双水相萃取技术的发展及应用

双水相取技术的发展及应用1双水相萃取简介.1 1.1双水相体系.1 1.2双水相萃取的原理.1 1.3影响物质分配平衡的因素 .2 1.4双水相的种类.2 1.5双水相萃取的特点.22双水相萃取技术的应用.3 2.1生物工程.3 2.1.1萃取分离抗生素.3 2.1.2萃取分离酶.3 2.1.3分离蛋白质.4 2.1.4萃取其他生物活性物质.4 2.2在发酵工程中的应用.5 2.3在药物方面的应用.5 2.4在金属分离中的应用.6 2.5与其它技术结合应用.63双水相萃取技术的最新进展 .7 3.1廉价双水相体系的开发.7 3.2新的双水相体系探索.7 3.3双水相萃取技术同其他技术集成化.74双水相萃取技术的未来展望.8 参考文献双水相萃取技术的发展及应用摘要 双水相萃取技术作为一种新型的分离技术日益受到重视, 与传统的萃取及其他分离技术相比具有操作条件温和、处理量大、易于连续操作等优点, 从而使其能广泛应用于生物工程、药物分析和金属分离等方面。目前, 双水相萃取技术的研究进展集中表现在: 廉价双水相体系的开发、新的双水相体系探索、双水相萃取技术同其他技术集成化、双水相萃取相关理论的进展等方面。本文简单介绍了双水相萃取技术及其原理、特点, 综述了双水相体系在生物工程( 其中包括萃取分离抗生素、酶、分离提纯蛋白质和萃取其他生物活性物质) 、药物分析和金属分离等方面的应用, 展望了双水相体系的应用前景。关键词：双水相萃取 分离 应用前言：双水相萃取与传统的萃取分离技术不同, 有其独特的优点, 是一种新型的分离技术。因此, 双水相萃取获得了较好的成果, 受到越来越多研究者的青睐。双水相萃取在诸多方面有着广泛的应用,具有良好的应用前景。 1双水相萃取简介 1.1双水相体系 双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相溶性，使得聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不相溶的两相，因使用的溶剂是水，因此称为双水相。原则上，无论是天然的还是合成的亲水聚合物，绝大多数在与另一种聚合物水溶液混合时都可分成两相，构成双水相体系1。通过溶质在相间分配系数的差异而进行萃取的方法即为双水相萃取(aqueous two-phase extraction ATPE )。由于在两个水相中水都占有较大的比例(70%-90%）在这种环境中，活性蛋白或细胞不会失活;而且双水相萃取技术具有操作条件温和、处理量大、易于连续操作等优点，从而使其能广泛应用于生物分离工程中2。自从1956年，瑞典的Albertsson首次运用双水相萃取技术来提取生物物质以来，对于双水相体系的研究和应用逐步展开，并取得了一系列研究成果3。现在双水相萃取技术已广泛地应用于蛋白质、酶、核酸等生物产品的分离和纯化以及药物有效成分提取，并逐步向工业化生产迈进，展现了广阔的应用前景。1.2双水相萃取的原理双水相萃取与一般的水-有机物萃取的原理相似, 都是依据物质在两相间的选择性分配4 。当萃取体系的性质不同, 物质进入双水相体系后, 由于分子间的范德华力、疏水作用、分子间的氢键、分子与分子之间电荷的作用, 目标物质在上、下相中的浓度不同, 从而达到分离的目的。溶质(包括蛋白质等大分子物质、稀有金属以及贵金属的络合物、中草药成分等) 在双水相体系中服从Nernst分配定律5 : K=Ct/Cb其中: K 分配系数; Ct、Cb分别代表溶质在上相、下相中的浓度。系统固定时, 分配系数K为一常数, 与溶质的浓度无关。当目标物质进入双水相体系后, 在上相和下相间进行选择性分配, 这种分配关系与常规的萃取分配关系相比, 表现出更大或更小的分配系数。如各种类型的细胞粒子、噬菌体的分配系数都大于100或者小于0.01, 因此为物质分离提供了可能6。1.3影响物质分配平衡的因素 影响物质在双水相体系中分配的因素有很多，其中主要包括体系有机相组成(如有机物的类型、平均分子量等)、盐类(包括离子类型和浓度、电荷数、电解质强度、酸碱性等)、相比R(上下相的体积比)、溶质即目标物质的物理化学性质(包括分子量，等电点)，以及体系的温度、压力等。1.4双水相的种类 双水相萃取中使用的双水相是由两种互不相溶的 高分子溶液或者互不相溶的盐溶液和高分子溶液组成。最常见的就是聚乙二醇(PEG)/葡聚糖(Dextran)和PEG/无机盐(硫酸盐、磷酸盐等)体系,其次是聚合物/低分子量组分、离子液体体系和高分子电解质/高分子表面活性剂体系。此外,还有被称为智能聚合物 的双水相体系,智能聚合物又称刺激-响应型聚合物(Stimulus-responsivepolymers)或环境敏感聚合物(Environmentally-sensitivepolymers)。智能聚合物是一种功能高分子材料,当外界环境(如温度、pH值、离子强度、外加试剂、光、电场或磁场等)发生微小变化时,聚合物分子的微观结构会发生快速、可逆的转变,使其从亲水性变为疏水性。智能聚合物的双水相体系有:温度敏感型双水相体系、酸度敏感型双水相体系、光响应型双水相体系、亲和功能双水相体系7 。1.5双水相萃取的特点双水相萃取是一种可以利用较为简单的设备, 并在温和条件下进行简单操作就可获得较高收率和纯度的新型分离技术。与一些传统的分离方法相比, 双水相萃取技术具有以下独有的特点8,9 :(1) 两相间的界面张力小, 一般为10-710-4mNm-1(一般体系10-3210-2mNm-1) ,因此两相易分散, 而且它比一般的有机萃取两相体系界面张力低的多, 这样有利于强化相际间的物质传递。(2) 操作条件温和, 由于双水相的界面张力大大低于有机溶剂与水相之间的界面张力, 整个操作过程可以在常温常压下进行, 对于生物活性物质的提取来说有助于保持生物活性和强化相际传质。(3) 双水相体系中的传质和平衡速度快, 回收率高, 分相时间短, 传质过程和平衡过程速度均很快, 自然分相时间一般为515min, 因此相对于某些分离过程来说, 能耗较低, 而且可以实现快速的分离。(4) 大量杂质能够与所有固体物质一起去掉, 与其他常用固液分离方法相比, 双水相分配技术可省去12个分离步骤, 使整个分离过程更经济10 。(5) 含水量高, 一般为75%90% , 在接近生理环境的体系中进行萃取, 不会引起生物活性物质失活或变性11 。(6) 一般不存在有机溶剂的残留问题, 现已证明形成双水相的聚合物(如PEG)对人体无害, 可用于食品添加剂、注射剂和制药, 因此对环境污染小。(7) 聚合物的浓度、无机盐的种类和浓度, 以及体系的pH 值等因素都对被萃取物质在两相间的分配产生影响, 因此可以采用多种手段来提高选择性和回收率。(8) 易于连续化操作, 设备简单, 并且可直接与后续提纯工序相连接, 无需进行特殊处理。例如可以采用高分配系数和高选择性的多级逆流分配操作。(9) 分配过程因素较多, 可以采取多种手段来提高分配选择性或过程收率。2双水相萃取技术的应用双水相萃取技术越来越受到人们的青睐,广泛应用于生物、医学、环境科学等各大领域,近几年来,双水相萃取技术的应用更加频繁。2.1生物工程2.1.1萃取分离抗生素朱自强等12用8%的PEG2000与20%的(NH4)2SO4组成的双水相体系直接萃取青霉素G发酵液, 分配系数高达58.39, 浓缩倍数为3.53, 回收率为93.67%, 青霉素G对糖的分离因子和对杂蛋白的分离因子分别为13.36和21.9。Su13在室温以及pH=10的条件下, 利用16.1%的PEG和12%的硫酸盐, 0.5molL- 1高氯酸钠组成的双水相体系成功地从鸡蛋蛋清中分离出高纯度的溶解酵素。2.1.2萃取分离酶张兰威等14采用双水相萃取技术分离提取风干香肠中蛋白酶,确定双水相体系组成(质量分数)为PEG%和MgSO425%,在此体系中风干香肠的蛋白酶主要分布在上相,最高酶活为12.37Ug-1,纯化倍数为4.61,回收率为85%。苏玉春等15采用双水相萃取法从黑曲霉AS3.4309的发酵液中提取木聚糖酶,得到双水相体系的最佳组成:选用PEG4000,其质量分数为19%,磷酸氢二钾质量分数为10%。在此条件下,木聚糖酶的提取效果较好,分配系数和上相产率分别为6.23和88.67%。王蕾等16确定双水相萃取体系为:PEG质量分数30%、NaH2PO4质量分数20%、pH值6,在此条件下GeotrichumspSYBCWU-3脂肪酶经硫酸铵沉淀和双水相萃取两步纯化的纯化倍数达到最大,较Geotr-ichumspSYBCWU-3脂肪酶粗酶纯化了22倍。GeotrichumspSYBCWU-3脂肪酶纯酶为低温碱性脂肪酶,最适反应温度为15,最适pH值为9.5,相对分子质量为3.58104。 房耀维等17利用聚乙二醇/磷酸盐双水相体系从PseudoalteromonasarcticGS230发酵液中直接萃取分离低温-淀粉酶。结果表明,在pH值5.0的15%PEG1000/15%磷酸盐双水相体系中,低温-淀粉酶的纯化倍数及回收率分别为4.8和87%。周念波等18采用PEG600/(NH4)2SO4双水相体系直接从Bacillussp.LS发酵液上清液中分离壳聚糖酶。得到室温下双水相萃取最佳条件为:PEG60020%、(NH4)2SO420%、NaCl0.1%、pH值6.0,在此条件下,壳聚糖酶分配系数达5.91,萃取率达88.7%。舒国伟等19利用PEG4000/(NH4)2SO4双水相体系萃取纤维素酶。结果表明,双水相体系的组成(质量分数)为(NH4)2SO48%、PEG%、pH值4.8时,分配系数为5.21,萃取率为79.4%。张娟等20研究了果胶酶的双水相萃取,结果发现,在双水相体系组成(质量分数)为PEG%、硫酸铵19%、氯化钠0.002%、pH值5.0时,果胶酶的萃取效率较好,分配系数最高达14.0。 陈利梅等21采用双水相体系对葡萄糖氧化酶进行萃取,结果发现,葡萄糖氧化酶在25%PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率,达81.11%,分配系数为0.134。朱旭国等22利用亲水聚合物PEG6000在高离子强度下失水沉淀夹带酶蛋白的特点,结合PEG/(NH4)2SO4双水相萃取得到高浓度酶蛋白,再经SephadexG-75柱层析纯化得到高纯度酶样品。结果表明,饱和度60%的(NH4)2SO4溶液可使PEG6000夹带沉淀出总酶活力95%的氯过氧化物酶,酶在PEG/(NH4)2SO4双水相体系中上下相分配率达到0.228以下,回收率达到65.2%,纯度提高了7.4倍。2.1.3分离蛋白质刘杨等23以PEG/ 硫酸钠双水相体系, 经一次萃取从钝顶螺旋藻(Spirulina platensis) 细胞破碎液中富集分离藻蓝蛋白。结果表明, 萃取最适宜的条件为12%PEG 4000, 15%Na2SO4, 1%KCl,藻蓝蛋白收率为91.2% , 分配系数达到8.01, 分离因数达到6.33。对于螺旋藻藻蓝蛋白的富集分离,双水相萃取法与传统的盐析沉淀法相比, 具有节省操作时间、简化操作过程、降低能耗和成本以及易于工艺放大等优点。Long等24描述了生物偶联技术对胶状金纳米粒子在聚乙二醇( PEG)/葡聚糖双水相系统(ATPS)中分离蛋白质的影响。山葵过氧化物酶(HRP)通过直接吸附结合胶状Au纳米粒子。虽然HRP很少存在于相中,但HRP/Au 纳米粒子结合分离到PEG相, 结合15nm胶状金的因子高达1501。其他蛋白质/金纳米粒子结合在右旋糖酐相中分离大于20001, 而自由蛋白为51。分离程度取决于聚合物浓度, 分子量,纳米粒子直径, 在某些情况下取决于纳米粒子在ATPS中的浓度。通过结合金纳米粒子大幅度提高蛋白质分离, 在既不改变蛋白质的化学性质或聚合物的亲和力配体,增加聚合物浓度, 也不增加盐类浓度的情况下, 很大程度上归因于偶联物表面积的增加。吸附胶体1908光谱实验室第27卷粒子从而提供一个有吸引力的路线, 以增加酶和其他蛋白质在ATPS中的分离。此外, 这些结果表明在净化生物分子/纳米粒子结合中ATPS分离作为一个强有力的手段, 正越来越多地应用于诊断和材料方面。Silva等25研究了不同分子量的PEG和pH值在聚乙二醇(PEG)+磷酸钾+尿素+水双水相体系中的液-液平衡, 描述了实验技能和分析方法, 得出了25时PEG(1450, 3350, 10000)+磷酸钾(pH7和9)+尿素(质量分数为6%)+水的双水相体系的平衡数据。每个体系测得了4条连接线。研究了25时pH7和9, 尿素质量分数为3%和6%的体系中溶解酵素、过氧化氢酶、B-牛乳糖的分离现象。2.1.4萃取其他生物活性物质 Luechau等26研究了聚乙二醇-磷酸盐双水相体系分离DNA(pDNA)，让一个高分子量(HMW)PEG1450和一个低分子量(LMW)的聚合物PEG300与磷酸氢二钾结合。实验结果表明质粒pTX0161在PEG-磷酸盐双水相具有不同的分配系数。在HMW PEG(PEG1450-磷酸盐体系) , pDNA 只分离到下相。在LMW PEG(PEG 300-磷酸盐体系) , pDNA根据双水相体系中的相组分、体系温度和溶菌液的浓度分离到不同相。在体积比大于1的体系中, pDNA主要分离到上相。体积比在0.51时, pDNA主要分离到界面。体系比小于0.5的体系, 大部分pDNA在下相。在425时, 分离到上相的量减少, 但是分离到界面的量稳步增多。在25时, 大于80%的pDNA分离到界面。随着温度上升至40, 分离到下相的量稳步增多, 分离到界面的量下降。在20时,pDNA分离到界面的量逐渐增多, 溶菌液浓度为60%W/W时, 达到80%的最高回收率。在25时,大于80%的pDNA从浓度大于35%W/W的溶菌液分离到界面。在30溶菌液浓度为020%时,pNDA由上相转到界面。Tubio等27研究确定了从A-胰凝乳蛋白酶(ChTRP)中分离胰岛素(TRP)的最佳条件, 并将其应用到用聚乙二醇/ 柠檬酸钠(PEG/NaCit)双水相体系从牛胰腺中液-液萃取胰岛素。研究发现PEG的分子量、pH 和连接线长度影响TRP和ChTRP的分离。由分子量为3350的PEG和柠檬酸钠形成的双水相体系在pH为5.20表现为最好的分离。NaCl 的加入量达到7%(W/W)时上相/下相的体积比下降到0.1, 这导致胰腺TRP在上相的回收率达到60% , 是净化的3 倍。生物质量达到总体系的25%(W/W)不影响产量和净化参数。Salabat等28研究了L-色氨酸、L-苯基丙氨酸、L-酪氨酸3种氨基酸298.15K时在聚乙二醇+盐+水双水相体系中的分离现象, 分相盐为硫酸镁、硫酸钠、硫酸铵, 并且还研究了连接线长度、盐、侧链结构对氨基酸分配系数的影响。结果表明, 增加氨基酸的疏水性和连接线的长度会使分配系数相应的增加。另外, 含有Na2SO4的体系比其他2种盐氨基酸的分配系数大。实验数据由改进后的Virial-type模型计算, 比较模型与实验数据得出具有很好的一致性。2.2在发酵工程中的应用由于发酵液中成分比较复杂，目标产物含量低，而传统的分离纯化方法步骤繁琐，导致产品回收率低，成本居高不下。目前国内外已经有利用双水相体系从发酵液萃取分离目标产物的报道和研究，并取得了一些成绩。Pan等29利用PEG 1500/NaH2P04体系从Trichoderma koningii发酵液中分离纯化-木糖普酶，该酶主要分配在下相，下相酶活回收率96.3%纯化倍数33。Maria等30利用PEG 1000/NaH2P04体系从Fusarium solanipisi发酵液中分离纯化角质酶，该酶主要分配在上相，酶活回收率91%，纯化倍数4.1。 Mirjana31利用PEG4000/Dex体系从Polyporus squamosus发酵液中分离果胶酶，该酶主要分配在上相，酶活回收率80.2%，纯化倍数2.45。Martinha32利用PEG8000/(NH4)2S04体系从Kluyveromyces marxianus发酵液中分离胞外多聚半乳糖醛酸酶，该酶主要分配在上相，酶活回收率91%，纯化倍数19。冯著等33采用8%的PEG4000,13%的Na2S04和6%NaCl组成的双水相直接从重组巴氏毕赤酵母发酵上清液中分离人溶菌酶，双水相萃取率达到96.63%，纯化因子为6.5。黄瑛等34采用10%的PEG2000, 15%的磷酸盐和1%的NaCl组成的双水相系统从洋葱假单细胞G-63发酵粗酶液中提取脂肪酶，当系统的pH为8.0时，分配系数4.36，纯化因子3.98，脂肪酶的回收率达到87.25%2.3在药物方面的应用薛珺等35采用PEG800与吐温80组合表面活性剂、硫酸钱、水形成双水相体系萃取芦丁，芦丁在该双水相体系的平均萃取率为95.0%。谢涛等36利用PEG 4000/K2HP04组成的双水相体系从三七中萃取三七皂普，三七总皂普的分配系数为14.2,回收率为96%。赵爱丽等37利用26%的PEG6000与18%的K2HP04组成的双水相体系分离纯化黄菩普，黄菩普的分配系数达到29. 8，收率达到98.6%。石慧等38利用25%PEG400, 12.0%(NH4)2SO4和3%NaCl组成的双水相体系从加杨叶萃取液中萃取加杨叶总黄酮，萃取率达到95%以上。朱自强等39用8%的PEG2000与20%的(NH4)2SO4组成的双水相系统直接处理青霉素G发酵液，分配系数高达58. 39，浓缩倍数为3.53，回收率为93. 67%，青霉素G对糖的分离因子和对杂蛋白的分离因子分别为13. 36和21. 90。2.4在金属分离中的应用传统的金属离子溶剂萃取方法存在着溶剂污染环境、对人体有害、运行成本高、工艺复杂等缺点。近年来, 利用双水相技术萃取分离金属离子达到了较高的水平。Bulgariu等40将Cd()加入到碘化物在pH 2.057.12的PEG(1500)-(NH4)2SO4双水相体系中萃取到PEG 相。红外光谱显示随着(NH4)2SO4溶液的酸度增加PEG氧化醚的质子不增加, 但是PEG相中水的含量减少。金属萃取到PEG相中改变了水分子与聚合物链的结合; 吸光度随着pH值的改变而改变。显微镜方法表明通过具体的相互作用在PEG 相中萃取金属的固着点依赖于物质的种类。这也取决于聚合物链结构的变化。Bulgariu等41还研究了将几个实验参数作为函数在PEG(1550)-(NH4)2SO4双水相体系中萃取Zn()。PEG-盐双水相体系由2个不混溶相组成, 聚合物相和盐相, 这可以用来做萃取实验。在没有恰当的萃取剂时, 体系由体积相等的质量分数40%的PEG 和质量分数为40%的(NH4)2SO4构成, Zn()主要留在盐相。改变盐溶液的pH值, 萃取效率改变不大。增加Cl- , 观察到Zn()的萃取效率提高。在有Cl- 时, Zn()的萃取效率取决于盐溶液的酸度和加入体系中Cl- 的浓度。Silva 等42在磷酸钾与高分子-聚氧化乙烯(1500gmol-1) 和三嵌段共聚物PEO(聚氧化乙烯)-PPO(聚环氧丙烷)-PEO构成的双水相体系中研究Fe(CN)5(NO)2-和Fe(CN)63- 阴离子的分离现象。实验使用了疏水性不同的两种共聚物, L35(50% 环氧乙烷, 1900g mol-1)和F68(80% 环氧乙烷, 8400gmol-1) 。研究了温度、连接线长度、相的疏水性函数在每个双水相体系中Fe(CN)5(NO)2-和Fe(CN)63-阴离子的分配系数。比较阴离子的分配系数的大小L35F68PEO。随着温度的升高, 阴离子的分配系数降低, 表明分离过程是放热过程。热力学参数由VantHoff方程获得, 热量计的测量表明阴离子转移到上相是由于热焓的作用。2.5与其它技术结合应用双水相萃取技术有其独有的优点,如能与其它技 术结合应用,萃取分离效果更佳。双水相萃取技术与超声波、微波、壳聚糖沉淀相结合应用的研究已经比较成熟,其中与超声波分离技术结合应用得最多,具体情况如下表1所示。双水相体系其它技术萃取物结果参考文献丙醇/硫酸铵超声波灯盏花类黄酮明显好于回流提取法43水/乙醇/硫酸铵超声波芫荽总黄酮总黄酮得率为2.8%44乙醇/硫酸铵微波盾叶薯蓣皂苷总皂苷提取率为95.1%45丙醇/硫酸铵超声波竹叶总黄酮总黄酮纯度为31.3%46PEG/(NH4)2SO4壳聚糖沉淀猪胃蛋白酶最大纯化倍数为7.8347表 1 3双水相萃取技术的最新进展 3.1廉价双水相体系的开发多年来的双水相技术研究绝大多数集中在高聚物-高聚物双水相体系系列上。然而该体系的成相聚合物价格昂贵，在工业化大规模生产时，从经济上丧失了该体系技术上的优势，因而寻找廉价的有机物双水相体系是双水相体系的一个重要的发展方向。3.2新的双水相体系探索随着双水相技术研究的不断深入，新的双水相体系表面活性剂表面活性剂水体系、普通有机物无机盐水体系、双水相胶束体系等体系相继被发现。这些双水相体系各有优势，表面活性剂双水相体系与高聚物双水相体系相比，有更高的含水量，因而条件更为温和，表面活性剂的增溶作用，不仅可以用于可溶性蛋白质分离，而且可用于水不溶性蛋白质的分离；普通有机物型双水相体系最大的优点是价格便宜，分离后续工作处理简单。另外，一种新的体系是只有一种成相聚合物的双水相体系，上相几乎是水，聚合物绝大部分集中在下相，该体系不仅操作成本低，萃取效果好，还为生物物质提供了更温和的环境。3.3双水相萃取技术同其他技术集成化过程集成化是指不同的分离技术上互相渗透，实现优势互补，从而达到整体优化的目的，具体表现在三个方面： 1、与常规技术结合来解决双水相萃取本身的难点问题，如双水相电泳技术就是电泳技术与萃取技术交叉耦合形成的一种新型分离技术，该技术是在多液相状态，既可以克服对流（返混）的不利影响，又有利于被分离组分的移出 ；2、引进其他分离技术进行融合以提高分离效率，简化分离过程，使其工艺步骤少，提取效率高，能耗及生产费用低 ； 3、为已有的技术提供新的思路，如根据非离子表面活性剂胶束系统温度在浊点以上自动分相的现象提出了双水相非离子表面活性剂胶束萃取的新概念；根据双水相的液液界面阻止热对流的假设，为开发双水相电泳分离技术开辟了一条新途径。根据双水相体系的分配特性与生物识别原理，提出了金属粒子亲和双水相萃取技术。4双水相萃取技术的未来展望双水相萃取体系自身的一些特殊性质以及优点，使其在生物化工产品的萃取与提纯方面表现出不俗的优势。但是体系自身也存在的一定的缺陷，如双聚合物体系价格较高，限制了其在工业中大规模的应用；体系的易乳化同题，导致萃取过程极不稳定，操作十分不方便，条件难以控制；某些高聚合物双水相体系分相时间较长，大大降低了生产效率；此外双水相萃取缺乏理论基础，目前的研究还停留在热力学模型的探索阶段。因此未来双水相萃取技术的发展方向应该集中在：(1)对液液相平衡热力学模型的探索，应该加快基础数据的收集，寻求一套完整的理论依据；(2)新型双水相体系的开发，寻找更加廉价高效的双水相体系；(3)新工艺的开发，为实现大规模工业化寻找新思路；(4)双水相萃取技术与相关技术的耦合，扩展双水相萃取的应用领域，减少双承相体系自身的一些缺点带来的影响；(5)废液的回收以及再利用问题。在当今越来越重视人类生存环境的前提下开发出环境友好、可循环利用的双水相体系是非常有意义的。相信在将来双水相萃取分离技术的应用领域将进一步拓宽。11参考文献1邓修，吴俊生.化工分离工程M.北京:科学出版社，2002: 252一253.2耿信笃.现代分离科学理论导引M.北京:高等教育出版社，2001: 312-314.3吕斌，陈有容，陈舜胜.双水相萃取技术及其在生物食品工业中的应用J.食品与发酵工业，2001, 27(6):70一74.4郑楠，刘杰.双水相萃取技术分离纯化蛋白质的研究J.化学与生物工程，2006，23(10):79.5严希康，俞俊棠. 生化分离工程M.北京:化学工业出版社，2001.169187.6辜鹏，谢放华，黄海艳等.双水相萃取技术的研究现状与应用J.化工技术与开发，2007，36(11):2933.7屈锋,吕锋华,张慧娟.智能聚合物的双水相体系在生物分子分离 纯化中的应用J.化学进展,2010,22(1):125-132.8 张成强. 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