实验一 有丝分裂染色体标本制片技术.ppt

实验一有丝分裂染色体标本制片技术,哈尔滨师范大学生命科学与技术学院遗传教研室,G2,背景知识,细胞周期：通过细胞分裂产生新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程。,有丝分裂的意义:,有丝分裂促进细胞数目增加，核内各染色体准确复制为二，子母细胞具有同样质量和数量的染色体，保证物种的连续性和稳定性。,有丝分裂时，染色体呈现连续的、动态的变化。,制作染色体标本的用途：,染色体可作为一个指标进行物种分类并探索物种之间的亲缘关系，如染色体数目、大小、随体、形态及特殊染色体（如性染色体、B染色体、唾腺染色体）等特点。染色体数目或结构在一定的生理、病理或外界条件下会发生改变，在临床上对疾病的早期诊断及产前遗传咨询等十分重要。新型染色体识别技术的基础：如各种显带技术、荧光原位杂交等。,染色体标本的制作方法：,滴片法：用于动物细胞，如人体外周血淋巴细胞和小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备等；压片法：用于植物细胞，如洋葱、玉米、小麦等根尖分生区细胞染色体标本的制备。,实验目的：,了解有丝分裂过程在遗传学中的意义和重要性；掌握制作有丝分裂染色体标本的压片方法；观察有丝分裂过程中染色体的动态变化。,实验原理：,各种生长旺盛的植物组织中，如根尖、茎尖、居间分生、愈伤组织等，细胞常进行着旺盛的有丝分裂。在细胞分裂的适当时期取材，并进行一定的处理，就可以在显微镜下观察染色体的变化特点和染色体的形态特征，并进行染色体计数。,由于有丝分裂的中期染色体具有典型的形态特征，并易于计数，因此为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冰冻处理(预处理)的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期。同时通过处理还可使染色体缩短，易于分散，便于进行观察研究。通过对细胞组织进行酸性水解或酶处理除去细胞之间的果胶层，并软化细胞壁，使细胞容易彼此散开，有利于压片和染色。,实验材料：,毛葱（Alliumfistulosum）根尖（2n=16）。,实验器材：,显微镜，冰箱，水浴锅，分析天平，剪刀，镊子，刀片，载玻片，盖玻片，滤纸，量筒，滴瓶，酒精灯，指管等。,试剂及配制：,0.02%秋水仙素：称取0.02g秋水仙素溶于100ml水中，在棕色瓶中保存。卡诺（Carnoys）固定液：酒精:冰醋酸=3:1（体积比），即30ml酒精与10ml冰醋酸混合。希夫（Schiffs）试剂：将0.5g碱性品红溶于100ml热蒸馏水中，使之充分溶解，待溶液冷却至50时过滤，再冷却到25时加入1mol/L盐酸（HCl）10mL和1g亚硫酸氢钠（NaHSO3）或1.5g偏重亚硫酸钠（Na2S2O5），放置暗处，静置24h后，加0.250.5g活性炭摇荡1min，过滤，溶液呈无色，装入棕色瓶中塞紧瓶塞，保存在冰箱内（04），用前预先取出，使之恢复至室温后再用。45%醋酸：45ml醋酸和55ml水混合。,实验步骤：,（实验材料准备）,根尖的培养：挑选当地种植的未经发芽抑制剂处理且已过收获后23个月休眠期的毛葱鳞茎，剥除鳞茎外干枯的表皮，将其置于盛清水的沙盘中，让清水没过鳞茎根部，每天换水。预处理：培养至根长12cm时，切取根尖，用0.02%秋水仙素暗处理35h。固定：水洗后用卡诺固定液固定24小时，水洗，转入95%乙醇或70%乙醇中保存。,（制片临时装片）,解离：取95%乙醇中保存的根尖水洗两次，用1mol/LHCl在60处理根尖8-10min后，水洗34次。染色：根尖在有盖的小瓶中加入希夫试剂染色1020min。压片：在干净的载玻片上切下根尖分生区，滴一滴45%醋酸，加盖玻片，用滤纸吸净多余的液体，一手压住盖玻片一角，另一手持竹针轻敲盖玻片至组织呈云雾状。将载玻片在酒精灯上轻烤，迅速在盖玻片上覆滤纸条，用拇指垂直按压制片。镜检及观察。,需要注意的问题：,控制好解离时间，解离不能过度，是实验成功与否的关键；每次水洗都要充分；找准根尖分生区，切片尽量要薄；烤片时不要过度，不要烤干；压片时必须用力适当，盖玻片千万不能移动，不要产生气泡；希夫试剂如呈粉红色不能使用，须重配。卡诺固定液要新鲜配制。,根尖分生区：,染色体,着丝点,染色体与染色单体,观察结果：,洋葱根尖细胞有丝分裂不同时期