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文档简介
外周血片涂抹细胞的实验室解决思路 1.1 研究对象涂抹细胞在慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia, CLL）患者外周血片中最为常见, 本研究选取就诊于上海交通大学医学院附属瑞金医院门诊并被确诊为CLL患者20例, 其中女性患者10例, 年龄5068岁; 男性患者10例, 年龄5086岁。选取5例患者用于探讨不同速度和角度对涂抹细胞的影响; 15例患者样本通过添加不同比例自身血浆或胎牛血清处理后观察涂抹细胞数量变化。1.2 试剂和仪器乙二胺四乙酸二钾真空采血管BD医疗器械（上海）有限公司; 瑞氏-吉姆萨染色液（深圳贝索公司）; 血细胞分类计数使用XN9000全自动血液分析仪、配套试剂和质控品（日本Sysmex公司）; 质控在控; 推染片使用SP-10全自动推染片机（日本Sysmex公司）; 细胞识别使用DM96全自动血细胞形态学分析仪（CellaVision公司）; 胎牛血清（Gibco公司）。1.3 方法1.3.1 按不同角度及速度制片 自动推染片机分别采用20 、27 、34 3个角度及80、110、140 m/s 3个速度涂片, 每个角度或速度各平行制备1张外周血片, 做好相关标记。1.3.2 添加不同比例自身血浆处理后制片 将患者抗凝血分为2管, 1管以3 000 g离心5 min, 取血浆备用。将患者自身血浆与外周全血按照1 1、1 2、1 3、1 4的比例处理, 充分混匀后进行血涂片检查, 做好相关标记。1.3.3 添加不同比例胎牛血清处理后制片 将胎牛血清与外周血按照1 1、1 2、1 3、1 4、1 5、1 6的比例进行处理, 充分混匀后进行血涂片检查, 做好相关标记。1.3.4 全自动血细胞形态学分析仪阅片镜检计数各血涂片涂抹细胞数量 将上述已做标记的血涂片经自动推染片机进行瑞氏-吉姆萨染色, 并于全自动血细胞形态学分析仪上进行阅片, 每张玻片共计数200个有核细胞, 计算涂抹细胞的均值。2结果2.1 不同角度及速度制片后涂抹细胞数量变化比较实验发现20 、80 m/s及34 、140 m/s速度制片血膜长度不理想。本研究发现涂抹细胞数量少的样本, 受角度和速度影响小; 出现大量涂抹细胞的样本时, 增加涂片速度或角度可使涂抹细胞数量减少。CLL患者外周血白细胞分类设置27 、140 m/s较仪器默认设置值27
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