链球菌属检验

元谋县人民医院检验科微生物室链球菌属检验标准操作规程文件编号：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件页码：3/31概述链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（b溶血、a溶血或草绿色溶血、g溶血或不溶血）进行分类。化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、b溶血的链球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色 革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。 3.2 培养特性 在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：a溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；b溶血周围有明显较大的完全透明环；g溶血（不溶血性）无异常变化。肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色a溶血环。 3.3 生化反应 触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环14mm）。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征 革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现b溶血、a溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。 A群链球菌（化脓性链球菌）： b溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：b溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非b溶血链球菌的鉴别见表1。表1 非b溶血链球菌的鉴别菌 名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌+-牛链球菌-+其他草绿色链球菌群- 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色 观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验 参见触酶试验标准操作规程。 3.5.3 鉴定 从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件。5. 质量控制参见质量管理程序。6. 检验结果解释与分析6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出现在血液等无菌体液中时，鉴定才有意义。6.2 如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢布坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。如果检测出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈19mm，应当检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC，因为可能发生青霉素耐药或中介现象。如果检测出链球菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感或耐药。近年来青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDRSP）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。7. 临床意义 化脓性链球菌（A群链球菌）是引起化脓性感染的主要病原菌，致病力最强，可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。此外其感染后也可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。无乳链球菌（B群）正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。肺炎链球菌存在于正常人群的口腔、鼻咽部，属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。草绿色链球菌是人体上呼吸道正常菌群，通常不致病。如果在血液内或无菌体液中检出草绿色链球菌，有临床意义。 8. 鉴定流程菌落观察：灰暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血涂片染色：G+球菌，单个、成双或短链状排列触酶试验阴性b溶血无乳链球菌a溶血杆菌肽肽敏感，PYR试验阴性，血清学分型其他链球菌+Optochin试验-+胆汁溶菌试验-g溶血+CAMP试验-溶血性链球菌肺炎链球菌牛链球菌及其他参考文献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，20064 Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Was