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文档简介
.,1,牛奶中三聚氰胺(Melamine)ELISA检测以勤邦CA301试剂盒为例,农业部农产品质量安全监督检验测试中心(呼和浩特)狄彩霞0471-5904559,.,2,内容,一、概要,二、原理,三、检测步骤,四、注意事项,.,3,一、概要,三聚氰胺(Melamine)简称三胺,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。它是白色单斜晶体,几乎无味,微溶于水、对身体有害,不可用于食品加工或食品添加物。长期或反复大量摄入对肾与膀胱产生影响,导致产生结石。检测方法:气相色谱质谱法(GC-MS)液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)高效液相色谱法(HPLC)准确;成本高、操作复杂ELISA试剂盒检测,快速、简便、准确、灵敏度高,.,4,二、原理,采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺抗原,样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚氰胺抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关,与标准曲线比较,再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样本中三聚氰胺的含量。,.,5,三、检测步骤,1.准备:试剂盒20回至室温,摇匀;配洗涤工作液20倍浓缩(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),4下保存1个月。2.编号:取需要数量微孔板,将样本和标准品对应微孔编号;3.加液:加标准品、样本20l;加酶标二抗50l;再加抗体工作液80l;振荡混匀,盖板避光反应20min;,.,6,4.洗板:孔内液体甩干,每孔加洗涤液250l,洗涤4-5次,最后用吸水纸拍干;5.显色:加显色液A、B各50l,混匀,盖板避光反应10min;6.测定:加终止液50l,混匀,在酶标仪450nm读OD值。7.结果判定:标准品、样品输入软件计算,.,7,四、注意事项,1.试剂盒选用不同,操作过程不同,请按购买试剂盒说明操作;2.室温低于20或试剂及样本未回到室温20-25,会导致OD偏低;3.每加一种试剂前要将其摇匀;4.不同批号试剂盒不要混用;,.,8,5.试剂盒2-8保存;6.0标准的吸光度值小于0.5时,表示试剂可能变质;7.加入底物液A、B后,一般显色10min,若颜色较浅可延长反应时间到15min,但不可超过20min,反之则减短反应时间;8.每种液体加入速度尽量一致、快。,.,9,1ppm=1000ppb1ppb=1
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