蛋白质浓度的测定实验报告_第1页
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蛋白质浓度的测定一 试验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感性。在一定范围内，考马斯亮蓝G250蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。二 试验设备与试剂设备：普通离心机，721型分光光度计试剂：标准蛋白液（100ug/ml）三 实验材料新鲜绿豆芽四 实验内容1. 标准曲线的制备取9支干净的试管，按表进行编号并加入试剂。管试剂1（空白）23456789标准蛋白液/ml0.9%nacl/ml考马斯亮蓝染液/ml蛋白质含量/(ug/ml)01.04.000.10.94.0100.20.84.0200.30.74.0300.40.64.0400.50.54.0500.60.44.0600.80.24.0801.004.01002. 样品蛋白的测定（1） 样品蛋白液制备 准确称取2g新鲜绿豆芽胚轴的部分，研磨成匀浆，离心分离（4000r/min,10min）。取上清液用0.9%nacl定容到10ml。（2） 含量测定 另取两只干净的试管，加入样品液0.1ml，0.9mlnacl和考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀。室温静置3min，与波长595nm处比色，读取吸光度。五 实验结果1. 标准曲线结果如表所示，并以吸光度为纵坐标，个标准液含量为横坐标做标准曲线。试管号1234567899蛋白质含量010203040506080100A5950.0000.0690.0890.2260.3390.4000.4700.5700.730 2. 样品蛋白含量的测定样品蛋白的比色结果如表，根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量。试管号A595蛋白质含量100.18625.15110.17924.17 根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量 六结果与讨论 结果： 绿豆芽蛋白质含量=1233.0ug/g 讨论
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