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文档简介
.,1,1、统计细菌数目常用的方法?2、通常选择菌落数为多少的平板进行计数?统计几个平板?3、稀释涂布平板法计算土样菌数的公式?各母代表的含义?4、实验设置对照的主要目的?5、鉴定选出的是分解尿素的细菌的方法?原理是什么?,背诵听写,.,2,一、基础知识(阅读P27-28页第三段,讨论回答以下问题),1、纤维素在生物圈的分布状况?2、纤维素酶的组成及作用?3、纤维素分解菌的筛选方法?4、纤维素分解菌的筛选原理?,.,3,1、纤维素在生物圈的分布状况?,2、纤维素酶的组成及作用?,纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。,纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,纤维素和纤维素酶,.,4,纤维素分解菌的筛选,1、纤维素分解菌的筛选方法:,2、纤维素分解菌的筛选原理:,刚果红染色法:这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选,刚果红是一种染料,它可以与纤维素形成红色复合物,但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,.,5,.,6,1、说出分离分解纤维素的微生物实验流程?2、为什么要在纤维素丰富的环境中寻找纤维素分解菌?滤纸埋在土壤中有什么作用?3、选择培养的目的?为什么?该实验的选择培养基为什么有选择作用?按物理性质属哪种培养基?4、鉴定该细菌用的染料是?常用的刚果红染色法有几种?分别是?试评价其优缺点5、如何进一步确定得到的是纤维素分解菌?纤维素酶发酵的方法有?纤维素酶的测定方法?,二、实验设计及操作(阅读P28-30页,讨论回答),.,7,实验操作:,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,.,8,土壤取样,取样的环境?作出这种选择的理由是什么?,选择纤维素丰富的环境,如树林中多年落叶形成的腐殖土,多年积累的枯枝败叶等等。生物与环境的相适应关系,在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境,.,9,选择培养,1、选择培养的目的:,增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分离到所需要的微生物,2、选择培养基:,参照课本29页旁栏中的比例配置,回答下列问题,是液体培养基,原因是配方中无凝固剂,有选择作用,本配方中的碳源是纤维素,所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖,用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,a、旁栏中是液体培养基还是固体培养基?为什么?b、这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,是如何进行选择的?c、你能否设计一个对照实验,说明选择培养的作用?,.,10,为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物?,在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用,.,11,刚果红染色法:,方法一:先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,方法二:在倒平板时就加入刚果红,思考:这两种方法各有哪些优点与不足?,方法一缺点会使菌落之间发生混杂;优点是显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用方法二优点是操作简便,不存在菌落混杂问题缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质,可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应;缺点二有些微生物具有降解色素的能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红,形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分,.,12,课题延伸,本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选,但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌,还需要进行发酵产纤维素酶的实验,纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。,.,13,小结,1、纤维素的基本单位和结构?2、纤维素酶的组成及作用?3、纤维素分解菌的筛选方法?4、纤维素分解菌的筛选原理?5、选择培养的目的?为什么?该实验的选择培养基为什么有选择作用?按物理性质属哪种培养基?6、鉴别培养基中鉴定细菌用的染料是?常用的刚果红染色法有几种?分别是?试评价其优缺点7、如何进一步确定得到的是纤维素分解菌?纤维素酶发酵的方法有?纤维素酶的测定方法?,.,14,植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解,回答下列问题:(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将分解成(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时,CR可与纤维素形成色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌对,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的(3)为从富含纤维素的上壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表):,注:“+”表示有,“-”表示无。据表判断,培养基甲填“能”或“不能”用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是;培养基乙填“能”或“
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