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DNA琼脂糖凝胶电泳,姓名：徐秀倩学号：3160481导师：吴小芹,实验原理,琼脂糖为链状多糖绳状琼脂糖束大网孔型凝胶分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pHDNAPi，DNA带负电荷，迁移率与分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA线状DNA开环DNA,不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围,琼脂糖浓度（%）分离范围（kb）0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-3,琼脂糖凝胶中DNA的观察,溴化乙锭（EB）DNA：紫外光下红色荧光,主要实验器材,电泳槽结构,操作步骤,琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相,溶胶,准备胶槽,凝胶冷却至50C，加EB至终浓度0.5g/ml,铺胶,凝胶凝固后取出梳子,加缓冲液,准备样品,点样,电泳,注意观察溴酚蓝染液的迁移,紫外灯下观察电泳结果,照相,.,相关实验,对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识,.,琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的基本原理,DNA为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动由于不同DNA分子在同一凝胶中迁移速率不一样，电泳一段时间后可将其分开。,.,材料,铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组DNA，按常规提取，置-20保存备用。Agarose、限制性内切酶EcoR为上海生工生物工程有限公司产品。从凝胶中小量回收DNA片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品，1kbDNALadder为MBI产品。,.,方法,琼脂糖凝胶电泳用1TAE配制0.8%琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为1TAE，电压为5V/cm，电泳1h，用溴化乙锭或LIGHTBLUEDye显色。,.,结果,电泳后在日光下(LIGHTBLUEDye染色)或在紫外灯下(溴化乙锭染色)切取含“单一”目的DNA分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。,.,在3个大的目的DNA片段1、2和3(分别约为10、7、4.5kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5kb到100bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUEDye显色)分别切取含有单一目的片段
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