花粉培养方法.ppt

，植物花粉培养，花粉培养，花粉培养：也被称为小孢子培养，是把花粉颗粒从花药中分离出来，分散或使其自由的过程，通过培养使花粉颗粒软化，发展成完成的植物的过程从1953年开始。特点：1、花药培养中可以排除丝状、弱壁等体细胞干扰；2、一个花药中花粉的数量巨大，可以减少试验材料；3、花粉数量多，具有单细胞、单倍体、高同步特性。花粉培养，幼树花蕾选择和准备，(a)材料选择，(b)预处理，(3)体外移植系统准备和接种，(a)材料选择，(1 .花粉发育时期的选择不是任何发育时期的花粉都能直接诱导愈伤组织或胚胎的生成，而是特定时期花粉发育的材料的选择和培养是成功的关键。2.决定采集时间大约需要的花粉发育时期的花蕾。由于花粉发育时期和植物某些外形特征之间的近似相关性，利用这种外形选择符合条件的花蕾，通过镜检查确定花粉发育的确切时间。2 .生理状态的选择，花药和花粉捐赠者植物的生理状态直接影响花粉愈伤组织的诱导率。例如，田间栽培或温室栽培植物anther是主茎还是分蘖耳朵的花药？以水稻、小麦、大麦等禾本科植物为例，主茎穗诱导率明显高于花药愈伤组织。选择一级侧枝的花蕾，因为一级侧枝的花蕾发育良好，数量多，发育同步。操作过程中不能有花药损伤，如果损伤，应去除。因为如果受到损伤，花粉壁通常会刺激形成二倍体组织。低温预处理可以提高花粉胚的诱导频率，将小麦穗预先低温处理为1 5 ，提高花粉愈伤组织的产量。例如：4 冷冻芦笋花蕾，预处理4天、8天、12天，愈伤组织的诱导率分别比室温对照组增加2.4倍、1.9倍、1.5倍。每种植物必须与预处理的温度和时间不同。(2)预处理，(3)外植剂的制备和接种，花粉培养中的表面杀菌，通常用70%乙醇浸泡花蕾30S左右，然后在饱和漂白剂溶液(上清液)中浸泡10 20min，或者在0.1%氯化汞溶液中浸泡5 10分钟花盆的自由分离是a:存活率高，B:一定量的c:无菌，没有杂质的一般分离方法是a天然粉末a固体培养法B，液体培养方法可以与预培养相结合。一般将消毒过的花药接种到液体培养基上，在一定的温度条件下振动培养。花粉从花药中用培养基自行散开，筛除花药壁等离心分离收集花粉，在新鲜培养基中重新培养。b，机械分离花粉粒a:挤压法。消毒花药后，加入少量分离溶液，用镊子或小玻璃棒将花粉从花药中挤出，用不锈钢网或尼龙网采集组织碎片，收集悬浮液，以30%的蔗糖离心，培养挂在蔗糖溶液上层的完成的花粉粒。注意(a)适当地平均分离液的渗透压(c)，使用适当的b、搅拌器或超速圆角机，将小花放在含有一定培养液的微量搅拌机中，在高速条件下搅拌一定时间，用均匀的网过滤，过滤器在1000g中用离心力、培养液清洗多次，并双层培养：上下液-固体护理培养：花粉-滤纸-固体培养基微室培养：条件培养：在花药培养基上添加失活花药提取物。花粉培养方法：基本培养基，不同植物种类对培养基的要求不同。例如，培养基的高浓度NH4极大地抑制了花粉愈伤组织的形成。铁对花粉胚胎的发育很重要。培养基，分化培养：根据培养目的调节植物激素，分化培养：降低生长素，增加细胞分裂素-有利于芽的形成：同时下降，有利于胚胎体的正常生长。植物激素的种类和浓度应与植物种类和器官的发生方法结合考虑，细胞分裂和CM促进花粉向胚胎体的分化，生长素特别是2，4-D促进了愈伤组织的形成，而2，4-D抑制了愈伤组织向胚胎体的分化。在花药离体培养中，保持培养基渗透压主要依靠糖，子叶植物开始了比双子叶植物更高的微球细胞脱分化要求。芦笋花药培养中对多细胞花粉粒的诱导效应，3w，8w，蔗糖种类和浓度的筛选，添加剂，玉米汁，土豆汁，酵母提取物，氨基酸等对提高花粉愈伤组织和胚状体诱导率，促进生长有良好的效果。活性炭能促进胚胎体发育，增加花粉植株产量。主要是在吸附培养基中抑制生长的有害物质。1)花药培养形成单倍体植株。但是花药的药壁、药房等二倍体组织也可能诱导发育成为植物。2)通过染色体构型分析，在花药培养中发现单倍体植物。3)激素对倍性变化有很大影响。花粉植物的倍性，通过诱导单倍体植物倍性的胚状体生成的花粉植物，几乎是单倍体。愈伤组织生产的花粉植物大部分是二倍体。愈伤组织继代培养时间愈长，二倍体比率愈高。单倍体鉴定方法，确认花粉植物染色体倍性的方法：形态确认种子数确认基因标记鉴定。花粉植物的形态发生方法，a，器官发生方法花粉-多细胞花粉颗粒-细胞群(愈伤组织)-单倍体植物。花粉颗粒均匀地分裂或不均匀地分裂，形成多细胞花粉粒，穿透花粉壁，形成不规则、疏松的细胞团花粉愈伤组织。愈伤组织继续培养，产生单倍体植株。卷心菜，大米等。b，胚胎发生方法花粉-多细胞花粉粒-进一步培养-胚胎体-植物。花粉粒经过均匀的分裂或不均匀的分裂，形成多细胞花粉粒，经过进一步培养，以胚胎体形态释放，最终形成植物体。蔓塔罗，香烟等。花粉植株再生，1 .在体外培养条件下，微球通过脱分化、改变原始发育途径、器官发生和胚胎发生类型再生整个植物。2.体外小孢子发生途径(a，b，c)，a途径：花粉孢子体的第一个有丝分裂，来自花粉的营养细胞(营养核)，即已经经过第一个配子体有丝分裂的花粉花粉孢子体最初有丝分裂后的衍生细胞经过几次有丝分裂，形成多细胞花粉粒，进一步发育成多细胞团，破坏花粉壁，形成胚胎状。微球细胞通路a发育图，微球细胞通路b发育图，b通路：花粉孢子体的第一个有丝分裂，发生在单核微球上。也就是说，分裂在第一次有丝分裂发生雄性之前是平等的，细胞壁发生。这两个细胞再分裂几次后形成多细胞花粉，打碎花粉壁，以胚胎形状或愈伤组织形式释放。花粉孢子第一次分裂后的细胞分裂还有三种情况。微球细胞通路c发育图，c通路：