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文档简介

.,临床检验基础实验六,血涂片染色白细胞分类计数,.,1.瑞氏染色1.1试剂成分：伊红酸性嗜碱性染料亚甲蓝（美蓝）碱性嗜酸性染料甲醇固定溶剂磷酸缓冲液（pH:6.4-6.8）,.,1.2着色原理：化学亲和作用+物理的吸附作用伊红+细胞中的碱性物质红色亚甲蓝+酸性物质蓝色中性物质+伊红和亚甲蓝淡紫色,.,1.3pH对细胞染色影响,pH过低PI负电荷增多易与亚甲蓝结合偏蓝最适环境：弱酸（pH6.4-6.8）,.,血涂片：淡紫红色镜下：成熟红细胞粉红色白细胞胞质呈现其特有的色彩细胞核紫红色染色质结构清楚,判别方法,.,染色偏酸:红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红白细胞核淡紫红色或不着色染色偏碱：红细胞灰蓝色中性粒细胞颗粒深暗、偏粗，紫黑色嗜酸性粒细胞暗褐色或紫黑色、蓝色,.,.,1.4器材载玻片、推玻片、洗耳球1.5试剂瑞氏染液（商品）I液：瑞特染料、纯甲醇、甘油I液：磷酸盐缓冲液（KH2PO4Na2HPO4）,.,1.6操作制备血涂片（待完全晾干）加I液数滴覆盖整个血膜0.5-1min滴加等量或稍多的II液（洗耳球混匀）5-10min冲洗（注意）干燥,.,注意事项1.血涂片干后方可染色2.加染液不能过少3.冲洗时应以流水冲洗4.染色过淡可复染，先加缓冲液再加染液5.染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，也可用甲醇脱色6.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。应在具体实践中摸索合适的时间。,.,2.WBC分类计数,2.1原理2.2器材:显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁剂2.3操作步骤1.采末梢血染色2.低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的域，滴香柏油一滴3.油镜下分类，分类时要有秩序的连续进行（“几”字形），避免主观选择视野。通常分类100个白细胞，计数并报告各种白细胞所占百分比。4.计算5.报告方式：XX细胞：XX%,.,2.4外周血正常白细胞形态特征:,中性粒细胞：杆+分,10-15m圆形胞质粉红胞质内颗粒量多、细小、均匀、紫红色核弯曲呈杆、带状染色质粗糙，紫红色分叶核：核分2-5叶,.,13-15m圆形胞质着色不清胞质内颗粒粗大、整齐、均匀、充满胞质、桔红色核多分2叶染色质粗糙，紫红色,嗜酸性粒细胞+淋巴细胞,.,10-12m圆形胞质着色不清胞质内颗粒量少、大小不匀、排列零乱、紫黑色，可盖核上核形不清染色质粗糙，紫红色,嗜碱性粒细胞,.,6-15m圆形/椭圆形胞质透明、淡蓝色胞质内多无颗粒核形圆/椭圆/肾形染色质粗紧成块，深紫红色，核外缘光滑,淋巴细胞,.,12-15m圆/椭圆/不规则胞质半透明、灰蓝色或灰红色胞质内有细小、尘土样紫红色颗粒核形不规则/山字/肾/马碲形，扭曲折叠染色质疏松网状，淡紫红色，有膨胀感和立体起伏感,.,2.5注意事项：1.分类最佳区域为体、尾交界处2.分类时要有秩序地连续进行3.白细胞总数与分类个数4.分类中如见幼红细胞，不计入100个细胞内，以分类100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应注明其所属阶
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