试验动物操作技术

实验一试验动物操作技术,覃琼玉环境与公共卫生学院,【目的与要求】,1,了解常用实验动物的特点；,2,了解实验动物学的基本理论；,3,理解动物选择的基本原则；,4,掌握常用的动物实验基本操作技术：动物的捉拿、固定、性别鉴定、标记、给药、生物材料的收集、处死方法。,【实验条件】,实验器材,采血注射器，注射针头，手术剪，手术镊子，毛细玻璃管内径45mm，试管，大剪刀，脱脂消毒棉球，帆布手套，代谢笼，大鼠小鼠固定盒。,实验试剂,苦味酸饱和酒精溶液，3%戊比妥钠(30mg/ml)。,实验动物,小鼠，家兔,实验内容和方法,一、实验动物的捉拿与固定,三、实验动物的给药方法,四、实验动物的取血方法,五、实验动物的处死方法,二、实验动物的标记与性别鉴定,方法步骤：1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起，放在格板或铁笼上。2、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后、颈背部的皮肤，将小鼠提起。,（一）小鼠,一、实验动物的捉拿与固定,3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹住小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条直线。4、用左手无名指压住小鼠背部的皮肤，小指压住小鼠的尾巴根部。5、松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。,此法适用于肌注、腹腔注射、灌胃等,其它固定法：在进行解剖、手术、心脏采血、尾静脉注射时，可将小鼠用线绳捆绑在木版上，或固定在尾静脉注射架及粗试管中。,家兔驯服不咬人，但四肢的爪尖锐，挣扎时容易抓伤人。抓取保定方法是用右手把两耳拿在手心并抓住颈后部皮肤，提起家兔，然后用左手托住臀部。,（二）家兔,家兔的捉拿,需要进行手术时，可将家兔固定在兔实验台上，四肢固定，门齿用细绳栓住，固定在实验台的铁柱上。,家兔的固定,二实验动物编号的标记方法,颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）：红色：0.5%中性红或品红溶液黄色：3-5%苦味酸溶液（水）80-90%苦味酸酒精饱和溶液咖啡色：2%硝酸银黑色：煤焦油的酒精溶液,大小鼠标记方法（单色法n10）,单色法标记原则：单色法编大于10的号码时，我们规定顺时针旋转，后一位必需大于前一位数，例如：可以编，12，13，1419，但不能编10，11，20，21，22，30，31，32，33，等，以此类推。100以内最大能编89号。,大小鼠标记方法（双色法n10）,红色表示十位数：头部染红色为10左前肢为20左腰部为30黄色表示个位数。,其它标记方法,烙印编号法：体内埋号编号法：耳孔编号法：挂牌编号法：,实验动物的性别鉴别,药理学实验常用的动物中，较大的动物(如家兔、猫、犬等)可以从生殖器分辨其性别，而较小的动物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性别鉴别，通常以肛门与生殖孔之间的距离来判断，距离近者为雌性，距离远者为雄性。,小鼠（1）灌胃：用左手固定鼠，右手持灌胃器(安好灌胃针并已吸好药物)。将灌胃针从鼠的嘴角插入口腔，压迫鼠的头部，使口腔和食管成一直线。,二、实验动物的给药方法,轻轻转动针头刺激鼠的吞咽，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食管，如小鼠挣扎厉害，退出灌胃针，待小鼠安静下来，重新插入。小鼠常用灌胃量为0.10.2ml/10g。,三、实验动物的给药方法,左手抓取并固定好小鼠，将腹部朝上；右手持注射器将针头在下腹部腹白线偏左或偏右的位置（避开膀胱），从下腹部朝头方向几乎平行地刺入皮下，进针35mm，再使针头与皮肤呈45角斜穿过腹肌；,（2）腹腔注射,当针尖穿过腹肌进入腹腔时，有落空感，然后固定针头，保持针尖不动，回抽，无回血，无肠液，便可缓缓推入药液。小鼠的一次注射量为0.10.2ml/10g体重。,耳缘静脉注射：(1)将兔放在保定架内保定。(2)酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳缘静脉充盈。(3)用左手食指和中指夹住兔的耳缘静脉的近心端，拇指绷紧静脉的远心端，无名指和小指放在耳郭下作垫。(4)右手拿注射器，针尖的斜面朝上，将针头从远心端插入血管，放松对静脉近心端的压迫，回抽有血即可注射，拔针后用棉球止血。,家兔,四、实验动物的取血方法,小鼠1、剪尾取血法：用酒精涂擦或用温水浸泡尾巴使血管扩张，剪断尾尖后，尾静脉血即可流出，用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球压迫止血。,左手持鼠，拇指与食指抓住颈部皮肤；采血时左手拇指和食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眼球后静脉丛充血，眼球外突。右手持毛细管（0.51.0mm），与鼠面呈450夹角，从内眦部正中稍下方刺入沿内下眼眶壁，向眼球后推进23mm，旋转毛细管，切开静脉丛，血液自动进入毛细管；,2、眼眶静脉取血：,d）拔出毛细管，放松手压力，出血可自然停止。小鼠每次采血量约为0.2-0.3mL。,心脏取血：1）将动物仰卧在兔板上，剪去心前区毛；2）用碘酒、酒精消毒皮肤。用左手触摸胸骨左缘第34肋间隙，选择心脏跳动最明显处作穿刺点；3）右手持注射器，将针头插入胸腔，通过针头感到心脏跳动时，再将针头刺进心脏，然后抽出血液。,家兔,小鼠颈椎脱位法：术者左手持镊子或用拇指、食指固定小鼠头后部，右手捏住鼠尾，用力向后上方牵拉，听到鼠颈部喀擦声即颈椎脱位，脊髓断裂，鼠瞬间死亡。家兔空气栓塞法：由耳缘静脉注