凝聚胺交叉配血试验.ppt

实验三凝聚胺法交叉配血,医学检验系张晨光,目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开；如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。,试验分步原理,血清,红细胞悬液,加入LIM,混合液,试验分步原理,Polybrene分子连接到红细胞上,加入Polybrene,试验分步原理,离心,Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集,1个IgG分子同时连接两个红细胞,试验分步原理,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,加重悬液,试验分步原理,已被血型抗体致敏的红细胞不会散开,阳性结果,试验分步原理,未被血型抗体致敏的红细胞很快散开,阴性结果,试剂:凝聚胺试剂盒；生理盐水器材：小试管、滴管、试管架、记号笔、显微镜、离心机。标本：静脉血。,操作1.取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受血者血清(血浆)1滴，和供血者35红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者35红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴，加供血者血清(血浆)1滴。2.各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或参照说明书。3普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。,4轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。5最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混匀并同时观察结果。6.结果判定：如果在30秒内（或按说明书）凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。,1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，须多加46滴Po1ybrene溶液以中和肝素。3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操作。,【注意事项】,4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现，建议进行交叉配血试验操作时室温保持在22左右，最后滴加Resuspending时，将试管立即置入37水浴中，轻轻转动试管混合，并在30秒内观察结果。5不同的凝聚胺试剂盒操作方法各不相同，实验时请严格按照说明书操作。,【方法学评价】1.凝聚胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高，能检测几乎所有规则与不规则血型抗体，适用于各类输血患者的配血。2.盐水介质配血法操作简单、反应快速，但只能发现完全抗体。3.酶介质配血法操作较为简便，试剂便宜，灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。,4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安全输血检查的推荐方法，该法具有：检测项目全灵敏度高特异性强重复性好客观性好节省样品、试剂，结果易保