SDS法提取DNA_第1页
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SDS法提取DNA植物各个部位都可用作总DNA抽提的材料，常用的材料一般为植物幼叶。其基本原理是：先用机械的方法使组织和细胞破碎，然后加入十二烷基磺酸钠（SDS）等离子型表面活性剂，溶解细胞膜和核膜蛋白，使细胞膜和核膜破裂。再加入酚和氯仿等表面活性剂，使蛋白变性。最后加入无水乙醇沉淀DNA；沉淀的DNA，即为植物总DNA，溶于TE溶液中保存备用。三、实验材料、器具及试剂水稻幼叶高速台式离心机，振荡器，水浴箱，1.5ml离心管架，玻璃滴管，移液器，研钵，1.5ml离心管，2ml离心管，枪头，烧杯，量筒等。无水乙醇，氯仿，异戊醇，TE缓冲液（pH8.0）,抽提液（200mM Tris-HCl, PH7.5; 250mM NaCl; 25mM EDTA; 0.5%SDS）四、实验步骤取幼叶5g左右放于研钵中,加入少许石英砂，再加入400l抽提液，磨成绿色浆状。倒入2 ml离心管。约用400l抽提液洗涤研钵，也倒入离心管，将两次抽提液混匀。置于56水浴中5分钟。加入适量氯仿，振荡，充分混匀。14000rpm离心5分钟。取上清液于1.5ml离心管。加入等体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，静置直到DNA析出。14000rpm离心2分钟，去上清液。 加入70%乙醇漂洗。适当风干，溶于100-200l TE溶液中待用。五、注意事项：幼叶不宜太多；氯仿的量尽可能多些；与氯仿混合时充分摇匀，否则蛋白变性不完全。研磨幼叶后匀浆较重要，这直接影响DNA
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