凝血四项原理及测定.ppt

凝血四项原理及测定,邢台市第三医院检验科刘晓彬,1.凝血四项的测定与临床意义。2.影响凝血四项测定结果的几种常见因素。,目录,凝血四项的测定与临床意义,基本原理目前国内外各生产厂家生产的全自动血凝仪都是基于凝固法对血液凝固过程进行测量的。血液凝固是一系列凝血因子连锁性酶反应的结果。血液中的凝血因子以无活性酶原形式存在，当某一凝血因子被激活后，可使许多凝血因子按一定的次序先后被激活，彼此之间有复杂的催化作用，被称为“瀑布样学说”。这种“瀑布样学说”产生的激变在血液的生物物理特性上表现为，电阻增大（电流法）粘度增强（磁珠法），浊度上升（光学法）。由于电流法测量可靠性差，因此为磁珠法和光学法所替代。目前可开展的血栓/止血成份检测方法主要有凝固法、底物显色法、免疫法、乳胶凝集法等。,测定方法光学法（比浊法）光学法血凝仪是根据血浆凝固过程中浊度的变化来测定凝血功能。根据仪器不同的光学测量原理，又可分为散射比浊法和透射比浊法两类。散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90度直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线（CA系列散射光百分比终点法）。,透射比浊法，是根据待测样品在凝固过程中吸光度变化来确定凝固终点的，采用50%这点作为检测值，是因为在50%这一点光透射时间变化最大，纤维蛋白单体聚合反应率最高（CS系列采用透射比浊法）。两者曲线相反光学法和磁珠法用于血凝检测，就方法论而言各有千秋，光学法的优点在于结构简单、灵敏度高。易于自动化等。缺点在于易受特异血浆干扰，对此各厂家已采取不同措施予以弥补。磁路法优点不受特异血浆的干扰（黄疸、溶血、乳糜），试剂量少，缺点，磁珠的质量、杯壁的光滑程度等，均会对测量结果造成影响。,（1）凝血酶原时间测定（PT）原理：待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时通过外原性激活途径激活因子X成Xa,Xa使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转化为纤维蛋白而凝固，测定凝固所需时间即为凝血酶原时间。用途：是外源性凝血糸统障碍较为理想的筛选试验，亦可用于内、外凝血共同途径凝血因子、的定量，口服抗凝剂的监控等。手工法测定：用加样枪吸取50uL血浆到小塑料试管37孵育1分钟，加ThromborelS试剂（已预温到37）100uL并同时开启秒表计时，不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流动所需要的时间，记录时间。测定温度36.538.5,过低或过高均使PT延长（温育箱中进行）。,（2）活化部分凝血酶时间测定（APTT）：原理：待测血浆加入凝血活酶，在钙离子的参与下纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定凝固所需要的时间即为活化部分凝血酶时间。用途：是内源性凝血系统、因子较为理想的筛选试验，亦可用于内源性凝血因子定量，凝血因子和其他凝血因子测定，特别是、因子和释放酶测定，肝素治疗的监控等。手工法测定：（1）在试管中加入待检血浆和APTT试剂各100uL，混匀和100uL氯化钙同时置于37温育箱中温育3min。（2）加氯化钙溶液计时：在试管中加入氯化钙溶液100uL，立即混匀并开始计时，不时缓慢倾斜试管，观察试管流动状态，当液体不流动停止计时，记录时间。APTT试剂应于2-8的冰箱保存，长期保存后可能会形成黄色沉淀，用前需振摇均匀。,（3）凝血酶时间测定（TT）：原理：待测血浆加入适量凝血酶，纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定所需时间即为凝血酶时间。用途：是检测受试者纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白能力常用的筛选试验。增高见于DIC纤溶亢进期，血中纤维蛋白（原）降解产物（FDPs）增高；降低无临床意义。（4）纤维蛋白原浓度测定（FBG）：原理：高浓度的凝血酶存在时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤维蛋白原（FIB）含量成反比关系。测量该稀释血浆凝固时间，换算即得纤维蛋白原浓度。OVB要放置常温状态下才可进行检测。用途：用于纤维蛋白定量测定。,影响凝血四项测定结果的几种常见因素,1光源稳定性，试剂复溶有效期及是否更换新批号，反应杯是否光滑无毛刺，冰箱温度是否符合要求，OVB是否放置常温或常温放置时间过长，试剂杯是否定期清洗等。2定期清洁蒸馏水桶。如果长时间不清洁，水桶内壁会长菌、会有异物沉淀等，进而堵塞仪器管道，影响检验结果。,3标本的采集采集时间：常规要求上午空腹采集，急诊随时采集。采血顺利，止血带不应扎得过紧、时间过长，针头必须采用21号以上，并且采血后迅速与抗凝剂混匀，避免用力振荡。要遵循严格的标本采集顺序：1.如果一次要求采血多管样本时，应按以下顺序采血：血培养蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）红帽管、橘黄帽管（促凝管）绿帽管（肝素钠管或肝素锂管）紫帽管（血常规）。2.无血培养时，蓝帽管(凝血测定)必须放在第二管采集，按照原有顺序选择第一管标本采集。3.只有蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）时，应先用黄帽管采集少许血液，然后再采集蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）。,为什么要遵循严格的标本采集顺序？采血不顺利、第一管抽凝血的标本，都可能引起标本中混入组织液使凝血活酶受到污染，凝血因子激活而导致PT和APTT结果延长第一管抽凝血的标本，可由于采血针连接管导致抽血量不足。,抗凝剂的选择根据WS/T359-2011血浆凝固实验血液标本的采集及处理指南的要求，选用抗凝剂为0.109mol/L的枸橼酸钠，它能有效地阻止因子和的活化，严格按1:9的比例抗凝。注意：当HCT55%或180sTT150s。4从留置针中采血混有肝素。Rangerover(超出线性范围）1小于仪器可报最小时间即PT7sAPTT15s,此时仪器测得数值是不可靠的，需要手工复