中性粒细胞碱性磷酸酶在血液病诊断中的应用

中性粒细胞碱性磷酸酶在血液病诊断中的应用廖亚贤浙江曲华医院检察科:目的探讨中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色在血液病患者诊断和鉴别诊断中的重要性。方法提取219名临床诊断的血液病患者和60名正常健康的人(38名男性，22名女性)的静脉血，制造血液涂片。所有血液涂片根据改进的Gomori方法进行ALP细胞免疫组织化学染色，显微镜油镜观察100个中性区，以阳性率和积分记录结果。结果急性淋巴细胞白血病(ALL)、再生障碍性贫血(AA)、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生性疾病MPD患者的NAP阳性率和积分明显高于正常对照组(P 0.05)，急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病骨髓增生异常综合征(MDS)与正常对照组无明显差异(P 0.05)。结论根据NAP活性的特点，可作为许多血液疾病的诊断及鉴别诊断的判断指标。关键词：碱性磷酸酶；中性粒细胞碱性磷酸酶染色；血液病；诊断中性粒细胞碱性磷酸酶(neutrophil IC alkaline phosp hosp se，n a p)是中性粒细胞的标记酶，检测方法简单快速，在白血病反应和恶性血液病的鉴别诊断中具有重要的临床价值。为了研究N A P活性对各血液病的诊断、鉴别诊断和疗效观察的价值，通过对219名血液系统疾病患者NAP活性观察的比较分析，讨论了其在血液系统疾病诊断和鉴别诊断中的重要性。1对象和方法1.1临床数据219例血液疾病均在2002 2008年间，我院血液科与骨髓涂片细胞学分析、病理检查及临床参考文献1一起检查，结果发生在男性114例，女性105例。疾病：急性髓系白血病(AML) 61例，急性淋巴细胞白血病(ALL)37例，再生障碍性贫血(AA) 32例，多发性骨髓瘤(MM) 32例。慢性粒细胞白血病(CML) 23例，骨髓增殖性疾病(MPD) 19例，骨髓增殖异常综合征(MDS) 15例，健康人60例，男性38例，女性22例。病人和健康的人都准备静脉采血血涂片2张。1.2试剂和仪器1.2.1试剂用Kaplow偶氮耦合方法检测NAP阳性率和积分。Kaplow偶氮耦合方法： 固定液： 25%甲醛乙醇溶液；丙二醇缓冲液：0。05 mmol/L 2-氨基-2-甲基-1，3-丙烷二醇溶液(ph 9.75)；基质孵化液(pH9 .4-9。6新鲜准备):-萘酚磷酸20毫克溶解于缓冲液20毫升，坚固的蓝色RR 20毫克；添加。木质素复水液。1.2.2实验方法和结果判断患者及健康检查者静脉抗凝剂2 m l，提取血液精制。将新鲜血固定在5 s，水洗干后，基质液37 起15米in的作用，水洗干后，再染回苏木精，再回到0.5%氨即可。N A P阳性粒子为红色。用油镜观察100个中性粒细胞，根据细胞质中N A P粒子的数量设置(-)、()、()、()分类数，并记录阳性率和积分。1.3细胞染色改性Gomori方法：新鲜乙醇95%，固定10分钟，蒸馏水轻洗，干燥；用上述方法配制基质液后(用精密PH测试条测定ph 9.4 9.6)，将37恒温水浴箱放30分钟左右，再将固定血液放入基质中温浴5小时以上；去除后在蒸馏水中轻轻清洗，自然干燥后5min在20g/L硝酸钴中；蒸馏水轻洗，自然干燥后20g/L硫化铵5min流水洗涤，干燥后5g/L李红利菲5min，自来水清洗，干燥后显微镜检查。1.4统计处理使用EpiData3.0软件构建数据库，并使用SPSS10.0统计软件数据分析。测量结果资料以x s表示，群组之间的两个比较使用Wilcoxon等级和检查分析。2结果2.1正常健康人群NAP阳性率和积分测量正常健康人口的男性NAP阳性率为28.6%，分数为39.5%。女性NAP阳性率为28.0%，分数为38.9%。在正常健康人口中，中性粒细胞碱性磷酸酶染色的阳性率和积分的值部分分布，在正常健康人口中，男性和女性NAP阳性率和积分结果进行了比较，结果显示两组之间的阳性率(P0.05)和积分差异都没有统计意义(P 0.05)。2.2 NAP阳性率和点对各血液系统疾病的急性淋巴细胞白血病(ALL)、再生障碍性贫血(AA)、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生性疾病MPD患者的NAP阳性率和积分明显高于正常对照组(P 0.05)。其中AA的NAP得分高于其他组。急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)患者的NAP阳性率和积分明显低于正常对照组(p 0.05)；骨髓增生异常综合征(MDS)与正常对照组无明显差异(P0.05)。各血液疾病的NAP阳性率和分数见表1。表NAP阳性率与分数和对照组在各血液系统疾病中的比较疾病耶稣NAP阳性率(%)NAP积分AML*6119 1126.3 15.8ALL*3743 2791.3 41.2AA*3245 3794.849.9MM*32452393.4 48.9CML*236.9126.318.0MPD (CML)*除外)*194429115.179.1MDS1529 2943.129.8正常对照组6028 1339.0 20.1与正常对照组相比，*为P0 .表示05。3讨论血细胞减少可能是由造血系统疾病或非造血系统疾病引起的，造血系统引起的血细胞减少在AA、AL、MDS、MH、MA、PNH、脾脏过度活动等方面很常见。这种疾病在临床方面和血液学变化上有很多相似之处，容易混淆，在疾病初期不容易诊断，容易误诊。本组资料显示，219名血液病患者中，急性淋巴成分白血病(ALL)、再生障碍性贫血(AA)、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生性疾病MPD患者的NAP阳性率和积分明显高于正常对照组。急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)患者的NAP阳性率和分数均明显低于正常对照组。NAP是中性粒细胞的符号酶，主要存在于成熟的中性粒细胞内，在细胞质特殊粒子释放的碱性条件下(ph 9.3 9.6)，催化多种醇和苯酚的单磷酸盐水解的非特异性水解酶。NAP活性反映了中性粒细胞激活时NAP阳性率和积分增加的成熟粒细胞的成熟度和功能2。219例血液病患者中再生障碍性贫血(AA) 32例，AA的NA P积分平均值高于其他各组疾病和对照组。AA在中性粒细胞颗粒增加，细胞回归祖先，因此感染及激素治疗等因素可以同时作用，继续提高NA P活性。观察结果显示，AA在慢NA P分数上呈下降趋势，但很难恢复正常。无论早期aa和局部非结构化AA如何，AA、NA P活动都明显增加，因此nap积分值继续增加，可以视为AA的重要早期诊断标准。研究结果表明，AA患者无论早期、后期、典型、非典型、治疗前后，NAP酶活性都表现出与其他任何贫血都无法比拟的峰值状态的特异性和敏感性。因此，NAP可能是AA的重要和敏感诊断指标3，4。摘要NAP活性观察对血液系统疾病的诊断和鉴别诊断非常重要。参考文献：1张之南，沉袠。血液病诊断和疗效标准M。第二版。北京：科学出版社，1998: 141-219。2 conyulong、jean valj