中药新药临床前毒理学研究.ppt

新药临床前毒理学研究，广州蓝韵医学研究有限公司外部研究开发部专注于新药和保健食品的研究，研究目的和意义第一节，因为研究意义，上市新药在临床治疗剂量中无毒，提高临床使用的安全性。成功案例：青霉素致敏导致很多患者死亡，进行了多次深入的研究，引起过敏反应的机制建立了青霉素在人体内遇到蛋白质等物质后，产生青霉素酸等反抗源，寻找与人类反应相同的动物模型豚鼠，检测这种药物的致敏方法。2，限制，WHO在临床前药物安全实验原则这本书中指出：“对生物活性物质的最缜密、最彻底的科学研究已经事先进行，但是对人们使用它仍然是不可避免的。”风险主要发生在两个方面。一个是新药本身。另一方面，它来自毒理学研究工具。(1)新药本身：化学结构和原因不断变化的药理学特性往往超过人们原来拥有的知识，超过经验和研究手段实现的预测力。(2)毒理学研究手段(动物毒性实验):实验动物和人类药物反应的物种差异；实验动物数量有限，其发生频率低的毒性反应在较小的动物中很难发现；在常规毒性测试中使用的动物多级实验室培育的品种，反应比较单一。毒性实验中使用的动物都很健康，但是临床用药患者可能同时患有多种疾病。在动物毒性试验中，大剂量处方与临床药物相去甚远。特别是毒性低、药量大的药，也会对实验结果产生幻想。3，内容和要求(1)内容：急性毒性研究(Acutetoxicology)长期毒性研究(long-termtoxicology)其他相关毒性研究，(2)要求：1。毒性剂量不仅要测量急性毒性的LD50，还要知道持续长期毒性的剂量，以便一般了解该药的一次毒性量。2.确定安全剂量范围要知道单一或多重剂量有多大效果(主要药效学)，不仅不会产生毒性或副作用，安全范围越大，效果越好。3.通过发现毒性反应动物的毒性反应症状，为临床药物的安全监测提供依据，预防毒性和副作用的发生，一旦发生，可以迅速采取措施。4.寻找有毒目标器官，它不仅能为药物毒性防治提供依据，还能为新药开发提供线索。5.必须查明判定毒性可逆性的动物是否会出现毒性反应。一般来说，可逆毒性反应对新药注册没有影响。如果有不可逆性损伤，一般不批准临床。6.救援措施特别有效，安全范围小的药。第2节急性毒性试验(Acutetoxicology)，1，定义：动物在一次或24小时多次给主体后，一段时间内发生的毒性反应。2，方法：定性观察：药物服用后动物出现什么样的中毒，其毒性的发生和消失速度，与什么组织和器官相关，最主要的毒性靶器官是什么，损伤的性质和可逆性是什么，中毒死亡过程的特点，可能的死亡原因是什么等。定量观察：观察药物毒性反应与剂量的关系，主要指标近似致死量，致死量和致死量的一半，LD50作为主要定量指标(小动物)。相关名词，最大耐受(MTD):最大容量，不会导致被测试者死亡。最小致死剂量(Minimallethaldose，MLD):单个测试动物死亡的数量。致死剂量(ld50):在某些实验条件下，造成50%动物死亡的容量。这个值是统计处理的结果。反应容量(Noobservedeffectlevel，NOEL)或无副作用容量(noobservedadverseeffectlevel，nosel)，第一，作用意义1。了解新药急性毒性的强度2。可以计算新药的相对毒性参数3。为临床毒副作用提供参考标准4。为长期毒性、累积毒性和特殊毒性试验选择剂量提供标准5。其他：系列化合物的合格率分析(不包括理化性质)也应参考LD50，看看生物效果是否有显着差异，第二，基本内容及要求(药物非临床研究质量管理规范) 1。动物符合国家有关规定水平要求，实验动物质量验证种类：啮齿动物和非啮齿动物等；重量：小鼠体重18-22g，大鼠体重120-150g，同一试验体重差异不超过20%。健康、成人；性别：男女各半；动物数：通常原则是利用尽可能少的动物获取尽可能多的信息。2 .受试者对急性毒性研究的受试者应能代表临床试验对象及上市药品，符合与临床试验对象及上市药品相同的质量标准。在试验对象为复合剂的情况下，最好根据各成分个别注射的实验和复合制剂比例，通过复合注射的试验，表明是否有增毒效果或是否出现新的毒性。如果被试者在储存条件下容易分解，最好将含有最多分解物的被试者进行的急性毒性试验与临床样品的急性毒性试验结果进行比较。3 .药物传递途径和溶于水的至少两种传递途径之一必须是临床传递途径，也必须是能够更充分地循环原型药物(例如静脉注射)的途径之一。临床上通过静脉注射处方，只有这一种方法。其他类别至少有一个临床转移途径。4 .剂量及分划剂量应从无毒剂量到严重毒性(危及生命)剂量，定为语音对照组(溶剂对照组)。一般使用与不相同浓度相同的容量给药，请参阅P45，表4-2:与其他动物传递途径相对应的一般容量和最大容量。小动物一般分为46个剂量组。各剂量组距离一般根据药物毒性大小及预先测试结果，0.65-0.85为宜。大动物可以爬上50%一样的羊，通常用6条狗。5.观察记录应在投药当天，特别是注射后4h内仔细观察和录制，然后每天上下下午持续观察1次，至少14天。观察到的指标包括动物外观、行为、分泌物、粪便等一般指标、动物死亡情况(死亡时间、临死前反应等)、动物体重变化(大约周期前、动物实验结束前计量一次，观察期间可以计量多次)。记录所有死亡情况、出现的症状和症状开始的时间、严重程度、持续时间、可逆性等。6.哈尔京在实验过程中，必须大体解剖所有实验动物，包括接近临终的动物、死动物、考试结束后活下来处死的动物。如果所有器官的体积、颜色、纹理发生变化，就要记录和进行组织病理学检查。7 .结果处理实验数据中填充了表中列出的项目，LD50值通过相应的统计方法计算。毒性有明显的性别差异的话，应该要求分别不同性别的LD50。*FDA不要求LD50。*在ICH会议上，LD50认为不再是急性毒性试验的一般要求，急性毒性研究的重点是揭露动物死前出现的毒性及其容量的关系。*但是对于毒性强的动物或细胞毒性抗癌剂，在估算第一期临床的初始剂量时，要求正确的LD50值。8 .MTD测量(最大剂量法)某些药物是以最大允许浓度和最大允许体积给动物的，但LD50还没有测量的话，只能求MTD值。最大浓度和最大允许体积一次给20只动物注射后连续观察714天，如果没有任何动物死亡，MTD g/kg。如果只有个别死亡，则应以LD50g/kg/kg书写。，第三节长期毒性试验(long-termtoxicology)，一，定义和目的1，定义：指多次给动物服用，观察药物对动物的毒性反应，一般指持续14天以上。2，目的：通过反复动物实验，表征受试者的毒性效应，预测对人体可能产生的副作用，减少临床受试者和药品上市后使用人群的药物风险。3，内容(最终执行目标):发现副作用的性质、程度、容量效率和老化关系、可逆性等，受试者可能产生的临床副作用；判断试验对象反复注射的毒性目标机关或目标组织。推测临床试验的起始容量和重复药物的安全范围。暗示临床试验中需要核心监测的安全指标。对毒性作用强、毒性症状快、安全范围小的化合物进行长期毒性研究，还可以为临床试验中的解毒或抢救措施提供参考。第二，动物毒性反应对临床试验的重要性长期毒性试验是动物非临床安全性评价的核心，是能否转化为临床试验的主要依据，为临床安全药物剂量设计提供了参考依据，为临床毒性和副作用监测以及生理生化指标测试提供了依据；动物的长期毒性研究结果一般在人体临床试验中不能完全再现。但是，如果对动物的实验性反应没有对人体的实验或文献根据，则应假定药物评价时最敏感，在长期毒性研究中，动物的毒性反应将在临床试验中再现。三、基本内容和要求1。动物理想动物应具有以下特征：受试者的生物变形与人体相似。对试验品敏感。有很多历史控制数据。需要两种动物，如啮齿动物首选的老鼠、非啮齿动物的狗或猴子。性别要求雌雄各半。一般老鼠是雌的，雄的分别是10-30只，比格犬或猴子是雌的，雄的分别是3-6只。2 .饲养管理饲料要注明供应单位，自己配制的饲料要提供配方及成分内容检测报告。各种实验动物必须在满足GLP要求的动物室饲养。要清楚地写下动物的室温、湿度、照明和通风条件。被困住的老鼠不能超过5只，雌雄分开，有条件的时候养单个笼子，实验前至少要适应观察一周。每天记录饭量，体重每周跑一次。狗必须用单笼饲养、定量饲料、比格犬实验前至少2周的训养、标准饲料喂养。杂种狗必须事先检疫，追赶虫子，在实验前至少驯服一月。猴子实验前驯化并在一月份用标准饲料喂养。3 .受试者应能代表临床试验对象及上市药品，并符合与临床试验对象及上市药品相同的质量标准。给药途径通常与临床给药途径一起需要。临床静脉注射(老鼠)可以用腹腔注射代替，I.M .或S.C .可转换注射部位，特殊情况另行说明。5.剂量和分组通常设置4个剂量组，容量以mg/kg或ml/kg为单位进行测量。通常用不相同的浓度等剂量。a .低剂量组：寻找动物安全剂量的范围，参考临床剂量设计，一般应高于整个动物有效剂量，该剂量不应有毒性反应；b .中等容量组：应该对动物产生轻微或普通的毒性反应。c .大剂量组：寻找毒性靶器官、毒性反应症状和抢救措施的基础，还提供临床毒性和副作用监测的参考，使动物明显或严重的毒性反应，或单个动物死亡；d .空白对照组：溶剂或其他成型剂。如果溶剂或成型剂有毒性，应增加正常对照组，每组老鼠10只，3个月以上雌雄20只，使用大动物时每组2只，大剂量组3只。，6 .给药期间和给药频率1。给药期间：两周的长期毒性研究通常可以支持1-3天的临床治疗药物进行临床试验和生产；给药时间为1个月的长期毒性研究通常可以支持临床治疗给药时间为3个月的长期毒性研究通常可以支持临床治疗4周的药物；给药时间为6个月的长期毒性研究通常可以支持临床治疗1月以上的药物。2.给药频率：原则上，在长期毒性研究中，动物必须每天给药。但是，给药周期可以在3个月或3个月以上：一周内给药6天。7 .测试指标a .一般观察：外观表现、行为活动、摄入量、体重、大便特性、给药区域反应等。b .血液学指标：红细胞或网状红细胞的数量、血红蛋白(Hb)、白细胞数量和分类、血小板和凝固时间。c .血液生化指标：天冬氨酸氨基转移酶(AST或SGOT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT或SGPT)等。d .疾病检查机构(1)系统的尸体检查要全面细致，为组织学检查提供基础。(2)长期系数：心脏、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、子宫、脑、前列腺。(3)组织学检查对照组、高良群、尸检异常时进行详细检查，其他剂量组仅在高良群有异常时进行检查。必须提供有重要器官(心脏、肝、脾、肺、肾、脑)和目标器官及病理损伤的照片。e .心电图出血动物的长期毒性必须这样做。8 .恢复期观察(1)方法：在最后测试对象后24小时，每组杀死2/31/2动物，检测各指标，连续观察l/31/2动物24周，进行杀伤检查。在这段时间内，除了不给受试者以外，其他观察内容与给受试者的时间相同。造成不可挽回损害的人应慎重考虑临床试验问题。(2)意思：了解毒性反应的可逆性程度和可能发生的延迟毒性反应。恢复期的长度应根据受试者的代谢动力学特性、目标器官或目标组织的毒性反应和恢复而定。9 .测试指标的时间老鼠3个月内，一般在最后一次注射后24小时，恢复期结束各一次。如果需要，可以在中间插入一次。老鼠在3个月以上的考试中间可以购买少量动物(大剂量组和对照组)检查指标。狗的长期毒性试验应该在正常2次，即未注射的时候，11.5月注射一次，静药一次后恢复期结束。10 .资料整理(1)网站上明确了试卷师、主题负责人、各种指标测量及条款方面等负责人的姓名、职称；实验开始和结束日期、实验负责单位、实验室负责人、数据保留单位等。(2)双页写测试摘要。(3)从第3页开始，要写课文、引言、资料和方法、结果。(4)要客观地记录尸检和组织病理学检查结果，用半定量的方法描述各种异常现象，揭示其数量和时间的关系。第四，毒物代谢动力学(药代动力学toxicokinetics)毒物代谢动力学与长期毒性研究相结合，是指调查药物系统暴露的代谢动力学研究，可以用于评价长期毒性研究的结果。毒性动力学试验需要选择适当的时间点采样测量，以获得相位曲线区域(AUC)、peak浓度(Cmax)、数据峰时间(Tmax)等参数。毒代动力学数值可能来自进行长期毒性研究的整个动物或部分动物，建议一些动物包括低剂量、中剂量组的动物，以估计高剂量药物的运动过程是否为非线性动力学过程。鼓励创新药物进行毒性动力学研究。第4节特殊毒性试验，第I，研究内容及意义特殊毒性试验主要不是对身体