清洁验证(2012GMP培训).ppt

深圳九新药业有限公司,清洁验证徐影,2020年5月30日,讲座内容,清洁验证目的法规要求什么要求清洁验证了解清洁过程方案内容标准样本类型测试方法类型与问题,2020年5月30日星期六,2,清洁验证目的,提供文件依据证明清洁程序能够有效地将产品残留和清洁剂残留去除到不会危害到病人安全的水平。,3,法规要求,中国新版GMP:第八十四条应当按照详细规定的操作规程清洁生产设备。生产设备清洁的操作规程应当规定具体而完整的清洁方法、清洁用设备或工具、清洁剂的名称和配制方法、去除前一批次标识的方法、保护已清洁设备在使用前免受污染的方法、已清洁设备最长的保存时限、使用前检查设备清洁状况的方法，使操作者能以可重现的、有效的方式对各类设备进行清洁。如需拆装设备，还应当规定设备拆装的顺序和方法；如需对设备消毒或灭菌，还应当规定消毒或灭菌的具体方法、消毒剂的名称和配制方法。必要时，还应当规定设备生产结束至清洁前所允许的最长间隔时限。,2020年5月30日星期六,4,法规要求,第一百四十三条清洁方法应当经过验证，证实其清洁的效果，以有效防止污染和交叉污染。清洁验证应当综合考虑设备使用情况、所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的性质和限度、残留物检验方法的灵敏度等因素,2020年5月30日星期六,5,欧盟法规,清洁验证12.70清洁程序通常应当经过验证。一般来说,清洁验证应当针对那些如果污染或偶然带入异物对原料药质量产生最大威胁情况或工艺步骤。例如,在早期的产中,设备清洁程序可能不需验证,在此遗留物可以在后续的精制过程中除去。12.71清洁程序的验证应当反映出设备实际使用的模式。如果有不同的原料药或中间体在同一设备中制造,并且用相同的方式对设备进行清洁,应当选用一种具有代表性的中间体或原料药来进行清洁验证。这种选择应当跟据溶解性以及不同的清洁难度,药效,毒性和稳定性计算出残留限度来进行。,2020年5月30日星期六,6,12.72清洁验证方案中应当对所要清洁的设备,程序,物料,可接受的清洁水平,监测和控制的参数,以及分析方法进行描述。该方案同样应当阐明得到样品的类型,以及如何进行取样和标识。12.73取样应当包括擦拭法,冲洗法或其他可用的方法(即,直接萃取),如果可能,同时检测可溶解或不可溶解的残留。所使用的取样方法应当能够定量测量清洁后在设备表面残留水平。在由于设备的设计和/或工艺限制(即,软管的内表面,导管,小口反应器或处理毒性物料,以及小的复杂,如微粉机和微型流化床),产品接触表面不容易接触的时候,设备擦拭取样可能不切实际。,2020年5月30日星期六,7,12.74所使用的分析方法应当经过验证,具有检测残留物或污染物的灵敏性。每一种分析方法的检测限度应当具有足够的灵敏度来检测已经制订的残留或污染接受水平。应当制订该方法的回收率水平。残留限度应当具有实用性,可操作性,可证实性,以及最有害的残留。限度可以制订在已知的原料药或其最有害成份的药理学,毒理学,或生理学活性基础上。12.75对于需要降低原料药中的的总微生物数或内毒素的工艺,或担心此类污染的其它工艺(如,用于生产无菌产品的非无菌原料药),设备清洁/消毒的研究应当着眼于微生物和内毒素污染。,2020年5月30日星期六,8,12.76进行验证后,应当在适当的间隔对清洁程序进行监测,以便保证这些程序在日常生产中有效。如果可行,应当用分析检验和目测检查来监测设备的清洁程度。允许以目测的方法测定用其他取样和/或分析方法不能测定的小区域大致的污染程度。12.8分析方法验证12.80分析方法应当经过验证,除非所采用的是相关药典或其它公认参照的标准方法。,2020年5月30日星期六,9,FDA的要求,在FDA的GMP211.67章节中规定了设备清洁验证的要求：建立书面标准操作程序（SOP），其中必须详细规定设难关备各部件的清洗过程；必须建立书面的清洗方法验证通则；清洗方法验证通则应规定执行验证的负责人、批准验证工作的负责人、验证标准（合格标准）、再验证的时间；对各生产系统或设备部件进行清洗验证之前，应制定专一特定的书面验证计划，其中应规定取样规程、分析方法（包括分析方法的灵敏度）。,FDA的要求,按上述验证计划进行验证工作，记录验证结果。做出最终的验证报告，报告应由有关管理人员批准，并说明该清洗方法是否有效。,2020年5月30日星期六,12,什么需要验证,一般来说只有对设备与产品接触的表面进行清洁的程序需要进行验证。对于产物可能转移到的非接触部件，如密封，法兰，搅拌轴，烘箱的风扇，加热装置等，应给予考虑。一般来说在连续批次生产的情况下，无需在每一批次完成后进行清洁。但是清洁间隔与方法应该被确立。PICSJUL2004,2020年5月30日星期六,13,什么需要验证:FDA“当清洁只用于同一产品的不同批次生产中（或在原料生产中同一中间体的不同批）时，公司只需要满足设备的“看的见的清洁”即可。这种批次间清洁工艺无需验证.”FDA清洁工艺的验证1993年7月,清洁验证的失败案例,1992年，FDA对一家进口原料厂发出警告，该厂使用同一台设备生产甾体及非甾体类物质，FDA认为清洁验证不当，只对前一种产品残留做了验证，但用TLC法对后一产品淋洗水检测发现了副产物及降解物的证据。,2020年5月30日星期六,14,监管要求最终的目标,降低交叉污染的风险使得产品受污染报废的可能性最小患者的负面效应可能性最小降低产品投诉的发生率降低卫生部门或其他机构检查不合格的风险延长设备的使用寿命,2020年5月30日星期六,15,化学污染，如活性成分、产品、清洁剂残留,污染类别,16,物理污染，如机械杂质、外来异物,污染类别,17,微生物污染特别注意那些具有促生长和含有大量水分的物料,污染类别,18,19,污染控制,厂房：温湿度、流型、换气次数及微生物监测设备：设计和材质的可清洁性、规定的清洁和维修规程人员：更衣、清洁和人流物料和废物流向,20,清洁等级,不同产品的批次之间Productresidue产品残留Cleaningagentsresidue,ifapplicable清洁剂残留（如适用）同一产品的批次之间Cleaningagentsresidue,ifapplicable清洁剂残留（如适用）Degradants降解物,清洗方法,手工清洗由操作人员用檫洗或用高压软管进行的清洗自动清洗由自动控制对容器及管道进行高压冲洗直至干燥的清洗半自动清洗结合以上两者的清洗过程,2020年5月30日星期六,21,清洁需注意的要点清洁速率同流速的关系,湍流公式：NRe=VD/其中：V：流速D：特征距离（管子/管道直径）：流体密度：动态流体粘度,清洁需注意的要点,湍流的清洁速率大大大于层流的清洁速率；盲管和垂直管道中的清洁液的速率要大于湍流所需的速率，通常要求大于1.52米/秒（5英寸/秒）；在设备设计时需要考虑盲管的清洁问题，通常要求L/D,Sampled大部分公司仍执行1/1000的安全因子；就像基于治疗剂量的公式一样，尽管计算出的值是“可接受”的，这并不意味着你希望下一名患者摄入该剂量。采用的安全因子的数值经常会由公司慎重决定，并且取决于生产环境的危险因素，可能受到污染的产品的风险以及残留物的性质。第6模块限定值第34页,清洁剂残留可接受限度清洁剂残留的可接受标准一般对最终淋洗水取样分析清洁剂和溶剂的总残留，瞬息的分析方法如下：TOC（总有机碳）1010-6紫外分光光度法吸光度0.05，波长范围210-360nm,限度和接受标准,2020年5月30日星期六,61,微生物残留可接受标准清洗的微生物验证应该和清洗的化学验证同步进行；棉签擦拭法：洗出液取样或压痕法采样；淋洗液法：取定量的淋洗液过滤后，取滤膜培养。,应该考虑何种微生物残余物，何时考虑?,如果您的最终产品，根据产品规格，需要限制生物负荷与内毒素，清洁验证则必须包括这两项生物负荷包括细菌，酵母菌与霉菌。它们可以在水系统与环境中出现，可能由原材料，设备与人员产生。内毒素是一种脂多糖，见于葛兰氏阴性细菌的细胞膜；当细菌死亡时释放，进入血液循环时会引起患者发热。第6模块限定值第36页,微生物与内毒素污染的特征是什么?,生物负荷是由活体生物造成的，内毒素由活体系统产生，所以致热源负荷与生物负荷水平主要取决于环境条件,设备是干燥，覆盖并密闭的吗?,环境是否为无菌环境或至少清洁生产区域以减少活体/非活体微粒水平，并对温度与相对湿度进行控制？（对于生产与清洁设备储存都适用）,环境条件由于四季更替会产生多大的变化？,就像环境监测一样，生物负荷与致热源评估不是一次,性行为,推荐做法是，应该对生物与内毒素负荷水平进行监测，设定警报与行动值，并且在每一次超过限定值后进行适当的纠正行动。,第6模块限定值第37页,微生物与内毒素污染的预防可以采用某些方法以减少残余物，方法包括：去除法（如冲洗，擦洗）与杀灭/灭活法（如化学处理，干热）杀灭微生物污染可能造成内毒素污染的可能性，除非杀灭方法同时也是一种去内毒素工艺（如干热）清洁与消毒不能在一个步骤中完成：残余物会影响化学制剂的穿透冲洗，例如常用的清洁后冲洗可能引入额外的生物负荷用于消毒的制剂往往是弱清洁剂，而清洁剂又不适于,用于残余物消毒,第模块限定值第38页,65,取样方法的选择,有以下所知的三种取样方法：SwabbingMethod棉签擦拭法RinseSamplingMethod冲淋取样法Placebomethod模拟法,66,棉签擦拭法,优点：直接对表面污染进行评估能将不溶物或难溶物从设备表面实际去除在最后数据评价中能够包括可接触但难于清洗部位的数据,67,棉签擦拭法,缺点：不易在大型设备上实施从小面积获得的结果外推至设备的整个产品接触表面不易对难接近的区域进行取样,68,棉签擦拭法,需考虑以下因素：Swabcharacterization,e.g.absorptioncapacityandinterference棉签特性，如溶剂吸收能力、干扰性Swabrecovery,e.g.70%棉签回收率，如70%Samplinglocationsandnumberofsamples取样位置和取样数量Samplesurfacearea,e.g.25100cm2取样面积，如25100cm2Swabbingtechnique,e.g.directionandnumbersofstrokes取样方法，如擦拭方向和次数Saturationandextractionsolvents浸湿和萃取溶剂,69,冲淋取样法,Advantages:优点：Easeofsampling易于取样Evaluationofentireproductcontactsurface对整个产品接触表面进行评价Evaluationofinaccessibleequipmentsoronesthatcannotbeeasilyorroutinelydisassembled可对难以接近、不易拆卸或日常生产中不拆卸的设备进行评价,70,Disadvantages:缺点：Nophysicalremovalofcontaminant不会实际去除污染物Rinsingsolventmaynotreachinaccessibleparts冲淋溶剂或许达不到一些难以触及的部件Useoforganicsolventsforwaterinsolublematerials对一些不溶于水的物质使用有机溶剂进行溶解,冲淋取样法,71,模拟法,设备清洁干燥后，在该设备内进行模拟物料处理，然后取一部份进行测试Discouragedvigorouslybyregulatoryauthoritiesdueto：法规部门强力不推荐使用此法，原因如下：Nomeanstoensureresiduesareuniformlydistributedthroughouttheequipment无人能确保残留均匀地遗留在设备整个表面Residueoflargerparticlesizenotuniformlydispersedinplacebo较大颗粒的残留不能均匀地分散到模拟物料中,72,分析方法的选择,Basicrequirements:具备以下基本要求：Appropriatesensitivitytothecalculatedlimit适宜的灵敏度，可检测到计算出的限度Practicalandrapid,asmuchaspossibleuseinstrumentationexistingincompany实用、快速，尽量使用公司现有的仪器BevalidatedinaccordancewithICH,USP,EPandChinesePharmacopoeiarequirements按照ICH、美国药典、欧洲药典和中国药典进行了验证Includearecoverystudytochallengesamplingandtestingmethod应包括回收率测试，该测试对取样方法和测试方法进行了挑战,73,分析方法的选择,SpecificMethods:特定法：ChromatographicmethodHighlyspecific,sensitiveandquantitative(e.g.LC/MS,GC/MS,HPLC)色谱法：具有高专属性、高灵敏度，并且可定量（如液质联用仪、气质联用仪、液相色谱仪）Thinlayerchromatography(TLC)Highlyspecific,moderatelysensitive,semiquantitative薄层色谱法：具有高专属性、适度的灵敏性，可半定量SpecificionmeterQuantitative,onlybeusedifactiveingredientalonepossesaspecificion特定离子计：可定量，但只有当活性成分本身拥有一个特定离子时才能采用,74,分析方法的选择,NonspecificMethods:非特定法：Spectrophotometricmethodinvisible,infraredorUVranges分光光度法（可见区、红外区或紫外区）Totalorganiccarbon(TOC)总有机碳Othermethods,e.g.pH,conductivity其他方法，如酸度、电导率,75,分析方法的验证,Shoulddemonstratethefollowings:应证实以下要素：Accuracy(recovery)andrange准确度（回收率）和范围Precision精确度Linearity线性Selectivity选择性Detectionlimit检测限度Quantitationlimit定量限度Stabilityofstandardandsamplesolution标准溶液和样品溶液的稳定性,分析方法的验证,通常清洁分析方法验证包括取样方法验证和检验方法验证棉签取样方法的验证：取样过程需经过验证，通过回收率试验验证取样过程的回收率和重现性。通常取样回收率和检验方法回收率结合进行，总回收率一般（企业可以根据实际情况确定）不低于70%，多次取样回收率的相对标准偏差应不大于20%；棉签取样过程的验证实际上是对取样棉签、溶剂的选择、取样人员操作、残留物转移到取样棉签、样品溶出（萃取）过程的全面考察。,棉签取样方法的验证（续）,验证方法如下：1）准备一块与设备表面材质相同的板材，如平整光洁的316L不锈钢板；2）在钢板上划出100100的区域；3）将5倍限度量的待检测物溶液，定量装入校验的微量注射器；4）将其溶液尽量均匀地涂布在100100的区域内；5）自然干燥或用电吹风温和地吹干不锈钢板；6）用选定的擦拭溶剂润湿擦拭棉签，按下图所示进行擦拭取样；7）重复以上规程3次；,棉签取样方法的验证（续）,8）将擦拭棉签分别放入棉签管中，加入预定溶剂5ml，超声；9）用经验证的检验方法检验，计算回收率和回收率的RSD。下图为棉签擦拭取样方法：,第一步,第二步,2020年5月30日星期六,79,淋洗液取样方法的验证,通常淋洗法限度检查不需做回收率验证：定量检查应做回收率验证，可以利用淋洗溶剂冲洗已知量（在限度附近）的分析物确定回收率，回收率通常应不低于95%；淋洗的取样方法为根据淋洗水流经设备的线路，选择淋洗线路相对最下游的一个或几个排水口为取样口。分别按照微生物检验样品和化学检验品的取样规程收集清洁程序最后一步淋洗即将结束时的水样；淋洗法样品可对冲洗液直接检测，也可对冲洗液做稀释后检测；无论直接检测还是稀释检测都应在接到样品后首先将样品同空白溶剂做视觉检查，确定是否有颜色差异和异物存在；如果有述现象发生，可直接判定样品不合格。,取样方法和取样点的确认,（2）取样点的确认通常可能擦拭设备的全部表面，因此，应该选择设备的最差区域作为取样点。这些区域应在清洁难度和残留水平方面代表着对清洁规程最大程度的挑战，例如：料斗的底部、桨拌桨叶底部和阀门的周围。如果进行微生物取样，取样计划应包括微生物的可能最差区域，例如：较难靠近的地方以及可收集水的排水区域。微生物和化学取样应在不同区域进行，测试方案中应包括设备及其取样点的描述或图表。,分析方法的验证,通常清洗分析方法分为限度检查和定量检查，不同的检查方法验证的参数也不相同。（1）回收率回收率的分析方法验证已在取样方法的验证中详细描述，不在此赘述。（2）精密度精密度系指在规定的条件下，从同一个均匀样品中，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。通常用相对标准偏差（RSD）来表示。定量检查的RSD应不大于10%。淋洗法和棉签法用于限度检查通常不需要做精密度实验。,分析方法的验证,（3）线性/范围线性系指在设计的范围内，测定结果与试样中被测物浓度呈正比关系的程度。范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。定量检查应至少测试5个浓度范围并且包含清洁的最低限和最高限度，线性的相关系数应不低于0.98%；浓度范围应达到残留物限度的50%-150%。淋洗法和棉签法用于限度检查时不需做线性/范围验证。,分析方法的验证,（4）检测限和定量限检测限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被检测出的最小量；定量限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。淋洗法和棉签法用于限度检查只需做检测限实验。通常检测限是指信噪比为3：1时被分析物的浓度，定量限是指信噪比为10：1时被分析物的浓度。,分析方法的验证,（5）专属性专属性系指在其他成分（如：杂质、降解产物、相似物等）存在下，分析方法能准确测出被测物的特性。评价空白溶剂、分析系统、棉签本身是否有干扰。通常采用的验证方法为：进针空白溶剂评价溶剂干扰、进样量为0评价系统干扰、进针棉签浸泡的溶剂评价棉签干扰。（6）样品溶液稳定性通常样品室温或5冰箱冷藏放置24-72小时，测定结果应不低于原值的90%。,分析方法的验证,（7）系统适用性定量检查测定时，应制备2份对照品，对照品一致性检查应为不超过5%；对照品的RSD不应超过10%。（8）限度检查时溶液的进样顺序限度检查测定时测定顺序依次为空白溶剂、样品、对照品。下面是限度检查和定量检查时所需验证的参数：,限度检查和定量检查时所需验证的参数,检查方法,参数,88,计划及执行,一般来说，以下部门参与清洁验证：Production生产部Engineering工程部Research&Development研发人员Validation验证人员QualityControl质量控制QualityAssurance质量保证,89,计划及执行,应编写一个综合的清洁验证主计划，其至少包括以下内容：Purpose目的Overviewofsite/facility/area厂房/设施/区域的概括描述Overviewofmanufacturingprocesses生产工艺概括描述Overviewofcleaningmethods清洁方法的概括描述Responsibilitiesofvariousdepartments各部门的职责Cleaningvalidationpolicy清洁验证的策略,90,计划及执行,清洁验证主计划应至少包括以下内容（续）：Listofequipmentsandproducts设备和产品明显表Productandequipmentgroup,ifapplicable产品和设备组（如适用）Worst-caseproductandequipment,ifapplicable最坏条件产品和设备（如适用）Calculationofcontaminationlimit污染限度计算Executionplanning执行计划,91,计划及执行,应对需要验证的每个设备编写一个清洁验证方案，主要内容如下：Purposeandscope目的和范围Responsibility责任Equipmentdescription设备描述Cleaningprocedure清洁程序,。,1、生产结束至开始清洁的最长时间（也称待清洁设备保留时间）；2、已清洁设备用于下次生产前的最长存放时间（也称洁净保留时间）；3、连续生产最长时间,92,计划及执行,清洁验证方案的主要内容如下（续）：Samplingprocedureandlocationdiagram取样程序和取样位置示意图Analyticaltestprocedureandmethodvalidation分析测试方法和方法验证Acceptancecleaninglimit接受的清洁限度Acceptancecriteriaforvalidation接受的验证标准,编写一份清洁验证总结报告。该报告详细描述了清洁验证的背景以及对所