白色念珠菌与抑菌效力检查方法ppt课件VIP

。白色念珠菌检查方法，1。富集培养直接或处理后取10毫升供试品溶液(相当于1g、ml、10cm2供试品溶液)，接种于适量(不少于100毫升)沙市葡萄糖肉汤培养基中，培养48-72小时。2.分离培养将上述培养物划线接种于沙市葡萄糖琼脂培养基平板上，培养24-48小时(如有必要可延长至72小时)。结果表明，沙市葡萄糖琼脂培养基上生长的白色念珠菌菌落呈乳白色，偶见黄色，表面光滑，有强烈的酵母气味；随着培养时间的延长，菌落增多，颜色加深，质地变硬或出现皱纹。如果平板上没有生长的菌落或者生长的菌落不符合上述菌落形态特征，则判断在测试物品中没有检测到白色念珠菌。如果平板上生长的菌落与上述菌落形态特征一致或可疑，应选择2 3个菌落分别接种在念珠菌显色培养基平板上培养24 48小时(必要时延长至72小时)。如果平板上没有绿色或蓝绿色菌落生长，则判断在测试物品中没有检测到白色念珠菌。3.如果平板上生长的菌落为绿色或蓝绿色，选择匹配或可疑的菌落，将其接种在1%吐温80玉米琼脂培养基上，培养24-48小时。取培养物进行染色、镜检和芽管试验。芽管试验选用1%吐温80玉米琼脂培养基，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置于湿板中，在35 37下放置1 3小时，显微镜下观察，可见孢子长出短芽管。5.如果上述可疑细菌为非革兰氏阳性菌，且显微镜下未发现厚垣孢子、假菌丝和芽管，则确定在测试物品中未检测到白色念珠菌。抑菌效力检验法体系用于测定灭菌和非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，也可用于指导生产企业制剂研发阶段抑菌剂的测定。2.如果药物本身不具有足够的抗菌活性，则应根据制剂(如水溶液制剂)的特性添加适当的抗菌剂，以防止制剂(尤其是多剂量包装制剂)在正常储存和使用期间的微生物污染和大量繁殖，并避免药物的微生物污染和对患者的损害。所有的抑菌剂都有一定的毒性，在储存过程中，由于药物的活性成分，其有效性可能会增加或减少。为了保证药品的质量和安全，防腐剂的添加量应以制剂本身是否具有抗菌活性为依据，保持最低有效量，并在药品包装上注明添加抑菌剂的名称和数量。培养基1、胰蛋白胨大豆肉汤培养基2、胰蛋白胨大豆肉汤培养基3、沙市葡萄糖肉汤培养基、培养基的适宜性检查、假单胞菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、大肠埃希菌的菌液的制备与对照菌培养基的适宜性检查相同，适宜性检查，取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌各50-100fu，分别注入无菌平板，立即倒入胰蛋白胨大豆琼脂培养基，为每个试验菌株平行制备两个平板，混合均匀，固化，即得分别取白色念珠菌和黑曲霉各50-100cfu，注入无菌平板中，立即倒入沙糖琼脂培养基，为每个试验菌株平行制备两块平板，混合均匀，固化，在20-25培养72小时，计数；同时，在上述试验中，用相应的控制介质代替被测介质。结果表明，与对照培养基相比，供试培养基的菌落数大于70%，菌落形态大小应与对照培养基一致。判断培养基的适宜性符合规定。为了达到测试的目的，根据管理的途径将测试文章分为四类见表，表产品分类药物类别1注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂和眼用制剂类别2局部给药制剂、非无菌鼻用制剂和粘膜用乳剂类别3口服非固体制剂(非抗酸制剂)类别4非固体抗酸制剂，制备菌种和菌液与培养基适用性检查试验样品接种1相同，抑菌剂的有效性可能受试验容器的特性影响，如容器材料、形状、体积和密封方法等。因此，只要测试物品的每个包装容器的数量足以进行测试，并且该容器便于获取测试菌液、根据无菌操作进行混合和取样，测试菌就应该直接接种在测试物品的原始包装容器中进行储存。如果由于试验物品的特性或每个容器的装载能力而需要将试验物品转移到无菌容器中，容器的材料不应影响试验物品的特性(如吸附)，应特别注意不要影响试验物品的酸碱度，酸碱度对抑菌剂的活性有很大影响，容器的直径应便于试验物品的进出和均匀混合。至少取5个包装完整的样品直接接种试验菌，或取适量的试验菌分别转移到5个合适的无菌容器中(如果试验菌数超过5个，相应的样品数应增加)，每个容器中接种一个试验菌。4、1、2、3类试验品的1克或1毫升接种量为105 106 cfu，4类试验品的1克或1毫升接种量为106 108 cfu。接种液的体积不得超过试验物品体积的0.5% 1%,接种量应充分混合，使试验物品中的试验菌分布均匀。5.试验过程中，接种后的试验物品应存放在20 25避光的地方。储存温度的变化应尽可能控制在最小范围内，并防止被污染。对于活菌数的测定，应验证细菌数的测定方法，因为试验物品含有抗菌活性。根据细菌计数测量的结果，计算每1毫升(g)测试样品的每个测试细菌添加的细菌数和每个间隔时间的细菌数，并转换成lg值。根据产品的类型，在规定的接种时间从每个容器中取出试验ml(g)，用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释，缓冲液的pH7.0为1: 10、1: 102、1: 103等。结果判断：1 .抑菌效果根据在每个间隔测量的细菌数相对于初始值(0小时的细菌数为1.0克)的减少程度来评价(见表)。根据有效数字的缩减规则输入测试结果，保留一个小数点。结果与表相符，可以判断该产品的抗菌效果符合规定。表面防腐剂的抗菌功效标准显示，1型试验样品的细菌数量在7天内减少不少于1.0毫克，在14天内减少不少于3.0毫克，细菌数量从14天没有增加到28天。真菌与初始值的比率在第7、14和28天没有增加。两种测试样品中的细菌数量在14天内减少不少于2.0微克，在14至28天内没有增加。与初始值相比，真菌数量在第14天和第28天没有增加。三种测试样品中的细菌数量在14天内减少不少于1.0微克，在14至28天内没有增加。与初始值相比，真菌数量在第14天和第28天没有增加。对于要测试的4种细菌，真菌与初始值的比率在第14天和第28天没有增加。注：1。在表中，“无