质粒双链闭合环DNA。2.标准折叠单位：蛋白质二级结构单位-螺旋和-折叠可以通过各种连接多肽构成特殊的几何排列结构块，这种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有三层结构都可以描述为这种折叠类型，甚至是它们的组合类型，因此也称为标准折叠单位。3.CAP:cyclic adenosine(cAMP)受体蛋白cAMP receptor protein(CRP)、cAMP和CRP结合形成的复合物称为活性蛋白cAMP activated protein(CAP)4.回文序列：DNA片段的一个部分所具有的反补序列，经常是限制性的酶切部位。5.micr na:互补干扰r na或反义RNA与mRNA序列互补，抑制mRNA的翻译。核糖酶：具有催化活性的RNA在RNA的结合过程中起着自我催化的作用。7.motify:蛋白质分子空间结构中有一些特定的三维形状和拓扑非常相似的区域8.信号肽：在蛋白质合成过程中，n端有15-36个氨基酸残基的肽，诱导蛋白质的转氨酶。9.弱化者：在操作区域和结构基因之间的一部分，可以终止转录作用的核苷酸序列。10.魔法斑点：在细菌生长过程中，如果氨基酸全面不足，细菌就会发生紧急反应，停止整个基因的表达。产生此紧急反应的信号是四磷酸胍(pppppp)和五磷酸胍(ppGpp)。PpGpp和pppGpp称为超级控制器或魔法斑点，因为它们影响的不是一个或多个操纵器，而是大量的。11.上游启动子元素：在-10区的TATA ca和加强器、弱化器等，这意味着对启动子活动起某种调节作用的DNA序列。12.DNA探针：已知的序列DNA，有广泛用于未知序列、筛选目的基因等的标记。13.SD序列：核糖体和mRNA的结合序列，对翻译起到调控作用。14.单克隆抗体：只对单抗原决定基起作用的抗体。15.质粒：是一种外源DNA载体，通过保存噬菌体两端的COS区域，并由质粒连接组成。16.蓝白斑病筛选：含有LacZ基因(半乳糖苷酶编码)。这种酶分解生色基质X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖，使菌株呈蓝色)。外源DNA插入后，LacZ基因没有表达，菌株显示为白色，筛选重组细菌。称为蓝-白斑筛选。17.净作用因素：控制DNA特殊碱基序列中基因表达的基因因素。18.kle nonow酶：DNA聚合酶I大片段从DNA聚合酶I转氨酶I转氨酶中去除5-3 外体酶活性19.固定PCR:用于扩增已知端序的目的DNA。在未知序列的一端添加多边形dg的尾部，然后分别使用多边形dc和已知序列作为引物放大PCR。20.融合蛋白：真核蛋白的基因与外来基因相连接，表达翻译的原油电子蛋白与外来蛋白相结合而产生的蛋白质。二、填空1.DNA的物理图是DNA分子(限制性内切酶水解)片段的排列顺序。Rna酶的剪切分为(自催化)、(同种催化剂)两种类型。原核生物有三个起始元素：(IF-1)、(IF-2)和(IF-3)。4.蛋白质的跨膜需要(信号肽)的引导，蛋白质对的作用是(辅助肽链折叠成自然结构的蛋白质)。5.启动子的元件一般可分为两种：核心启动子元件(上游启动子元件)。分子生物学的研究内容主要由(结构分子生物学)、(基因表达和调控)、(DNA重组技术)三部分组成。7.证明DNA是遗传物质的两个关键实验是(肺炎球菌感染小鼠)，(T2噬菌体感染大肠杆菌)这两个实验中的主要论点证据是(生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜力)。8.hnrna和mRNA的区别主要有两个：(hnRNA在转换为mRNA的过程中结合在一起)、MRNA的5 端贴着m7pGppp帽子，mRNA3 端还有一条聚腺苷酸(聚利亚)尾巴。9.蛋白质多小计形式的优点包括(子键是利用DNA的经济方法)、(在蛋白质合成过程中随机错误对蛋白质活性的影响可以减少)、(活性可以很有效、很快地打开和关闭)。10.蛋白质折叠机制的第一个成核理论的主要内容是(成核)，(结构充实)，(最终重排)。半乳糖对细菌有双重作用。一方面(可用作细胞生长的碳源)；另一方面(也是细胞壁的成分)。因此，不依赖于camp-CRP的启动子S2需要背景级的永久合成。调整高水平合成需要依赖cAMPCRP的启动子S1。如果有g，则印花从(S2)开始；如果没有g，则印花从(S1)开始。12.DNA重组技术也称为(基因克隆)或(分子克隆)。最终目的是将一种生物的遗传信息DNA转移到另一种生物。典型的DNA重组实验通常包括以下阶段：提取捐赠者生物的目标基因(或外来基因)，酶连续附着在其他DNA分子(克隆载体)上，形成新的重组DNA分子。将这种重组DNA分子转移到受体细胞，在受体细胞中复制并保存。筛选和确认吸收重组DNA的受体细胞。大量培养包含重组DNA的细胞，测试是否表达雇佣军基因。13、质粒的克隆类型被宿主细胞的蛋白质合成严格控制，被宿主细胞的蛋白质合成严格控制，被宿主细胞的蛋白质合成严格控制，被称为(松弛型质粒)。Pcr反应体系必须具备以下条件：a，DNA引物(约20碱基左右)，从两个分离的基因的两端开始，序列相互补充。b，具有热稳定性的酶：TagDNA聚合酶。c，dNTPd、模板的目的DNA序列15.PCR的基本反应过程包括三个阶段：(变质)、(退火)、(膨胀)。16、转基因动物的基本过程一般包括：将克隆的外来基因作为受精卵或胚胎干细胞的核进行介绍。接种后将受精卵或胚胎干细胞移植到雌性子宫。完成胚胎发育，长成后代，具有外源基因。以生产外来蛋白质的这些动物为种轴，培养新的净值。17.杂交瘤细胞株由(脾b)细胞和(骨髓瘤)细胞杂交生成，(脾细胞)可以利用仿黄嘌呤(骨细胞)提供细胞分裂功能，因此可以在HAT培养基中生长。18.研究表明，深入的第一代抗体是(多克隆抗体)，第二代(单克隆抗体)，第三代(基因工程抗体)。19.目前昆虫病毒的基因工程改造主要集中在杆状病毒上，显示导入(外源毒蛋白基因)。(阻碍昆虫正常生活周期的基因)；(使病毒基因变形)。20.在哺乳动物RNA聚合酶启动子中，一般元件TATA、GC、CAAT对应的反作用蛋白因子分别为(TFIID)、(SP-1)和(CTF/NF1)。21.RNA聚合酶的基本转录因子为(D，a，b，e)。其中，TFII-D的功能是(与TATA框组合)。22.与DNA结合的转录因子大部分以二聚体形式作用。转录因子和DNA相结合的功能区域通常是(螺旋-角-螺旋)，(锌指母体)，(碱性-亮氨酸拉链母体)。23.限制内部酶切割为三种类型(在对称轴5侧切割会产生5粘性) (在对称轴3侧切割会产生3粘性)(在对称轴上切割会产生平面段)。质粒DNA有三种配置：(SC配置)、(oc配置)、(l配置)。在电泳中，最前面是(SC配置)。25.主要是(大肠杆菌)、(酵母)、(昆虫)和(哺乳动物细胞表)外源基因表达系统。26.转基因动物常用的方法有(逆转录病毒感染法)、(DNA显微镜扫描)、(胚胎干细胞法)。三、珍1.每个都说5种以上RNA的功能吗？运输RNA tRNA运输氨基酸；核蛋白RNA rRNA核蛋白体组成；信使RNA mRNA蛋白合成模板；不均匀核RNA hnRNA成熟mRNA前体；小核RNA snRNA参与hnRNA的连接。小细胞质RNA scRNA/7SL-RNA蛋白内质网定位合成信号识别体组成；反义RNA anRNA/micRNA对基因表达有调节作用；核酶Ribozyme RNA酶活性RNA原核生物和真核生物启动子的主要区别是什么？原核生物TTGACA - TATAAT -起始位置-35 -10真核生物增强器- GC - caat - tataa-5mmgpp-启动站点-110 -70 -253.天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？天然质粒经常有缺陷，不适合用作基因工程的载体，必须对其进行改造和构建：添加a，2个以上等合适的选择标记基因很容易作为选择，通常是抗生素基因。b，通过增加或减少适当的酶切部位，易于重组。c，缩短长度，剪切不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。d，更改复制者，松开，用较少的副本制作多个副本。e、根据基因工程的特殊要求安装特殊基因元素有举例说明如何筛选组织特异性cDNA吗？制造两种细胞群，目的基因在其中一个细胞中表达或表达高，在另一个细胞中表达不表达或表达低，然后通过杂交对比寻找目的基因。例如：在肿瘤发生或发展的过程中，肿瘤细胞显示出正常细胞表达水平和其他mRNA，因此可以通过差异杂交来筛选与肿瘤相关的基因。也可以使用诱导方法筛选诱导表达的基因。5.杂交瘤细胞株的产生和筛选？添加脾B细胞骨髓瘤细胞、聚乙二醇(PEG)促进细胞融合，HAT培养基中培养(包括黄曲霉毒素、甲氨蝶呤、t)的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合包括：脾脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能使用二次黄嘌呤，但可以通过二次途径利用叶酸还原酶合成嘌呤。甲氨蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，不会生长。骨-脾融合细胞：可以在帽子里生长，脾细胞可以利用黄曲霉素，骨细胞提供细胞分裂功能。6、用双脱酸末端终止法(Sanger法)确定DNA初级结构的原理和方法？使用核苷酸链终止剂-2，3，-脱氧核苷酸终止DNA的延伸。由于缺乏3/5/磷酸形成脂质结合所需的3-OH，一旦参加DNA链，就不能再延长这个DNA链了。根据碱基对原则，每当DNA聚合酶需要将dNMP投入正常延长的DNA链时，就有两种可能通过参与ddNTP终止脱氧核苷酸链的延长。第二是参与dNTP，继续延长DNA链，直到参加下一个ddNTP。根据这种方法，可以得到以ddNTP结尾的不同大小的DNA片段。分成4组DdAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按游泳带读取DNA序列。7、激活蛋白(CAP)对转录的积极调节作用？cyclic adenosine受体蛋白cAMP receptor proein(CRP)、cAMP和CRP结合形成的复合物称为活性蛋白cAMPactivated protein(CAP)。大肠杆菌在葡萄糖不足的培养基中生长，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖(Lac)等启动子的功能。某些CRP相关启动子缺少普通启动子的典型-35区域序列特征(TTGACA)。所以很难与RNA聚合酶结合。CAP的存在(功能):可以大大提高酶和启动子结合常数。主要展示两个方面：CAP改变与启动子的结构及与酶的相互作用，使酶分子与-10区结合，起到替代-35区功能的作用。盖子可以抑制RNA聚合酶与DNA其他部位的结合，提高与特定启动子结合的概率。8、典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？a，用于提取捐赠者生物的目的基因(或外源基因)，酶连续附着在其他DNA分子(克隆载体)上，形成新的重组DNA分子。b，将这种重组DNA分子转移到受体细胞，在受体细胞中复制并保存。这个过程称为变形。c，筛选出吸收重组DNA的那些受体细胞进行鉴定。d，大量培养包含重组DNA的细胞，判定雇佣军基因是否表达。9、基因文库构建重组体的筛选提出了三种方法，并简要介绍了过程。抗生素抗性筛选，抗性插入失活，蓝色白斑筛选或PCR筛选，差异筛选，DNA探针大部分复制载体都含有抗生素耐药基因(氨苄西林，四环素)。质粒转移到大肠杆菌后，该菌具有耐药性，转移的不具有耐药性。但是不能分辨是否重组了。在包含两个抗性基因的载体中，如果其中一个插入外源DNA片段，从而禁用该基因，则可以选择两个具有不同药物的平板对照组进行良性重组。包含LacZ基因(半乳糖苷酶编码)的pUC质粒将原色基质X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D- galactosides)分解外源DNA插入后，LacZ基因没有表达，菌株显示为白色，筛选重组细菌。10、说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程？胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES):是胚胎发育阶段的胚胎细胞，具有人工增殖并分化为其他种类细胞的功能。ES细胞培养：分离培养囊胚的内层细胞团。ES在未饲养的层中培养时分化为肌细胞、n细胞等多种功能细胞，在包含纤维素的细胞中培养时保