有关物质分析方法验证方案

*制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 1 页页 共共 12 页页 8 *原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 20*年*月 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 2 页页 共共 12 页页 验证方案的起草与审批验证方案的起草与审批 验证小组成员验证小组成员 部门人员职责 验证小组组长验证小组组长 部门人员职责 负责组织起草验证方案并按批准方案组织实施； 督促验证人员做好记录；负责各阶段验证结果 汇总及评价、组织起草验证报告；组织相关培 训 方案审核方案审核 审核签名及日期 验证委员会 方案批准方案批准 批准人批准日期 方案实施日期：方案实施日期： *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 3 页页 共共 12 页页 目目 录录 1.验证目的验证目的.4 2.方法简介与确认范围方法简介与确认范围.4 3.标准品、供试品标准品、供试品.4 4.风险评估风险评估.4 5.验证的可接受标准验证的可接受标准.4 6.验证步骤验证步骤.4 6.1 系统适应性系统适应性.4 6.2 专属性专属性.6 6.3 检测限与定量限检测限与定量限.8 6.4 线性线性.9 6.5 准确度准确度.9 6.6 精密度精密度.10 6.6 范围范围.10 6.7 耐用性耐用性.10 6.8 样品测定样品测定.11 7.偏差偏差.11 8.风险的接收与评审风险的接收与评审.11 9.再验证再验证.11 10.确认结果评审和结论确认结果评审和结论.11 11.更改历史更改历史.12 12. 附录附录.12 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 4 页页 共共 12 页页 1. 验证目的验证目的 根据法规的要求，采用非药典或其它法规未收载的分析方法应进行验证，证明采用 的方法适合于相应的检测要求。 这个验证方案的目的是为验证提供具体方法参数、可接受标准和研究步骤。 2. 方法简介与确认范围方法简介与确认范围 *原料有关物质检测方法为自行开发的液相室色谱方法。为确保方法的准确性和可 行性，为日常检测方法提供依据，现对该方法进行验证。方法验证必须按照验证方案进 行，此次验证方案提供*原料含量分析方法验证验证，包括：专属性、精密度、线性、 范围、准确度、检测限&定量限、耐用性。 3. 标准品、供试品标准品、供试品 3.1 标准品 名称批号来源 3.2 供试品 名称批号来源 4. 风险评估风险评估 按照质量风险管理规程 ，质量控制部和质量管理部共同对分析方法进行了风险评 估，确定了需进行方法确认的项目。具体见下表： 风险 因素 风险可能影响效应 现有控制措 施 SPDRPN 风险 级别 建议采取措施 专属性 不具有 专属性 分离度不好， 影响杂质定量 每次试验测试 分离度 33327 中 首次使用前， 对专属性进行 验证 定量限 定量限 小的杂质不能无 33327 中对该方法的定 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 5 页页 共共 12 页页 与检测 限 高被检出量限进行验证。 精密度 精密度 差 不同时间或人 员测定的结果 不一致 每次测试前进 行系统适用性 测试 33327 中 首次使用前， 对精密度进行 验证 准确度 回收率 低 杂质结果不准 确 无 33327 中 首次使用前， 对准确度进行 验证 线性 线性不 好 杂质结果不准 确 无 33327 中 首次使用前， 对线性进行验 证 范围范围窄 浓度超过范围 后结果不准确 无 33327 中 首次使用前， 对范围进行验 证 耐用性 耐用性 差 参数微小变化 对结果影响很 大 无 33327 中 首次使用前， 对耐用性进行 验证 风险评估人： 评估日期： 5. 验证的可接受标准验证的可接受标准 项目可接受标准 专属性空白无干扰，主峰与相邻峰之间的分离度不小于 1.5，峰纯度应不小于 0.990. 检测限与定量限0.05% 线性R0.999 准确度回收率在 0.05%质量指标的 140%范围内 精密度重复性 RSD%10.0% 中间精密度 RSD%10.0% 精密度：两组数据平均检测结果的相对偏差 20.0% *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 6 页页 共共 12 页页 范围应至少为指标的 80%120% 耐用性评估柱温、流速、色谱柱、缓冲盐 pH、有机相比 例、流动相比例、溶液放置时间对检测结果的影响 6. 验证步骤验证步骤 6.1 系统适应性系统适应性 分离度测试液：取*产品分离度标准品 5mg，置于一比色管中，加稀释液 10ml 溶解， 在 95下水浴加热 30 分钟，放冷。 标准液：取*产品标准品25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度；精密移取1ml，置于一100ml量瓶中，用稀释液稀释至 刻度。 取分离度测试液进样，记录色谱图，*产品与*-3异构体之间的分离度应不小 于2.0。 取标准液进样，记录色谱图，*产品主峰拖尾因子应不大于 2.0，理论塔板数应不 低于 3000；标准液连续进样 6 次，主峰面积的相对标准偏差应不大于 5.0%，保留时间的 相对标准偏差应不大于 1.0%。 6.2 专属性专属性 a) 溶剂空白：取空白进样，记录色谱图，溶剂对测定应无干扰。 b) 样品液：取本品25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀 释液溶解并稀释至刻度。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰 纯度应不小于0.990。 c)杂质1定位溶液：取杂质1约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 d)杂质2定位溶液：取杂质2约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 e)杂质3定位溶液：取杂质3约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 7 页页 共共 12 页页 f)杂质4定位溶液：取杂质4约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 i)杂质5定位溶液：取杂质5约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 j)杂质6定位溶液：取杂质6约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 k)杂质7定位溶液：取杂质7约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 l)杂质8定位溶液：取杂质8约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 m)杂质9定位溶液：取杂质9约25mg，精密称定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻 度。主峰峰纯度应不小于0.990。 n)杂质 10 定位溶液：取杂质 10 约 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度。移取 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用稀释液溶 解并稀释至刻度。主峰峰纯度应不小于 0.990。 o) 高温破坏试验：取在 60加热 10 天的样品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶 中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得高温破坏样品溶液。进样 分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂 质的变化。 p) 高湿破坏实验：取在相对湿度为 90%5%的条件下放置 10 天的样品 25mg，精密 称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得高 湿破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应 不小于 0.990,记录各杂质的变化。 q) 强光破坏试验：取经取经总照度不低于1.2106Lux.hr 强白光,近紫外能量不低于 200w.hr/m2破坏的的样品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 8 页页 共共 12 页页 用稀释液溶解并稀释至刻度，即得强光破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间 的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。 r) 酸破坏试验：取样品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 盐酸溶液 1.00ml，25下放置 24 小时，然后用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得酸破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂 质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。 s) 碱破坏试验：取样品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 1.00ml，25下放置 24 小时，然后用 0.1mol/L 盐酸溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解， 然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得碱破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之 间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。 t) 氧化破坏试验：取样品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 10%过氧化氢溶液 1ml，25 下放置 24 小时，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度，即得氧化破坏样品 溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1.5，主峰峰纯度应不小于 0.990,记录各杂质的变化。 i)根据杂质 110 的定位溶液和*标准品溶液的主峰峰面积，计算响应因子，以* 标准品为 1.0 计，计算各杂质的相对响应因子。 6.3 检测限与定量限检测限与定量限 a) 定量限：取*产品标准品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度；用稀释液分步稀释成一定浓度的溶液，进样，获 得的色谱图中，信噪比(S/N)为(1020):1 时，相应的浓度即为定量限浓度。 定量限精密度：配制 6 个相同浓度的定量限溶液进样，主峰保留时间的相对标准偏 差应不大于 2.0%，峰面积的相对标准偏差应不大于 5.0%。定量限应不大于 0.05%。 定量限准确度： LOQ 储备溶液：根据 LOQ 测试结果配制 LOQ 储备溶液，浓度为 LOQ 浓度的 5 倍。 LOQ 浓度杂质标准溶液：移取杂质标准储备溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相 稀释至刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。同法配制 3 个。 供试液：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后 用稀释液溶解并稀释至刻度。同法配制 3 个。 LOQ 回收率测试液：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ 储备液 5.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的 LOQ 浓度)。同法配制 3 个。 分别取 LOQ 浓度杂质标准溶液、供试液进样，计算杂质标准的单位浓度峰面积和供 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 9 页页 共共 12 页页 试液中所含杂质的单位浓度峰面积。LOQ 回收率测试液各进样 3 针，计算回收率，每个回 收率及平均回收率应为 80120%，各回收率的相对标准偏差应不大于 15%。 回收率(%)=计算浓度100%/实际浓度。 b) 检测限：取*产品标准品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀释液溶解并稀释至刻度；用稀释液分步稀释成一定浓度的溶液，进样，获 得的色谱图中，信噪比(S/N)为(35):1 时，相应的浓度即为检测限浓度。 6.4 线性线性 a)杂质标准储备溶液：取杂质 1 约 10mg，杂质 2 约 50mg,杂质 3 约 15mg, 杂质 4 约 75mg，杂质 5 约 10mg,杂质 6 约 50mg, 杂质 7 约 15mg，杂质 8 约 10mg,杂质 9 约 50mg, 杂质 10 约 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密称定，加乙腈 5ml 溶解后用流动相稀释至刻度， 再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流动相稀释至刻度。 b)线性 L1 溶液：取检测限与定量限项下的 LOQ 浓度杂质标准溶液。 c)线性 L2 溶液：移取杂质标准储备溶液 3.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 60%杂质限度，也可以不做，但至少保证有 5 个点） d)线性 L3 溶液：移取杂质标准储备溶液 4.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 80%杂质限度） e)线性 L4 溶液：移取杂质标准储备溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 100%杂质限度） f)线性 L5 溶液：移取杂质标准储备溶液 6.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 120%杂质限度） g)线性 L6 溶液：移取杂质标准储备溶液 7.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于 140%杂质限度） 进样，记录色谱图，以样品浓度(g/ml)为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归计算， 得出线性回归方程及相关系数。线性范围为杂质的定量限浓度至约 1.4 倍最大允许杂质限 度浓度，相关系数 R 应不小于 0.990，Y 轴截距应在 100%响应值的 25%以内，响应因子 的相对标准偏差应不大于 10%。 6.5 准确度准确度 a)杂质标准储备溶液：取杂质 1 约 10mg，杂质 2 约 50mg,杂质 3 约 15mg, 杂质 4 约 75mg，杂质 5 约 10mg,杂质 6 约 50mg, 杂质 7 约 15mg，杂质 8 约 10mg,杂质 9 约 50mg, *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 10 页页 共共 12 页页 杂质 10 约 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密称定，加乙腈 5ml 溶解后用流动相稀释至刻度， 再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流动相稀释至刻度。 b)LOQ 储备溶液：根据 LOQ 测试结果配制 LOQ 储备溶液，浓度为 LOQ 浓度的 5 倍。 c)杂质标准溶液：移取杂质标准储备溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度。同法配制 3 个。计算杂质的单位浓度峰面积。 （相当于杂质限度溶液） d)供试液：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然 后用稀释液溶解并稀释至刻度。同法配制 3 个。计算样品中各杂质的单位浓度峰面积， 用于扣除回收率测试中扣除空白的依据。 e)回收率测试液 1：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上 述杂质标准液储备液 5.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的限度)。 f)回收率测试液 2：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上 述杂质标准液储备液 7.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的限度的 1.4 倍)。 i)回收率测试液 3：取*产品 25mg，精密称定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ 储备液 5.0ml，用稀释液稀释至刻度(相当于杂质的 LOQ 浓度)。(也可以配制相当于杂质 限度的 0.8 倍的溶液，但是为了减少工作量，还是最好做 LOQ 点的回收率)。 分别取杂质标准溶液、供试液、回收率测试液 1、回收率测试液 2、回收率测试液 3 各连续进样 3 次，按外标法以峰面积计算*产品的量，并计算回收率，每个回收率及平 均回收率应为 80120%，各回收率的相对标准偏差应不大于 15%。 回收率(%)=计算浓度100%/实际浓度。 6.6 精密度精密度 a)重复性：称取*产品样品适量，照有关物质检查方法配制样品溶液，同法配制 6 份样品溶液，进样测试，各杂质测定结果的相对标准偏差均应不大于 10%。 b) 中间精密度：不同仪器(Agilent 1200)、不同检验人员(另一位化验员)、新配制的流 动相、新配制的样品液及标准液，与重复性测试测同一批样品，各杂质测定结果的相对 标准偏差均应不大于 10%。 c) 精密度测试结果：重复性测定结果的平均值与中间精密度测定结果的平均值之间 的相对偏差不大于 20%。 6.6 范围范围 根据线性、精密度和准确度确定方法的范围，在该浓度范围内，方法具有良好的精 *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 11 页页 共共 12 页页 密度、线性和准确度。范围至少在 0.05%质量指标的 140%范围内。 6.7 耐用性耐用性 a) 色谱条件的影响：在其他条件不变情况下，单独改变柱温、流速、色谱柱、缓冲 液 pH 值、有机相比例、流动相比例等其中一个色谱条件，取分离度测试液分别进样， *产品与*杂质之间的分离度应不小于 2.0。 改变项目柱温流速(ml/ 分钟) 色谱 柱 缓冲液 pH 值 甲醇、乙腈 比例 A、B 相初始 比例 设定值20 30 0.851.05另一 支 2.8 0 3.2 0 55:4 5 45:5 5 80:2070:30 b) 溶液稳定性：按本方法配制标准溶液、供试品溶液和分离度溶液，供试品溶液分 别放置 0h，4h，8h，24h，48h，36h 后进样测定，考察溶液的稳定性。要求标准品溶液 的峰面积相对 0h 的增长率在5%范围内，供试品中各杂质的增长相对 0h 不超过 20%，且无新的杂质产生，分离度溶液分离度不小于 2.0。则表明溶液在这段时间内稳 定，否则说明溶液不稳定，需根据溶液稳定性结果考虑配制和进样时间。 6.8 样品测定样品测定 应用本方法，对 3 批样品进行测定，样品各杂质均应能够符合限度要求。 7.偏差偏差 验证过程中如果出现偏差应及时进行调查和上报，并且采取适当的措施进行处理， 并及时记录。如经调查确定偏差的性质会对验证结果产生实质影响，应确定原因并采取 必要措施后重新进行验证。 8.风险的接收与评审风险的接收与评审 经分析，对上一步判断的风险采取的控制措施，若经检查确认符合要求，则其相应 的风险可降至为可接受风险。否则，需采取进一步的措施降低风险。 9.再验证再验证 发生下列情形之一时，需进行再验证。 （1）生产工艺发生改变。 （2）检验方法发生改变。 10.确认结果评审和结论确认结果评审和结论 验证小组负责收集各项验证、试验结果记录，根据验证、试验结果起草验证报告， *制药股份有限公司 文件编号：文件编号： 题目题目*原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 12 页页 共共 12 页页 报验证委员会。 验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，确认再验证周期。对验 证结果的评审应包括： 确认试验是否有遗漏？ 确认试验过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据以及是否经过批准？ 确认记录是否完整？ 确认试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差说明是否合理？是否需要进一步补 充试验？ 11.更改历史更改历史 12. 附录附录 附录 1 *原料有关物质分析方法 guideline on the limits of genotoxic impurities 版本号生效日期主要变更描述 第 1 版本文档为新订 *制药股份有限公司 附录附录 1 *原料有关物质分析方法原料有关物质分析方法 1 仪器：LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司） ，紫外检测器。 2 标准品及试剂 *标准品 来源:USP 或公司自制 *分离度标准品 来源：U