放射性治疗诊断制剂的单瓶处方

Singlevialformulationfortheranosticradiopharmaceuticalpreparation放射性治疗诊断制剂的单瓶处方,参考文献：ArchanaMukherjee，ArunaKorde，HaladharDevSarma，GraceSamuel，JRadioanalNuclChem(2014)302:889894，DOI10.1007/s10967-014-3308-6,现在的工作旨在开发制药等级的单瓶成套装备,像生长激酶抑制剂类似物的处方，DOTA-Tyr3-Thr6-Octreotide（DOTATATE）适用于诊断的（68Ga）和治疗的（177Lu）放射性同位素。像DATATATE这样的单瓶成套装备已经制备出来。68Ga和177Lu是标准的放射性标记方法。在过去的6个月当中已经研究了药学纯度和稳定性的处方。在瑞士鼠上做了放射性同位素制剂的药动学研究。用4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸作缓冲剂的DOTATATE处方也已经成功研制出来。68Ga-DOTATATE和177Lu-DOTATATE复合物均有95%的放射性纯度。68Ga-DOTATATE和177Lu-DOTATATE复合物在瑞士鼠中体内研究显示，其可以通过肾脏很快被清除掉。用于便捷制备68Ga-DOTATATE和177Lu-DOTATATE临床放射性药物的单瓶配套装置已经通过了成功的验证。,放射性标记的生长激素抑制剂（SST）类似物，Tyr3-Thr8-奥曲肽（TATE），Tyr3-奥曲肽（TOC）和NaI3-奥曲肽（NOC）已经成功用于在诊断和靶向放射性治疗肿瘤上的生长激素抑制剂受体1，2。大环配合物1,4,7,10-四氮杂环十二烷四乙酸（DOTA）和镧系金属形成热力学稳定和动力学惰性的化合物，并且它也是一种用放射性同位素177Lu和90Y标记的广泛使用的双官能团螯合剂。DOTA也能够和68Ga（)形成稳定的复合物。尽管其他配体例如NOTA，PCTA，在用68Ga标记时会更合适，但是已经证明出DOTA共轭化合物SST和RGD在临床上更有用。因此，DOTA共轭生物分子更有利于发展成为诊断治疗学的放射性药物。需要简便的标记方法，并且在临床应用当中，用较低的价格就能获得68Ga和177Lu放射性药物，所以可以尝试一种制药级别的DOTA缩氨酸配套处方，它可用诊断的（68Ga）和放射的（177Lu）作同位素标记。参考文献：1.TeunissenJJM,KwekkeboomDJ,ValkemaR,KrenningEP(2011)EndocrRelatCancer18:S27S512.ChakrabortyS,VimalnathKV,LoharS,ShettyP,DashA(2014)JRadioanalNuclChem.doi:10.1007/s10967-014-3169-z,用HEPES的DOTATATE处方的单瓶配套装置的标准，它是一个自动组装的半自动化模块进行177Lu和68Ga的标记，并进行了6个月的处方稳定性评价，在瑞士鼠上进行放射性药物的生物评价。,试验部分,DOTATATE来自奥地利的piChem公司，HEPES由美国的Sigma化学公司生产。色谱分离柱C18墨盒由水印度公司生产，美国的Phenmenex公司已经研究出薄层X染色体柱。美国安捷伦科技有限公司生产的ITLC-SG纸层析被用于分析ITLC的复杂性特性，3mm的滤纸层析纸被用于纸色谱法。美国的Millipore公司生产了33mm厚的薄膜滤器。其他的来自印度有名的制造商的化学品和溶剂复合验收要求等级。,试验部分,IsotopeApplicationsandRadiopharmaceuticalDivision（BARC）已经生产出来特异性活性20Ci/mg的医药级别的177LuCl3。68Ga发生器来自南非的藤巴。所有的放射性测量都是用NaI（Tl）闪烁计数器完成。高校液相色谱（HPLC）系统是从日本的JASCO（PU1580）引进，并配有PU1575UV/VIS检测器（紫外光检测器）。NaI（Tl）闪烁检测器结合到放射性监测系统中。所有用于HPLC分析的溶剂都是从当地信誉良好的供应商购买，并在使用前脱气和过滤处理，达到HPLC级别。Alpha1-2Ld的冷冻干燥机来自MartinChriat，GmBH。无菌试验试剂盒含有羟基乙酸盐液体介质，大豆酪蛋白介质是从HimediaLaboratories，印度获得的。用于内毒素测定的EndosafePTS设备和墨盒（灵敏度：0.5-0.05EU/ml）是CharlesRiverLaboratories印度经济有限公司生产的。,DOTA多肽处方,所有用于65Ga标记的玻璃器皿都是用酸洗涤。处方是在，一个内部模块化设立的100级层流洁净室（每一个程序都得到验证）中进行。标准化的单瓶DOTATATE的试剂盒的配方是用HEPES做缓冲剂的。原液的制备是0.5M的HEPES缓冲剂中加入1mg/mL的DOTATATE，调节PH到4.0，并搅拌均匀。混合物在无菌条件下过滤消毒。在HEPES中规格为30，50和200ugDOTATATE（20瓶/组）的处方分配在10mL规格的无菌玻璃小瓶中，在真空冻干法之后密封。这些处方保存在-20条件下，并定期进行放射性检测。无菌测试都在标准程序下进行。程序重新设定为1mL无菌盐，样品在20-25大豆酪蛋白培养基中培育14天，30-35在流动的巯基醋酸盐培养基中培育14天。对每项测试的观察都进行了正向和反向的比较。EndosafePTS系统中对样品进行适当的稀释后，在暗盒中放入25uL样品（灵敏度0.5-0.05EU/mL），进行BET测试。,Schematicsofsemi-automatedmodulefor68GaDOTATATEpreparation,68Ga的洗脱和放射性标记自行组装的半自动化组件用于68Ga洗脱、放射性标记和68Ga-DOTATATE的提纯（如图1所示）。在5mL的0.1M，HCl中对68Ge/68Ga发生器产生的68Ga进行洗脱，然后将它放到薄层染色体柱上。为了祛除金属离子杂质，用丙酮/0.1NHCl（80/20）清洗染色体柱，并且纯化的68Ga要用0.5mL的丙酮或者0.02NHCl（97.6/2.4）进行洗脱。纯化的Ga（37-185MBq）直接使30、50ug的试剂瓶在0.5mL的超纯水环境下复原。放射性标记通过持续10分钟的90加热得到。,提纯为了在最后的制备中祛除HEPES和胶状的杂质（如果有的话），络合物用分离色谱柱C18提纯。提纯装置（1cc容量）用甲醇预先处理，反应物包括68Ga-DOTATATE用水稀释然后放在染色体柱上。络合物残留在提纯装置上，用水冲洗以祛除所有杂质。经过提纯的产品要用0.5mL的丙酮通过一个0.22um的薄膜滤器洗脱。如图1所示加热到80以祛除丙酮，产品通过盐溶液复原。,稳定性研究复合物的稳定性，是在2和4小时用HPLC测定。50uL的化合物在37，500uL的健康人血清当中培育1h，来进行血清稳定性测试。样品在经过3000rp/分钟的离心机离心5分钟，在乙腈中沉淀。对上清液进行PC，ITLC和HPLC分析。,用177Lu对处方进行放射性标记用177Lu对处方进行放射性标记检测，1.1，1.85和7.4GBq的177Lu分别添加到30，50和200ugDOTATATE处方瓶中，并在95中培育25分钟。177Lu-DOTATATE复合物在C18柱中被纯化可以除去HEPES，用到半自动化装置和在53Ga-DOTATATE处方中用到的相同，并在2.2um的过滤器重过滤。用HPLC检测其特性，并用50%的乙腈水溶液惊醒纸层析分离。在复合物中添加50mg的抗坏血酸溶剂。同时也研究了在盐和血清中的稳定性。,DOTA多肽处方,各种规格的（30-200ug）DOTATATE的单瓶配套装置处方已经在HEPES缓冲剂中成功制备出来。处方也已经通过测试，在每次无菌测试中达到制药等级。细菌内毒素含量10EU/mL，符合药典规定的放射性药物临床内毒素含量限制。,68Ga放射性药剂的临床应用得到拓展，并且通过临床正电子成像术（PET）表明，其在分子成像中有重要意义。因此，DOTA多肽处方这样的单瓶治疗和诊断的放射性同位素制剂，在诊断和治疗神经内分泌瘤（NET）方面有重要的意义。53Ga和177Lu放射性标记的单瓶处方也在研究中。如果这些在诊断和治疗过程中是有积极的效果的，可以制备相似的治疗性的放射性制剂，例如多肽受体放射性同位素治疗制剂177Lu（PRRT）。,Maecke等人提出冻干法，用小螯合剂耦合多肽的装置的发展6。尽管，已经有报导，制作用像NOTA和NODAGA为螯合剂的68Ga为基础的放射性药剂，只需要在室温条件下运行10min，得装置类型；这样的药剂和制作方法在临床研究中并并不是很普遍，由于不同的螯合剂会影响制剂的药代动力学，药物之间的相互关系，和肿瘤的吸收等。在临床中，已经