结核感染T细胞检测呼吸科

结核感染T细胞检测临床应用,北京万泰生物药业股份有限公司市场部 李灵利,1. 结核病的诊断现状,2. TB-IGRA产品介绍,3. TB-IGRA的临床应用,4. TB-IGRA检测方法及结果解释,3,结核病现状,结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(tubercle bacillus)引起的一种慢性肉芽肿性炎。以肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。也可见于全身各器官。肺外结核占整个发病率的10%-20%，死亡率占结核病全部死亡率的14.1%-17.6%。全世界约三分之一的人群感染，2014年全球结核病报告显示：2013年有900万新发病例， 150万人死亡。中国是结核病高发区，发病数居全球第二，现有600万活动性肺结核，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类传染病的前列。,电镜下的结核杆菌,结核发病机理,结核分枝杆菌（MTB）,暴露,感染,9%,复燃,注：感染后发病与否和机体易感性有关！,5-10%,HIV10%,治愈,活动性结核： 发病状态潜伏性结核感染（LTBI）：是宿主感染结核杆菌后尚未发病的一种特殊状态,未根治,COPD合并肺结核的特点结核症状不典型老年男性为多，男性为女性7倍之多痰结核菌检查涂片或培养阳性率70%PPD呈呈阴性或弱阳，结核抗体亦呈阴性或阳性X线胸片不典型，类似于一般炎症而常被误诊,对COPD合并肺结核诊断的延误，导致治疗不及时，易造成：肺部病灶痰菌量增加，传染性扩大病人体质进一步消耗，抗结核药物耐受能力差，不良反应加大免疫力进一步下降，痰菌阴转率降低，耐药菌增加病情迅速恶化，甚至危及生命，死亡率增加,尹洪云，许家琏. 慢性阻塞性肺病与肺结核的关系. 中国临床医生. 2004年第32卷第8期,矽肺患者易发生并发症, 并发症会促使矽肺病情的进展、恶化、影响预后, 也是造成矽肺患者死亡的重要原因。1990年至2010年共收治矽肺450 例, 发生并发症310 例, 已死亡140例, 全部死于并发症。,潘宏伟. 矽肺患者的死亡原因分析.中国实用医药. 2010年12月 第5卷第36期,大量流行病学资料发现，矽肺患者合并结核发生率为10%30%。矽肺患者的肺结核患病率为全国平均肺结核患病率的3.1628倍。,潜伏性结核感染的诊断皮肤结核菌素试验（TST） 10mm干扰素释放试验（IGRAs）,潜伏性结核感染 免疫学检测阳性，显示结核感染 体内有活的结核分枝杆菌，但非活动型 无疾病和症状 不传播给他人 给予药物，防止发展为活动性结核,结核诊断方法,活动性结核,结核诊断影像学方法细菌学方法病理学方法免疫学方法,有临床症状或影像学改变具传染性主要的传播源需及时治疗,TB-IGRA方法介绍,ELISA,ELISPOT,流式细胞术,IGRAsIFN-g release assay,体外刺激：RD1抗原,原理: 机体内被结核菌抗原致敏的效应T细胞，在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大量IFN- (细胞因子)。通过IFN- 的检测，判断结核感染情况。,TB-IGRA 产品特性,高灵敏度，检出率90%以上高特异性RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原全血样本，体外检测采用外周血样本，取样方便，可检测所有结核感染；体外抗原刺激保证安全性定量考察ELISA检测平台定量考察效应T细胞受刺激后-干扰素释放总量,国内外相关研究,TB-IGRA快速简便，是一种值得推广的检测方法：,张华，黄圣文，罗振元.结核分枝杆菌r-干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用.中华医学院感染学杂志 2009年第19卷第14期,国内外相关研究,廖明等对比了血IGRA、TST、抗酸杆菌、结核抗体在SCTB中的检测性能：敏感度分别为94.4%、52.8%、38.9%、41.7%；阴性预测值分别为91.7%、52.8%、48.8%、55.3%,廖明，胡克. 临床肺科杂志. 2014年9月 第19卷第9期,IGRA在矽肺合并结核病中的应用,临床应用案例,肺结核辅助诊断：某院呼吸科病人，男临床症状：发热1周，咳嗽检测结果：TB-IgG(-)，TB-IGRA（+）T-N的值是21.5pg/ml结果分析：TB-IgG灵敏度低，易漏检。临床诊断：肺结核备注：2011年，WHO建议不再使用结核抗体检测结核感染,肺外结核辅助诊断：某院感染科，女，75岁 临床症状：发热数日，胸痛，干咳检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉快结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低，TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结核。临床诊断：结核性胸膜炎,临床应用案例,IGRA方法辅助诊断结核性胸膜炎：天津市海河医院，124例受试者，包括健康对照者30名、初诊结核性胸膜炎患者37例、恶性胸腔积液患者32例、非结核性胸膜炎患者25例。结论：用IGRA方法对结核性胸膜炎诊断的敏感性、特异性和诊断准确率分别为91.9 、90.6 、91.3 ，优于ADA和TB-Ab。,杜岩青 检验医学 2012年12月第27卷第12期,临床应用案例,肺炎与肺结核的鉴别诊断：某医院呼吸内科，男，59岁临床症状：肺部有积水，高烧发热，初步认定肺炎，抗生素治疗1周不见效果，高度怀疑结核。检测结果：痰涂片（-），结核抗体（-），TB-IGRA（-）结果分析：传统结核检测检出率在20%-40%，灵敏度低。IGRA检出率在90以上，阴性排除意义高于涂片和抗体。患者继续用药3周，病情好转。临床诊断：肺炎,17,MTB与其他杆菌感染的鉴别诊断：某院呼吸内科病人，男临床症状：发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难，乏力，多汗，关节疼痛检测结果：痰涂片（-），菌培（-），肺部X射线可见肺结节，胸腔积液诊断过程：该院诊断为结核但治疗无好转，患者转院检测IGRAs（-），试管凝集实验+，布病抗体+，确诊布氏杆菌感染，与该院打官司胜诉。结果分析：由于痰涂片和菌培检出率低，阴性也未能引起重视，只凭X片和症状诊断为结核并治疗。治疗无效后，病人转院，检测IGRAs阴性，考虑排除结核，且病人为牧民，确诊布氏杆菌病。官司败诉后，该院才开始重视IGRAs检测。最终确诊：布氏杆菌病,临床应用案例,MTB与NTM的鉴别诊断：某院感染科病人，男临床症状：发热1周，咳嗽，少量痰检测结果：两次痰涂片（+），两次TB-IGRA（-），肺部X射线无异常，后经菌培鉴定为菌培（-）结果分析：痰涂片不能区分非结核分枝杆菌，造成假阳性，而TB-IGRA与菌培结果相符，对结核分枝杆菌有很好的特异性。临床诊断：鸟型分枝杆菌感染,临床应用案例,19,NTM（非结核分枝杆菌）比例增高,2000 年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ，其中90% 为非结核分枝杆菌肺病。NTM 肺病的临床表现与结核病相似， 既可有全身中毒症状，亦有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，20%-50% 的病人无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现难与肺结核病相鉴别。PPD 试验：弱阳性多见，但不能鉴别MTB和NTM感染。 细菌学检查：常规痰涂片无法鉴别MTB和NTM。培养特性：固体培养基上，NTM菌落常光滑，部分菌落有色素产生，生长迅速，且在含PNB(对硝基苯甲酸)和含TCH (噻吩二羧酸肼)选择性培养基上均可生长，而结核分枝杆菌只在TCH选择性培养基上生长。,使用抗TNF药物前排查结核的意义,06.16.2011,20,发病率 /100.000 患者/年,Dixon W G et al. Ann Rheum Dis 2010;69:522528.,Tubach et al. Arthritis 60: 1884-1894,发病率 /100.000 患者/年,潜伏性感染监控,某中学高三年级小规模结核爆发,初始病例,1例（7班）,6月初,第一批疫情,5例（7班）,8-9月,第二批疫情,10例（8例7班）,9月,对师生采血进行IGRA检测,IGRA阳性者进行预防性服药,疫情控制,自行住院,全年级师生胸透，胸透阴影预防性服药,全年级师生PPD试验,疫情发展阶段,结核病例及分布,疫情时间,疫情初处理,一起小规模结核暴发流行的调查与控制,潜伏性感染流调结果,2010年流调发现的1301例结核感染者中，有症状者740例(56.9%)，无症状者561例（43.1%）。有症状结核病患者中，60岁及以上年龄组比例高，为60.2%有症状就诊的346例肺结核患者，只有124例患者（35.8%）被诊断为肺结核，其次为气管炎（18.8%）和感冒（16.5%）等,潜伏性感染、抗结核治疗监控,定量检测干扰素释放强度，可用于持续监控：,Kobashi等利用IGRA对50例结核患者的治疗进行追踪检测：,治疗开始后，结核患者中IGRA的敏感性和反应强度均有明显的下降趋势,抗结核治疗效果辅助评估,综上，TB-IGRA： 高特异性，高灵敏性，体外，全血，定量检测应用方向：肺结核辅助诊断肺外结核辅助诊断结核感染排查潜伏性感染监控，抗结核治疗追踪,TB-IGRA的临床应用,TB-IGRA在呼吸科应用汇总,肺结核的辅助诊断，尤其是细菌学检测阴性的肺结核的辅助诊断：TB-IGRA从细胞水平上检测结核感染，检出率高，早期感染即可检出，实现早诊断早治疗。肺外结核的辅助诊断：TB-IGRA取静脉血进行检测，克服肺外结核患者痰样找不到结核菌，病灶部位取样难的问题。呼吸系统疾病与结核的鉴别诊断：发热、咳嗽、咳痰2周；咯血；胸痛等症状疑似结核，胸片/CT不能明确诊断者；抗炎治疗治疗效果不佳患者的结核排查，阴性结果在很大程度上可以排除结核。,2周以上不明原因发热病人的结核感染排查：有研究发现其中20%是结核引起的，大部分是肺外结核。高危人群的结核感染筛查：如使用生物制剂/免疫抑制剂、大剂量激素患者，HIV患者，糖尿病患者，血液病和癌症放化疗之前患者进行结核筛查，以防陈旧性结核、潜伏性结核爆发以及近期结核感染。抗结核治疗效果跟踪以及潜伏性结核定期监控：TB-IGRA结果是一个定量值，活动性结核患者随治疗进行阳性强度降低甚至转阴；潜伏感染患者若发生阳性强度明显升高，有发展成活动性结核风险。流调显示有85%90%新诊断的活动性肺结核由潜伏性结核演变而来。,已有25个国家发布了IGRAs 应用指南： 美国、加拿大、英国、巴西、法国、西班牙、意大利、德国、澳大利亚、葡萄牙、爱尔兰、瑞士、丹麦、挪威、芬兰、捷克、斯洛伐克、波兰、保加利亚、克罗地亚、沙特、 奥地利、南韩、日本、中国,潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断（美国CDC，英国NICE ，中国） 疑似结核的辅助诊断，阴性结果排除感染（中国）在所有人群中可以完全代替PPD试验（美国CDC，日本厚生省） 接受抗TNF-a治疗前必须用IGRA进行结核杆菌感染的筛查，PPD筛查不再使用（瑞士卫生署和肺科协会） 两个国际组织WHO、ECDC也发布了应用指南。万泰TB-IGRA试剂是“中华人民共和国出入境检验检疫行业标准结核分枝杆菌-干扰素体外检测方法”中唯一提到的结核检测试剂。,2013年6月,万泰TB-IGRA,北京万泰生物药业股份有限公司,国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,厦门大学,研制历经6年，2012年4月获得SFDA认证,国食药监械（准）字2012第3400557号,TB-IGRA检测方法,阴性对照管N,阳性对照管P,检测管T,培养液无刺激原,培养液刺激抗原,培养液PHA,TB特异性刺激抗原（RD1区：ESAT-6、CFP-10）,无刺激效应,非特异性刺激抗原（PHA）,评估-IFN升高水平,评估-IFN本底水平,评估T淋巴细胞活性,ELISA定量分析,TB-IGRA结果判定,T：测试培养管（T）含量值N：本底对照培养管（N）含量值P：阳性对照培养管（P）含量值,TB-IGRA结果判定,TB-IGRA检验报告单,TB-IGRA注意事项,采血管推荐使用BD或Greiner Bio-One肝素锂采血管，内毒素最少，对结果影响最小采血到分装不超过4小时，避免混血激烈/溶血等病人情况 免疫系统异常患者