妇科千金方化学成分的研究

妇科千金方化学成分的研究 摘要：复方中药妇科千金方由千斤拨、功劳木、穿心莲、金樱根、单面针、当归、鸡血藤和党参组成， 该文系统研究了妇科千金方的化学组成。采用硅胶、Sephadex LH 20、大孔吸附树脂和反相高效液相等柱色谱方法对妇科千金方的提取物浸膏进行分离纯化， 通过化合物的谱学数据鉴定其结构。共分离得到38个化合物， 分别鉴定为Z-3-丁烯基苯酞 （1） 、Z-藁本内酯 （2） 、洋川芎内酯I （3） 、洋川芎内酯H （4） 、香草醛 （5） 、7-O-甲基汉黄芩素 （6） 、汉黄芩素 （7） 、穿心莲素 （8） 、19-羟基-8 （17） , 13-对映-半日花二烯-15, 16-内酯 （9） 、新穿心莲内酯苷元 （10） 、穿心莲内酯 （11） 、脱水穿心莲内酯 （12） 、异穿心莲内酯 （13） 、穿心莲黄酮 （14） 、鹰嘴豆芽素A （15） 、5-羟基-7, 8, 2, 5-四甲氧基黄酮 （16） 、芒柄花素 （17） 、大豆苷元 （18） 、染料木素 （19） 、苯甲酸 （20） 、香草酸 （21） 、反式阿魏酸 （22） 、水杨酸 （23） 、大豆苷 （24） 、染料木素-7-O-D-呋喃芹糖基- （16） -O-D-吡喃葡萄糖苷 （25） 、芹菜素-7-O-D-葡萄糖醛酸苷 （26） 、穿心莲黄酮苷C （27） 、芹菜素-7-O-D-葡萄糖醛酸苷-6“-甲酯 （28） 、新穿心莲内酯 （29） 、染料木苷 （30） 、穿心莲内酯苷 （31） 、14-去氧-11, 12-二去氢穿心莲内酯苷 （32） 、党参炔苷 （33） 、表儿茶素 （34） 、儿茶素 （35） 、巴马汀 （36） 、小檗碱 （37） 、药根碱 （38） .结合之前单味药研究结果来判断， 大叶千斤拔的有黄酮类化合物17, 19, 24, 30;功劳木的有生物碱类化合物3638;穿心莲的有黄酮类化合物68, 14, 16, 27, 有二萜类化合物913, 29, 31, 32;单面针的有酚类化合物5;当归的有苯酞类化合物14和苯丙素类化合物22;党参的有炔类化合物33;鸡血藤的有黄酮类化合物15, 1719和酚酸类化合物21;而黄烷醇类的化合物34和35既可能鸡血藤， 也可能金樱根。中药复方化学成分具有可溯源性， 此为中药复方化学成分物质基础研究提供了范例。化合物25, 26和28迄今未见从组方单味药中分离鉴定。 关键词：妇科千金方； 中药复方； 化学成分； 物质基础； 中药物质基础研究是中药继承、发展、创新的关键科学问题， 中药复方是中医药基本理论的物质载体， 药有个性之特长， 方有合群之妙用， 中药复方才是研究中药药效物质基础的良好切入点1.在对通脉方、左金方和都梁丸17等的系列研究中， 发现所含化合物之间有相互作用。本文以国家中药保护品种妇科千金方为载体， 首先研究其物质基础， 为制定其质量标准和研究药味和/或化学成分之间的相互作用奠定基础。妇科千金方有妇科千金片和妇科千金胶囊两个中成药品种， 药味组成相同， 由千斤拔、功劳木、穿心莲、金樱根、单面针、当归、鸡血藤和党参组成， 收载于中华人民 _药典；具有清热除湿， 益气化瘀的功效， 临床主要用于慢性盆腔炎、子宫内膜炎、慢性宫颈炎等18.该方临床单独应用或联合其他药物应用19, 疗效确切， 市场前景良好， 已列入国家中药标准化提高项目。关于其物质基础和质量标准， 仅见妇科千金片HPLC特征指纹图谱及多成分含量测定的报道20. 组方8味药材定点采购， 由北京大学药学院天然药物学系杨秀伟教授鉴定， 生药标本保存在株洲千金药业股份有限公司质量部标本室和北京大学药学院。穿心莲为爵床科植物Andrographis paniculata （Burm.f.） Nees的干燥地上部分， 党参为桔梗科植物Codonopsis pilosula （Franch.） Nannf.的干燥根， 当归为伞形科植物Angelica sinensis （Oliv.） Diels的干燥根；穿心莲由广西， 党参和当归由甘肃相应的规范化种植基地供应。野生药材大叶千斤拔为豆科植物Moghania macrophylla （Willd.） O.Kuntze的干燥根， 功劳木为小檗科植物Mahonia fortunei （Lindl.） Fedde.的干燥茎， 鸡血藤为豆科植物Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎， 定点采购于云南；金樱根为蔷薇科植物Rosa laevigata Michx.的干燥根， 单面针为芸香科植物Zanthoxylum dissitum Hemsl.的干燥根， 定点采购于湖南。 按中国药典xx年版妇科千金片/胶囊项下方法18由株洲千金药业股份有限公司提取、制备妇科千金方提取物干膏 （FKQJ） 2.0 kg.将此干膏用3倍体积的Et OAc和Bu OH分别萃取8次， 得到Et OAc萃取物 （FKQJE, 156 g） 和Bu OH萃取物 （FKQJB, 203 g） . 取Et OAc萃取物 （FKQJE, 142.2 g） 硅胶拌样后经硅胶 （1 kg, 200300目） 柱色谱， 环己烷-Et OAc （9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5） 梯度洗脱， TLC检识合并相似流分， 共得到10个亚流分 （Fr.110） .Fr.1 （橙色油状物， 4.4 g） 经硅胶柱色谱 （环己烷-Et OAc 100:1, 50:1, 20:1） 梯度洗脱， TLC检识合并相同的流分， 得到3个流分 （Fr.1-1Fr.1-3） .Fr.1-2 （1.2 g） 经硅胶柱色谱 （环己烷-Et OAc 20:1） 洗脱， 得到化合物1 （25 mg） 和2 （63 mg） .Fr.2 （1.2 g） 经硅胶柱色谱 （环己烷-乙酸乙酯20:1, 10:1, 5:1） 梯度洗脱， TLC检识合并相同流分， 得到3个流分 （Fr.2-1Fr.2-3） .Fr.3 （2.8 g） 经硅胶柱色谱 （环己烷-Et OAc 20:1, 10:1, 5:1, 1:1） , 得到6个亚流分 （Fr.3-13-6） .Fr.3-2经SP-HPLC （A-H2O 30:70） 得到化合物3 （8 mg） 和4 （10 mg） .Fr.4为墨绿色粉末， 通过TLC检识， 在紫外灯下为一条粉色条带， 含有大量叶绿素， 故通过MCI柱色谱除去色素 （Me OH-H2O 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1） , TLC检识合并相似流分， 共得到4个亚流分 （Fr.4-14-4） .Fr.4-1经SP-HPLC （A-H2O 50:50） 得到化合物5 （10mg） 和6 （45 mg） .Fr.4-4 （1.3 g） 经反复硅胶柱色谱， 最终经SP-HPLC （A-H2O 50:50） 得到化合物7 （12 mg） .Fr.5 （11 g） 通过MCI柱色谱除去色素 （Me OH-H2O 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1） , TLC检识合并相似流分， 共得到3个亚流分 （Fr.5-15-3） .Fr.5-1 （1.1 g） 经反复硅胶柱色谱分离 （环己烷-Et OAc 30:1, 10:1, 5:1, 1:1） , 最终经SP-HPLC （CAN-H2O 45:55） 得到化合物8 （30 mg） , 9 （5 mg） , 10 （85 mg） .Fr.5-2 （3.5 g） 经反复硅胶柱色谱分离 （环己烷-Et OAc 30:1, 10:1, 5:1, 1:1） , 最终经SP-HPLC （A-H2O 35:65;流动相A） 得到化合物11 （112 mg） , 12 （10 mg） , 13 （12 mg） .Fr.5-3 （0.7 g） 经硅胶柱色谱分离 （环己烷-Et OAc 30:1, 10:1, 5:1, 1:1, v/v） , 得到2个亚流分 （Fr.5-3-1和5-3-2） , Fr.5-3-1经SP-HPLC （A-H2O 45:55） 得到化合物14 （4 mg） 和15 （6 mg） .Fr.5-3-2经SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到化合物16 （3 mg） .Fr.6 （3.2 g） 通过MCI柱色谱 （Me OH-H2O 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1） 除色素， TLC检识合并相似流分， 共得到4个亚流分 （Fr.6-16-4） .Fr.6-2 （1.1 g） 经硅胶柱色谱分离， 最终经SP-HPLC （A-H2O 45:55） 得到化合物17 （3 mg） 和18 （6 mg） .Fr.6-3经SP-HPLC （A-H2O 35:65） 得到化合物19 （10 mg） .Fr.6-4经制备性TLC （环己烷-Et OAc 5:1） 得到化合物20 （10 mg） .Fr.7 （5.6 g） 通过MCI柱色谱除色素 （Me OH-H2O5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1） , TLC检识合并相似流分， 共得到2亚流分 （Fr.7-1和7-2） .Fr.7-1中析出白色粉末， 为化合物21 （5 mg） .Fr.7-2经SP-HPLC （A-H2O 28:72） 得到化合物22 （6 mg） 和23 （10 mg） . Bu OH萃取物 （FKQJB, 203.5 g） 加水溶解后， 采用D-101型大孔吸附树脂富集FKQJB化学成分， 并依次用3倍柱体积水， 10%, 30%, 50%, 75%, 95%乙醇水洗脱， 分别得到水 （FKQJB0, 100.3 g） 、10%乙醇 （FKQJB 15, 15.3 g） 、30%乙醇 （FKQJB 30, 21.4 g） 、50%乙醇 （FKQJB 50, 30.8 g） 、75%乙醇 （FKQJB 75, 11.2 g） 、95%乙醇 （FKQJB 95, 10.4 g） 水洗脱物。通过TLC检识对30%, 50%乙醇水洗脱物进行化学成分的分离。 取FKQJB 30部位 （21.4 g） 用ODS拌样后， 通过SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到5个亚流分 （Fr.1Fr.5） .Fr.2 （0.3 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离 （Me OH洗脱） , 得到6个亚流分 （Fr.2-12-6） .Fr.2-6通过SP-HPLC （A-H2O-HCOOH 16:84:0.1） 得到化合物24 （35 mg） .Fr.3 （0.2 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离 （Me OH洗脱） , 得到4个亚流分 （Fr.3-13-4） .Fr.3-4通过SP-HPLC （A-H2O-HCOOH17:83:0.1） 得到化合物25 （8 mg） 和26 （35 mg） . 取FKQJB 50部位 （30.8 g） 用硅胶拌样后， 经硅胶柱色谱 （200300目， 200 g） , CHCl3-Me OH-H2O （50:1:0, 30:1:0, 92.5:15:1.5, 85:15:1.5） 梯度洗脱， TLC检识合并相似流分， 共得到10个亚组分 （Fr.1Fr.10） .Fr.2 （2.1 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离 （CHCl3-Me OH 1:1） , 得到4个亚流分 （Fr.2-12-4） .Fr.2-2通过SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到化合物27 （8 mg） , Fr.2-3通过SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到化合物28 （5 mg） .Fr.3 （1.5 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离 （CHCl3-Me OH 1:1;流动相B） , 得到4个亚流分 （Fr.3-13-4） .Fr.3-2 （65 mg） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 最终经SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到化合物29 （15 mg） .Fr.3-3 （125 mg） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 最终经SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到化合物30 （38 mg） .Fr.4 （2.7 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 得到5个亚流份 （Fr.4-14-5） .Fr.4-2 （0.7 g） 经Sephadex LH 20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 最终经SP-HPLC （CAN-H2O 25:75） 得到化合物31 （85 mg） 和32 （15 mg） .Fr.4-4 （212 mg） 经Sephadex LH-20柱色谱分离 （CHCl3-Me OH 1:1） , 最终经制备液相 （A-H2O 18:82） 得到化合物33 （5mg） .Fr.5 （2.2 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 得到6个亚流份 （Fr.5-15-6） .Fr.5-2 （1.3 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 最终经SP-HPLC, 流动相A洗脱， 得到化合物34 （30 mg） 和35 （25 mg） .Fr.6 （3.4 g） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 得到4个亚流分 （Fr.6-16-4） .Fr.6-3 （0.6 mg） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 最终经SP-HPLC （A-H2O23:77） 得到36 （15 mg） ） 和37 （30 mg） .Fr.6-4 （223 mg） 经Sephadex LH-20柱色谱分离， 流动相B洗脱， 最终经SP-HPLC （A-H2O 19:81） 得到化合物38 （24 mg） . 现代药理学研究表明妇科千金方具有抑菌、抗炎、镇痛、提高免疫力、补血等作用， 临床疗效显着。目前对该方中单味药的化学成分研究较多， 然而， 由于复方化学成分的复杂性， 妇科千金方的药效物质未见报道。本文首次对妇科千金方的化学成分进行了研究， 分离鉴定了38个化合物。通过查阅文献和对单味药的研究， 可以认定在这38个化合物中， 君药大叶千斤拔的有黄酮类化合物17, 19, 24, 3049;君药功劳木的有生物碱类化合物363836;臣药穿心莲的有黄酮类化合物650, 7, 825, 14, 16, 2750, 有二萜类化合物91327, 2928,40, 31, 3227;臣药单面针的有酚类化合物551;佐使药当归的有苯酞类化合物14和苯丙素类的化合物2252-53;党参的有炔类的化合物3341;鸡血藤的有黄酮类化合物15, 171954和酚酸类化合物2155;而黄烷醇类化合物34和35既可能鸡血藤54, 也可能金樱根56.所有这些化学成分基本涵盖了组方中的药味， 说明中药复方化学成分具有可溯源性， 此为中药复方化学成分物质基础研究提供了示范。由于方中单味药化学成分的研究尚不完备， 化合物25, 26, 28的溯源需要进一步研究。 _ 1杨秀伟。中药物质基础研究是中药继承、发展、创新的关键科学问题J.中国中药杂志， xx, 40 （17） :3429. 2王付荣， 葛喜珍， 杨秀伟。通脉方化学成分研究J.中国实验方剂学杂志， xx, 17 （20） :61. 3王付荣， 杨秀伟。HPLC法同时测定通脉方中6个异黄酮类成分的含量J.药物分析杂志， xx, 31 （9） :1626. 4Wang F R, Zhang Y, Yang X B, et al.Rapid determination of 30 polyphenols in Tongmai Formula, a bination of Puerariae Lobatae Radix, Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma, and Chuanxiong Rhizoma, via liquid chromatography-tandem mass spectrometryJ.Molecules xx, 22 （4） :545. 5Wang F R, Yang X W, Zhang Y, et al.Three new isoflavone glycosides from Tongmai granulesJ.J Asian Nat Prod Res, xx, 13