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文档简介

.,对CRISPR技术等基因改造手段的效率和结果，目前方法仍难以评估。一项新研究证实，单分子实时（SMRT）测序技术能够同时测定任何位点的基因组编辑结果，这种方法可,.,应用于各种基因组编辑平台，包括TALEN、CRISPR/Cas9和锌指核酸酶（ZFN）等。新兴的CRISPR技术在短短一年多的时间内，掀起了基因组编辑的热潮,.,。然而，对这些基因改造手段的效率和结果，我们仍难以评估。目前的一些工具，如荧光报告基因、克隆分析，缺乏生成报告细胞系时所需的灵敏度。高通量测序方法虽能科服这一问,.,题，但无奈读长太短，而供体DNA模板往往很长。目前，还没有一种测序平台能同时评估非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）的发生频率，而这正是双链,.,DNA断裂的两种主要修复机制。近日，单分子测序带来了一个好消息，研究人员证实，单分子实时（SMRT）测序技术能够同时测定任何位点的基因组编辑结果。这项研究成果发,.,表在3月27日的CellReports上。研究由来自斯坦福大学的MatthewPorteus领导。研究人员在文中指出，这种方法可应用于各种基因组编辑平台，包,.,括TALEN、CRISPR/Cas9和锌指核酸酶（ZFN），以确定理想的改造结果出现时的条件和策略。靶向基因组编辑，让研究人员能够在基因组中几乎任何位点，引,.,入精确的序列修饰。然而，研究人员指出，这些基因组修饰策略并不总是带来理想结果。“精确的基因组修饰取决于断裂是由NHEJ修复的，还是有HDR修复的。如果断裂由,.,NHEJ修复，在断裂位点可能会引入小的插入或缺失。不过，若由HDR修复，就能引入理想的序列变化，形成特定修饰。”作者认为，SMRTDNA测序带来了一下优点：,.,1.灵敏测定任何细胞类型中的基因组编辑，包括原代干细胞，而不需要构建稳定的报告细胞系；2.测定内源位点的修饰，而不管其转录状态如何；3.在使用携带长,.,的同源臂的供体模板时，长的测序读长带来了清晰的DNA修复结果。此外，作者还提到：“我们的策略为研究DNA修复的通路提供了一种方法，而之前的方法难以研究。SM,.,RTDNA测序能够灵活评估任一位点的基因组编辑结果
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