2019_2020学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养课件新人教版选修1.pptx

,专题2微生物的培养与应用,课题1微生物的实验室培养,1概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其_的营养基质。,一、培养基,基础梳理,营养物质,生长繁殖,液体,凝固剂,固体,3成分：(1)主要成分：水、_、氮源、_。(2)其他成分：还需要满足微生物生长对_、特殊营养物质(如维生素)以及_的要求。,碳源,无机盐,pH,氧气,(3)1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成：,碳源、氮源、磷酸盐和维生素,碳源、氮源和维生素,无机盐,(4)某些微生物生长的特殊需求：,维生素,酸性,中性或微碱性,无氧,二、无菌技术,1目的：获得_培养物。2关键：防止_的入侵。,纯净,外来杂菌,3两种无菌技术的比较：,温和,强烈,部分,所有,煮沸,巴氏,化学药剂,紫外线,灼烧,干热,高压蒸汽,三、培养基的制备,1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤：,配方,迅速,盖上瓶盖,蛋白胨,氯化钠,蒸馏水,高压蒸汽,干热,50,酒精灯火焰,2倒平板的操作程序：,(1)将_的培养皿放在_的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。(2)右手拿锥形瓶，使瓶口_。(3)用左手将培养皿打开一条_的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。(4)等平板冷却凝固后，将平板_。,灭过菌,火焰旁,迅速通过火焰,稍大于瓶口,倒过来放置,四、纯化大肠杆菌,想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的_，即获得较纯的菌种。1平板划线法：(1)原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面_的操作，将聚集的菌种逐步_到培养基的表面。,菌落,连续划线,稀释分散,(2)步骤：接种环灭菌：将接种环放在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。取菌种：a在酒精灯_冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。b将试管口通过_达到消灭试管口杂菌的目的。c将已_的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。d将试管口_，并塞上棉塞。,火焰旁,棉塞,火焰,冷却,通过火焰,平板划线：a将皿盖打开一条缝隙，把沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划_条平行线，盖上皿盖。注意_。b灼烧接种环，冷却后，从第一区域_开始往第二区域内划线。重复以上操作，完成三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与_相连。,三到五,不要划破培养基,划线的末端,第一区划线,培养：将平板_，放入培养箱中培养。2稀释涂布平板法：(1)原理：将菌液进行一系列的_，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。,倒置,梯度稀释,(2)步骤：系列稀释操作：,a101106试管中分别盛有_水。b用移液管吸取_培养的菌液注入101倍稀释的试管中，得到稀释菌液。c从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液注入102倍稀释的试管中。依次类推，完成菌液的稀释。d移液管要经过灭菌，并且操作应在_附近完成。,9mL,1mL,酒精灯火焰,涂布平板操作；a涂布器消毒：将涂布器浸在盛有_的烧杯中b取菌液：取少量菌液滴加到_表面c涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，_810sd涂布平板：用涂布器将_均匀涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀,酒精,培养基,冷却,菌液,五、菌种保藏,频繁使用,长期保存,固体斜面,液体,4,灭菌,1培养基中碳源物质不可能同时是氮源。解析有些碳源可同时是氮源。答案,即时反馈,2培养基中只要有碳源、氮源、无机盐和水就能满足微生物的生长需要。解析培养基中一般含有碳源、氮源、无机盐和水，但对于某些微生物来说，还需要特殊营养物质才能满足其生长需要。答案,3微生物纯净培养的关键是无菌技术。解析微生物纯净培养的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕如何避免杂菌的污染展开。答案,4培养基倒平板后要进行高压蒸汽灭菌。解析配制培养基要经高压蒸汽灭菌后才能倒平板。答案,5倒平板操作中，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置。解析平板冷却后倒置有利于培养基表面水分子迅速挥发，还能避免培养皿的皿盖上凝结的水滴入培养基。答案,6平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下一个区域。解析划完一个区域后，接种环上残留有部分菌种，要经灼烧灭菌后才能再划下一区域。答案,7平板划线操作中，接种结束后灼烧接种环的目的是杀死接种环上原有的微生物。解析接种结束后灼烧接种环的目的是及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。答案,1培养基的成分与作用：(1)试根据微生物的同化作用类型将微生物进行分类。提示：可分为自养型微生物和异养型微生物。,知识点一培养基与无菌技术,互动探究,(2)试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点。,糖类等有机物,NH3、硝酸盐等无机物,尿素、蛋白质等有机物,(3)牛肉膏蛋白胨培养基。牛肉膏蛋白胨培养基可为微生物提供什么营养物质？提示：牛肉膏和蛋白胨都可为微生物提供碳源和氮源。牛肉膏蛋白胨培养基中主要提供碳源和氮源的物质各是什么？提示：主要提供碳源的是牛肉膏；主要提供氮源的是蛋白胨。,2消毒和灭菌技术：(1)消毒和灭菌的原理是什么？提示：都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。(2)消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？提示：灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅杀死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。,(3)消毒和灭菌是否适用于所有的生物和物品？提示：不是，无菌技术既要考虑效果，又要考虑操作对象的承受能力。例如，活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。(4)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？提示：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,(5)选择以下材料或用具所需的无菌技术。吸管培养细菌用的培养基培养皿实验操作者的双手烧瓶接种针试管接种环玻璃棒消毒：_灼烧灭菌：_干热灭菌：_高压蒸汽灭菌：_,(6)注射药液前，常用酒精擦拭注射部位，这是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？提示：酒精擦拭属于消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。,1无菌技术具体选择消毒还是灭菌需要考虑两点(1)灭菌的效果比消毒要好。(2)活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。,核心归纳,2无菌技术主要操作要求注意三项(1)实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。(2)实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作。(3)避免已杀菌处理材料再次污染。,1下列关于微生物的营养，说法正确的是A同一种物质不可能既作碳源又作氮源B凡是碳源都能提供能量C除水以外的无机物仅提供无机盐D无机氮源也可能提供能量,对点训练,解析对一些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2都是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是氨，氨为无机氮源，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。答案D,2在微生物的培养过程中对操作者的双手、培养基、培养皿、接种环、超净工作台的处理方法依次是A酒精消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒B酒精消毒、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒C紫外线消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒D酒精消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、干热灭菌、酒精消毒,解析消毒是使用较为温和的理化方法，杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，适用于实验操作的空间、操作者的衣服和手、食品等；灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，适用于微生物的培养器皿、接种用具和培养基等。据此可知：在微生物的培养过程中对操作者的双手、培养基、培养皿、接种环、超净工作台的处理方法依次是酒精消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒，A项正确，B、C、D三项均错误。答案A,1玻棒搅拌的目的：填表比较溶化时两次使用玻棒搅拌的目的：,知识点二制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,互动探究,促使蛋白胨和氯化钠溶解,防止琼脂糊底而导致烧杯破裂,2.倒平板时的注意事项：(1)培养基灭菌后，需要冷却至50左右时，才能倒平板的原因是什么？你用什么办法来估计培养基的温度？提示：琼脂是一种多糖，在98以上熔化，在44以下凝固。倒平板时高于50则会烫手，低于50时若不及时操作，琼脂会凝固。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,(2)分析下图思考：,如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,如图二所示，从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是_。(3)培养基制备是否合格的判断方法是_。,平板冷凝后，皿盖上会,凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高,，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好,地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造,成污染,未接种的培,养基在恒温箱中保温一段时间后，如果无菌落生,长，说明培养基制备成功、合格，未受到污染,合格培养基的制备要点(1)准确计算、称量配方中的各种成分。(2)溶化时不要导致焦糊现象。(3)灭菌要严格，灭菌后的操作都要进行无菌操作。,核心归纳,3关于牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述正确的是A牛肉膏和蛋白胨都能提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素B牛肉膏蛋白胨培养基需经高压蒸汽灭菌后调节pHC该培养基配方中，有机物含量多、无机盐含量少D该培养基中加入少量水即可制成液体培养基,对点训练,解析蛋白胨不能提供磷酸盐，A错误；牛肉膏蛋白胨培养基应先调pH再经高压蒸汽灭菌，B错误；牛肉膏蛋白胨培养基有机物含量多，C正确；固体培养基中去除琼脂即可制成液体培养基，D错误。答案C,4关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是A将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯溶解B等培养基冷却50左右时进行倒平板C待平板冷却凝固510分钟后将平板倒过来放置D操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌,解析将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热，A正确；待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，B正确；待平板冷却凝固约510min后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，C正确；制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，D错误。答案D,1平板划线操作注意事项：(1)平板划线法接种菌种时，可防止杂菌污染的操作：接种前_。划完一个区域后，_。,知识点三纯化大肠杆菌,互动探究,将接种环放在酒精灯火焰上灼烧,将接种环灼烧，再划下一区域,接种环沾取菌液时，_。划线时_。(2)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是：_。,要将试管口、棉塞等通过火焰,将培养皿打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,避免接种环温度太高，杀死菌种,(3)平板划线操作时，需要对接种环灼烧灭菌，填表比较下列灼烧灭菌的目的。,避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,杀死上一次划线结束后残留在接种环上的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端,杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者,(4)在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示：划线后末端含有的细菌数目较少，每次从上一次的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。,(5)为何最后一次划线不能与第一次划线相连？提示：在最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。,2稀释涂布平板操作注意事项：(1)涂布平板的所有操作为什么都应在火焰附近进行？提示：在酒精灯火焰旁操作可以保证无菌，防止杂菌污染。,(2)操作结束后，要将一个末接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养的原因是_。,培养未接种培养基的作用是对照。未接种的培养基在恒温箱中保温12_d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；如果有菌落生长，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染，需要重新制备,两种接种方法的比较,核心归纳,5关于平板划线法、稀释涂布平板法叙述错误的是A均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面B获得的每个菌落均是由一个细胞繁殖而来的子细胞群C都应在酒精灯火焰附近进行操作，以防止杂菌污染D稀释分散菌种的原理不同，均能达到分离纯化大肠杆菌的目的,对点训练,解析将微生物接种到固体培养基中的方法通常为平板划线法和稀释涂布平板法，A正确；用稀释涂布平板法时，如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能是由一个细菌细胞繁殖形成的，B错误；平板划线法