无菌操作和接种技术及微生物的分离培养与数量测定(苏教版选修).ppt

(b)无菌操作和接种技术以及微生物的分离、培养和定量分析，探索学习1。学习无菌操作和接种技术。(焦点)2。研究培养基对微生物的选择效果。(焦点)3 .了解从平板上分离微生物的方法和数量。(重点)4。简述了从土壤中分离纤维素的微生物的方法。(困难)，无菌，徽章，玻璃铲，穿刺，平板刮，2。无菌手术微生物接种技术的关键(1)培养微生物的试管、培养皿、微生物培养基等，在接种前_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，灭菌，酒井灯火焰，1。在微生物培养过程中进行灭菌操作的原因是？提示：无菌操作的目的是防止空气中的杂菌污染。请想想。第二，微生物的分离1。原则：根据微生物的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _方法(1)根据菌落形态特征，进行初始分离、营养成分、必需、分离选择菌落：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _固体培养基表面有很多群体时，这称为_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。殖民地特征：不同微生物在_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _培养基中生长形成的菌落或细菌苔藓，通常具有稳定的特性，对这种微生物有_ _ _ _ _ _，单个，固体，形态结构，细菌苔藓，特定，分类，识别，涂层平板法，平板标记法，单个，(1)灭菌接种环，使用培养基，运行中不再灭菌。(2)富含有机物的土壤中，微生物的种类和数量少，反之亦然。(3)群体是肉眼确认各种微生物的重要依据。()(4)稀释涂法可在培养基表面形成单个群体。()，句子1，3，土壤微生物的分离和计算1。实验设备准备2。采集土壤，准备悬浮液(1)取0.5克土壤样品，倒入含有50毫升无菌水的锥形瓶，震动20毫升，使土壤样品完全分解，即10-2g/ml的土壤悬浮液。用、(2)等非稀释灭菌吸管吸出0.5mL的土壤悬浮液，从而达到4.5ml _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _将试管1号吹3次，冲洗并均匀悬浮液，然后将装有4.5毫升无菌水的试管2号注入0.5毫升，并用10-4g/ml的土壤悬浮液混合。以此方式由10-5g/ml、10-6g/ml、10-7g/ml、10-8g/ml的土壤悬浮体制造。灭菌水，3。选择适合分离特定微生物的培养基其他微生物的代谢特性可以通过_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _选择所需的特定微生物。4.使用三个无菌吸管分别将10-8g/ml、10-7g/ml、10-6g/ml的土壤悬浮液放入试验台，并设置每个浓度_ _ _ _ _ _ _ _ _重复和完全振动混合将培养盘翻转到_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _温度调节器上，培养1 2d，观察细菌群体。6.除去殖民地培养24 48h后的板数，选择殖民地数量为30 300的组作为代表统计。每克土壤样本细菌数=稀释度多次反复培养的菌落平均稀释倍数(假定稀释剂为1毫升)。37，2。a同学分离培养土壤微生物时，如果与其他同学的结果大不相同，请分析可能的原因。通过对照组实验进一步验证了原因。想一想，提示：第四，设计实验将土壤中能分解纤维素的微生物分离出来1。研究目的筛选土壤微生物中可降解纤维素的微生物。纤维素分解菌的实验原理是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，纤维素酶，纤维素，3 .方法步骤(1)准备可选培养基：提供碳源的培养基的物质为_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(2)化妆(3)准备土壤稀释液：依次制造稀释度为10-1，10-2，10-3，10-4，10-5的土壤稀释剂。(。纤维素，(4)接种培养：将1毫升土壤稀释液接种到滤纸上，每稀释度重复4次_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(5)观察：检查试管的滤纸上出现的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _和滤纸的颜色变化。培养箱，集落，3。在等比稀释过程中如何使微生物均匀分布在细菌液中？你认为计数的殖民地和实际的殖民地之间有什么关系？提示：每次拔之前，请充分振动土壤悬浮液，均匀搅拌。实际的殖民地数大于计数的殖民地数。请想想。1.无菌技术的概念：防止所有外来杂细菌入侵，保持灭菌和灭菌区域不再受到污染的方法称为无菌技术。2 .无菌技术的特定内容(1)清洁和消毒实验空间、操作者的服装和手。(2)灭菌微生物培养用仪器、接种机构、培养基等。(3)实验工作应在酒井灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。(4)实验时，应避免灭菌处理的材料机构与周围物品接触。特别是在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止细菌污染，确保培养物的纯度。细菌培养过程中分别使用了高压蒸汽灭菌锅、酒精、火焰燃烧等几种其他处理，这些方法依次用于杀死任何部位()a .接种环、手、徽章b .高压锅、手、接种环c .徽章、手、接种环d .接种环、手、手高压蒸汽灭菌锅通常是用于培养基杀菌的杀菌设备。用酒精擦手是消毒的一种方法。火焰燃烧可以迅速彻底地杀菌，适用于接种环等微生物的接种工具。c，1 .以下错误的是()a .用酒精擦手。b .用氯消毒水。c .在实验室用紫外线消毒d .玻璃器皿(吸管，培养皿)。用酒精直接擦拭，就能达到完全灭菌的目的。变形训练，分析：d .玻璃器皿、金属器具等需要保持高温多酸或干燥状态的项目，用干热灭菌法灭菌，酒精不能达到完全灭菌的目的。原则：大部分细菌、很多真菌、单细胞藻类能在固体培养基中形成孤立的群体。板状分离法分离单个微生物，固定在固体培养基的表面或内部，每个孤立的活微生物可以生长繁殖，形成易于移植的殖民地。2 .常用培养基：分离和培养微生物最常见的固体培养基是琼脂固体培养基。3.方法：(1)涂布法：分离材料，用10倍系列稀释，一定稀释度也将样品倒入事先准备好的琼脂板，用无菌玻璃铲均匀涂上样品，细菌群体经常只生长在平板表面。(2)混合板法：将材料分离，稀释为10倍系列，将一定稀释度样品和融化的琼脂混合，将与样品混合的琼脂倒入灭菌平盘，细菌群体出现在板的表面和内部。(3)板划线：扇形划线，连续划线，棋盘格划线等。4.目的：采用多种板分离方法从培养基中获得目的微生物的单个菌落。(1)灭菌后，冷却接种环后，要选择菌株。否则会杀死菌株。(2)整个操作过程要在酒井灯火焰旁进行，避免杂细菌污染。(3)打得太猛，应适当大小划线，以免刮伤徽章。(2012年检测盐城高2)下图是微生物平板标记示意图。下划线顺序为12345。以下方法正确地()在运行前，将接种环放在火旁，灭菌b .刮除在火上，在C. 5区才能得到必需的殖民地D. 1，2，3，4，5区，在刮除前后，将接种环放在灭菌，分析工作前，将接种环放在主井等外部火花内，进行灭菌；整个工作过程要在酒井灯旁进行。1、2、3、4、5这五个地区可能都有需要的殖民地。在每个焦散之前燃烧接种环是为了杀死上次焦散结束后留在接种环上的菌株，在焦散结束后灭菌接种环是为了杀死接种环上的残留菌株，避免环境污染和感染工作人员。d，变形教育2。稀释涂布法的叙述错误。()a .首先用一系列梯度稀释菌液。b .然后在琼脂固体培养基的表面c .适当条件下培养具有不同稀释度的菌液。d .结果可以在培养基表面形成单个群体。分析：选取d。稀释涂布板法是将细菌溶液稀释为一系列梯度。然后将各稀释度不同的菌液涂在琼脂固体培养基的表面，在适当的条件下培养。只有稀释足够高的菌液中聚集的微生物可以分散成单个细胞，在培养基表面形成单个菌落。1 .显微镜直接计数法(1)原理：该方法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，通过显微镜计算具有特定体积的样品中的微生物数量。(2)方法：用计数板计算。计数器板被分割成25个(或16个)单元和16个(或25个)单元，每个计数器室由400个单元组成，具体面积为1mm2，系数室为0.1mm。(3)操作：将稀释的样品滴入计数板，盖上复盖幻灯片，用显微镜计算4 5个重细胞中的细菌数，计算每个格子中的细菌数的平均值，根据计算公式计算每个样品毫升中包含的细菌数。(4)原液毫升每株细菌数=每株平均细菌数40010000稀释倍数。(5)缺点：死细菌和活细菌无法区分。2.间接计数法(生菌计数法)(1)原则：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的群体来自样品稀释液中的生菌，通过统计板上的群体数量，可以推测样品中含有多少生菌。(2)工作建立重复组，提高实验的说服力和准确性。将正在测试的样品稀释一系列10倍，然后选择3种稀释度菌液，分别接种在制造的板上0.1毫升，然后用灭菌涂布机将菌液涂在整个平板表面，在适当的温度下培养群体数量。为了使结果接近实际，可以在3个以上的板块上添加相同的稀释菌液，进行涂层和培养，使殖民地平均。为了确保正确的结果，让一般群体数跨30 300个板块进行计算。在设置的迭代组中，如果结果太不同，则意味着操作错误，需要再次进行实验。3.滤膜法(1)例如，测定饮用水中大肠杆菌的数量。(2)过程：过滤已知体积的水后，在大肠杆菌群斗兽场呈绿色的李红米蓝培养基中放入滤膜培养。有金属光泽，可以根据培养基中绿色的群体数计算水样中的大肠杆菌群数。特别是计算殖民地数量的注意事项：将群体的数量一般选择在30-300的板块上进行计算。统计菌落数经常低于活细菌的实际数。统计结果一般显示为菌落数，而不是活菌数。目的排除实验组中无关因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。A.用蒸馏水制作牛肉软膏蛋白胨培养基后，倒入高温高压灭菌后的板，每组板涂上0.1毫升的土壤稀释液和灭菌水，c .实验组和对照组板反向翻转，37 至24 48小时d .确定对照组无菌培养后，将群体数300多个实验组胎体数区分实验物质的灭菌方法。了解空白对照组在菌落计算实验中的作用。明确了殖民地数量的选择范围。这个问题是对土壤微生物总数的调查，因此培养使用的培养基必须是基本培养基，必须经过高压蒸汽灭菌处理。在涂层时稀释样品水溶液，一般将104、105、106倍的土壤稀释剂分别涂0.1毫升，为了确认平板培养基的准备情况，同时将少量无菌水接种到1培养基上，作为空白对照。培养一段时间后，如果板块上的种群数量在30到300之间，那么，你可以计算该种群中所有板块的种群数量，计算出它们的平均值，计算出本土细菌的总数。项目d无效，因为殖民地数超过300个。d，c交互探索倒置板的目的是什么？防止盘子盖上的凝结水落在培养基上，造成培养基污染。每个稀释度至少设置了三个图版，通常选择殖民地数为30 300的图版数。如果板块群的数量在30到300之间，但板块群的数量在近30到300之间(种群的数量为28，25，24，27)，那么也可以将平均作为殖民地的数量。边食训练3。(2012年安康高2检测)自然微生物经常杂交生长。人们一般在研究微生物的同时，将其分离纯化，然后测量数量。以下是对大肠杆菌定量测定的实验，请回答相关问题。步骤如下：制造稀释倍数为102，103，104，105，106的一系列稀释剂。为了获得更准确的结果，应使用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _方法接种样品。适当的温度培养。结果分析：(1)从测定的大肠杆菌数、相应稀释倍数为106的培养基中获得了以下统计结果，更接近事实的是：(a . 1 .平版，统计种群数为23，b . 2平版，统计种群数为22和26，平均24C.三个信誉，统计的种群数量分别为21，5，52，平均26d.4信誉，平均25的21，30，24，25 (2)学生在稀释倍数为106的培养基上，扁平的群体平均数量为23.4。 每个升样品的种群数量(涂层板时使用的稀释量为0.2ml)_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (3)用这种方法测量密度，实际活细菌的数量是测量的数量_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，分析：Escherichia coli 实验中，每个浓度至少涂层3个板面，提高实验的说服力和准确性。(1)选择集落数没有太大差别的多个板数，以计算其平均值。(2) 23.40.2106=1.1718。3)由于殖民地能连接和生长一个或多个大肠杆菌，因此实际存活的细菌数量比测定的数量多。(。回答：步骤稀释涂抹板(1) d (2) 1.1718 (3)连接两个以上大肠杆菌后，在板上观察到群体，微生物的分离包括样品稀释、划线