EDU检测细胞增殖

1 锐博生物锐博生物锐博生物锐博生物 锐博生物锐博生物聂忠清聂忠清 EdU 6(1):5. Ribobio Cell-Light EdU多重联合检测多重联合检测 EdU能够结合其他荧光 标记进行一系列分析： EdU能够结合其他荧光 标记进行一系列分析： 细胞增殖细胞增殖 细胞周期细胞周期 细胞凋亡细胞凋亡 细胞表型细胞表型 信号通路信号通路 细胞毒性细胞毒性 靶点激活靶点激活 除双重标记研究细胞增殖外，还能够结合细胞周期染料、信号通路 相关蛋白标记（如P65抗体）等同时进行多重标记，在细胞水平进行系 统性定量检测，直接获取细胞多维信息，深入开展细胞增殖、细胞周 期、细胞毒性、DNA复制及修复、信号通路等方面的研究。 C10313 Cell-LightTMEdU 高内涵 检测试剂盒Tel:13679094941 NFKBNFKB Ribobio Cell-Light EdU 周期分析周期分析 C10311 Cell-LightTMEdU流式细胞仪检测试剂盒 Tel:13679094941 -流式细胞仪分析细胞周期 细胞增殖和细胞周期是评价细胞代 谢、生理和病理状况的重要指标，该试 剂盒通过检测渗入的EdU及细胞核染料， 借助流式细胞仪检测出新合成的DNA及总 DNA含量，分析细胞增殖情况，并根据 DNA含量随着细胞周期的不同而发生的变 化来准确区分细胞周期的不同阶段。 Ribobio Cell-Light EdU 动物实验动物实验 3) 在组织水平上EdU对增殖细胞的标记3) 在组织水平上EdU对增殖细胞的标记 EdU适用于人、小鼠、大鼠等活体注射，全面分析组织或器官的细胞 增殖情况，适用于石蜡或冰冻组织切片检测，对活体无副作用。 利用EdU检测小鼠小肠组织的细胞增殖切片 C10314 Cell-LightTMEdU DNA Proliferation in vivo Detection Tel:13679094941 Ribobio Cell-Light EdU 细胞示踪细胞示踪 4)EdU 细胞示踪实验4)EdU 细胞示踪实验 C10314 Cell-LightTMEdU DNA Proliferation in vivo Detection Tel:13679094941 EdU不仅能应用于细胞增殖的检测，还能进行细胞示踪实验，示 踪标记时间长达6周，远胜于BrdU,用于细胞移植，观察其治疗机 制如分化、迁移、存活、体内分布等。 图5 采用EdU标记干细胞进行示踪实验 文献实例： 5) Lin G, Wang G, et al. Cytotherapy. 2010.(细胞示踪) EdU标记ADSC细胞移植情况（红色： EdU；蓝色：DAPI；绿色：-SMA抗 体） Ribobio Cell-Light EdU 不同动物的不同动物的EdU用量参考用量参考 C10314 Cell-LightTMEdU DNA Proliferation in vivo Detection Tel:13679094941 No published reference孵育孵育100 MFlatworm (marine) Scientific poster ASCB 2007肌肉注射肌肉注射5080 g/12 hoursZebra Finch BioProbes 57孵育孵育400 MZebrafish larva Scientific poster ASCB 2007腹腔注射腹腔注射160 gRat Salic, A. (2008) Proc Natl Acad腹腔注射腹腔注射100 gMouse 相关文献相关文献*孵育或注射规格物种孵育或注射规格物种 Ribobio 细胞增殖传统检测方法细胞增殖传统检测方法 胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法 胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记 TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度， 可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。 MTT检测法MTT检测法 MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法， 其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的 甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与 细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团， 使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶 联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其 荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈 对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 Brdu检测法Brdu检测法 Brdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合 成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增 殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研 究细胞动力学有重要意义。 Ribobio Tritiated (3H) thymidine 放射性同位素检测方法放射性同位素检测方法 缺点：缺点： 不能结合其他标记进行多 重标记分析 不能结合其他标记进行多 重标记分析 操作复杂，有较大危险性操作复杂，有较大危险性 这是细胞增殖最早的检 测方法，是基于放射性同位 素的检测方法。 Ribobio BrdU (5-bromo-2-deoxyuridine) Br Br Br Br BrdU检测方法检测方法 基于免疫荧光技术的技术，靠抗原 抗体结合发光的方式检测。 Ribobio Br Br Br Br BrdU检测方法检测方法 BrdU抗体抗体 无法与 BrdU结合 无法与 BrdU结合 BrdU抗体分子太大，无法 直接与DNA中的BrdU结合，需 进行DNA变性处理。 Ribobio Br Br Br Br BrdU检测方法检测方法 抗体分子太大，很难与DNA 中的BrdU轻松地结合，实验需要 进行DNA变性，如酸解或酶解以 暴露出DNA双链其中的BrdU。 酸解酸解/热解热解/酶解酶解 DNA变性后，BrdU才能与 其抗体进行结合 DNA变性后，BrdU才能与 其抗体进行结合 Ribobio Br Br Br Br BrdU检测方法检测方法 BrdU方法的缺点BrdU方法的缺点: : 抗体分子太大,有些区域难以高效检测抗体分子太大,有些区域难以高效检测 需要酶解、热解或酸解,破坏DNA，影 响其它标记或染色 需要酶解、热解或酸解,破坏DNA，影 响其它标记或染色 实验时间较长实验时间较长 抗体与BrdU结合能够检测 DNA，但对DNA受到了较大的 破坏，影响了其他标记的检 测，而且有些DNA区域很难解 链，BrdU方法对此无能为力。 BrdU抗体抗体 Ribobio BrdU 检测方法检测方法 BrdU检测方法需要DNA变性，对DNA结 构损伤较大 而且DNA内部较难变性，无法准确检 测新合成DNA的总量 如需在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，变性条件下的 DNA双链结构受到严重破坏，其他核酸标记探针就不容易能识别DNA，因 而也无法准确统计DNA总量。DNA变性可能破坏细胞内蛋白的抗原识别位 点，限制了BrdU检测法中同时检测其他蛋白的应用。 Ribobio Cell-Light EdU&BrdU 操作对比操作对比 2.5小时小时5小时小时+过夜过夜 实验方法简单实验方法简单实验仅 需三步： -EdU孵育 -细胞固定化 -荧光染料检测EdU 操作时间大幅缩短操作时间大幅缩短 与BrdU方法相比，EdU方 法不需要过夜，实验过 程不足2.5小时 Ribobio Cell-Light EdU&BrdU 检测效果比较检测效果比较 Apollo染料分子很小，能够轻松地透过膜结构，无需DNA变性即可 与EdU特异性结合发光，而且不会影响其与其他染料的结合，能够 准确定量DNA总量。 BrdU需要DNA变性后才能与抗体结合，导致BrdU、Hoechst染色弥散， 边缘模糊不清；而EdU边缘清晰完整，检测更灵敏、更准确 Ribobio Cell-Light EdU VS BrdU BrdU 与与 EdU 检测优缺点综合比较检测优缺点综合比较 C10314 Cell-LightTMEdU 组织切片 检测试剂盒Tel:13679094941 灵敏一般检测灵敏度 2.5 小时过夜实验时间 不需要需要DNA 变性 否是影响其他标记 化学反应免疫反应检测方式 很小大检测分子 EdUBrdU EdU的优点：的优点： 简单简单仅需三步：EdU 孵育；细胞固定化；荧光检测 快速快速-检测只需 2.5 小时，大大缩短实验周期 准确准确-标记率高且无需变性，更好地保护细胞形态 兼容兼容-允许与多种抗体，荧光蛋白同时标记 Ribobio Cell-LightTMEU RNA 标记技术标记技术 广州市锐博生物科技有限公司Email：sales-cd电话13679094941 Ribobio EU（5-ethynyluridine） 是一种 尿嘧啶核苷类似物，能够在 ） 是一种 尿嘧啶核苷类似物，能够在RNA转 录时代替尿嘧啶 转 录时代替尿嘧啶(U)掺入正在合成的掺入正在合成的 RNA分子，通过基于分子，通过基于EU与与Apollo 荧光染料或叠氮生物素的特异性化 学反应，以进行新合成 荧光染料或叠氮生物素的特异性化 学反应，以进行新合成RNA的荧光 检测或者捕捉，准确地反映新合成 的荧光 检测或者捕捉，准确地反映新合成 RNA的分布，或通过的分布，或通过qRT-PCR，测 序，芯片等方式准确地定量分析新 合成 ，测 序，芯片等方式准确地定量分析新 合成RNA。 Cell-Light EU 核酸标记技术核酸标记技术 Ribobio EU检测方法的优点：EU检测方法的优点： 小分子检测 高效反应活性 更灵敏、更准确 Cell-Light EU 检测的优点检测的优点 Ribobio Cell-Light EU 的应用的应用 1）在细胞水平上EU对细胞RNA的标记，检测RNA转录分布1）在细胞水平上EU对细胞RNA的标记，检测RNA转录分布 C10317 Cell-LightTMEU RNA 荧光显微镜 检测试剂盒Tel13679094941 A：NIH3T3 细胞中细胞 核与细胞质 中RNA合成 均较活跃； B：Hela细胞 中RNA合成 主要集中在 细胞核 Ribobio Cell-Light EU 体内标记检测体内标记检测 2）在组织水平上EU对细胞RNA的标记2）在组织水平上EU对细胞RNA的标记 EU能够用于人、小鼠、大鼠等活体注射，全面分析组织或器官中RNA 的合成、分布情况（图7），准确性高，标记率高，无放射性，是研究体 内转录活动的理想工具。 C10318 Cell-LightTMEU RNA 组织切片 检测试剂盒Tel13679094941 利用EU检 测小鼠肾 的RNA转 录活动 Ribobio Cell-Light EU RNA Caputure分析分析 3）利用EU进行RNA捕捉分选3）利用EU进行RNA捕捉分选 C10318 Cell-LightTMEU RNA 组织切片 检测试剂盒Tel13679094941 利用EU进行RNA捕捉原理图 参考文献： 1)Kopek, B.G. et al. PLOS Biology. 2007.(新生RNA检测) 2)Cindy Y. Jao et al.PNAS.2008.(体 内RNA合成、转运、分布、周转 率检测) 3)H. Bharmal et al. J Biomol Tech. 2010.(新生RNA捕捉) 采用Apollo生物素与EU特异性化 学反应结合，并采用磁珠捕捉生物 素技术即可获得这些新合成的 RNA。这些捕捉下来的RNA可以进 行测序，qRT-PCR，芯片检测，杂 交等各种操作。这种方法将让您准 确地了解哪些基因表达异常，哪些 基因表达具有时空差异性，药物是 否刺激了基因的表达，病毒基因是 否表达异常，等等。 Ribobio Cell-Light EdU 相关检测试剂盒相关检测试剂盒 C10312 Cell-LightC10312 Cell-LightTM TM EdU 荧光显微镜检测试剂盒EdU 荧光显微镜检测试剂盒 利用EdU检测细胞新合成的DNA，同时结合细胞核标记物进行双重或多重 标记，判断增殖细胞种类及速度，全面分析增殖细胞的定位、分布。 C10313 Cell-LightC10313 Cell-LightTM TM EdU 高内涵检测试剂盒EdU 高内涵检测试剂盒 除双重标记研究细胞增殖外，还能够结合细胞周期染料、信号通路相关 蛋白标记（如P65抗体）等同时进行多重标记，在细胞水平进行系统性定量检 测，直接获取细胞多维信息，深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA 复制及修复、信号通路等方面的研究。 C10311 Cell-LightC10311 Cell-LightTM TM EdU 流式细胞仪检测试剂盒EdU 流式细胞仪检测试剂盒 细胞增殖和细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标，该 试剂盒通过检测渗入的EdU及细胞核染料，借助流式细胞仪检测出新合成的 DNA及总DNA含量，分析细胞增殖情况，并根据细胞周期的不同而发生的DNA 含量变化来准确区分细胞周期的不同阶段。 C10314 Cell-LightC10314 Cell-LightTM TM EdU 组织切片检测试剂盒EdU 组织切片检测试剂盒 EdU适用于人、小鼠、大鼠等活体注射，全面分析组织或器官的细胞增殖 情况，适用于石蜡或冰冻组织切片检测，对活体无副作用。 Ribobio Cell-Light EdU & EU相关试剂盒相关试剂盒 C10316Cell-Ligh