皮肤真菌检查技术VIP

致病真菌检测，河北省望都皮肤病预防院张维娜、真菌(Fungus )是具有典型细胞结构(核、细胞器、细胞壁)的细胞壁，含有壳质和纤维素无根、茎、叶，不含叶绿素，通过腐生和寄生摄取营养可有性生殖和无性繁殖，第一部分致病真菌概况， 人类致病真菌可分为浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，对慢性、治疗有顽固性，但对身体影响较小的深部真菌，也有些真菌寄生于粮食、饲料、食品，产生毒素而引起中毒真菌病。 另一方面，生物学性状(一)的形态结构，真菌细胞结构比细菌复杂的细胞壁是壳聚糖(Chitin ) (由多N-乙酰葡聚糖组成)，包括葡聚糖、甘露聚糖和蛋白质，一些酵母菌含有脂质体。 细胞内有比较典型的核结构和细胞器。 真菌形态可分为单细胞和多细胞，单细胞真菌主要为酵母和酵母菌(隐球菌、念珠菌等)，呈圆形或椭圆形。 出芽繁殖。 多细胞真菌由菌丝和孢子组成菌丝分枝交织形成菌丝体(Mycelium )，生长着各种孢子，该真菌一般称为真菌(Mold )。 随着生活环境(如营养、温度、氧气等)的变化，某些真菌的孢子和菌丝的形态可以互相改变，这种真菌被称为双相真菌(dimorphicfungus )，如球孢子菌、组织细胞菌和芽生菌。 真菌孢子与细菌孢子的差异、真菌形态构成、真菌菌丝形态、真菌孢子形态、培养特性、多种真菌营养要求不高的常用沙保氏培养基(SDA )培养。 浅部致病真菌的最佳温度为2228，生长缓慢，14周多出现典型菌落。 深部病原性真菌培养在37最好，生长速度快，34天形成菌落。真菌菌落类型、三)异性易变，真菌易变异，在人工培养基上多次传代或孵化，出现形态结构、菌落性状、色素和毒性等变化。(四)抵抗力、真菌对干燥、日光、紫外线及一般化学消毒剂有一定的抵抗力，但充分暴露于日光，紫外线及干燥时，真菌多数被杀死，而且对2.5%碘酒、10%福尔马林敏感，一般可以用福尔马林熏蒸感染真菌的房间。 对热敏，一般可在601小时杀真菌菌丝和孢子。二、致病性和免疫性(一)致病性、真菌引起的疾病，主要是外源性感染浅部真菌侵犯皮肤、指甲、胡须等组织，强韧繁殖，产生机械刺激障碍，产生酶、酸等代谢产物，引起炎症反应和细胞病变。 深部真菌侵犯皮下、内脏和脑膜等，引起慢性肉芽肿和坏死。 2条件致病真菌感染：主要为内源性感染(念珠菌等)，也有外源性感染(曲霉菌等)。3.过敏性真菌症：真菌性过敏原(孢子抗原等)引起的过敏，如哮喘、过敏性肺泡炎和癣菌疹等。 4 .真菌毒素中毒症：侵犯肝、肾、脑、中枢神经系统和造血组织。 黄曲霉毒素、镰状抗生素、黑葡萄穗素等。(二)免疫性，1 .非特异性免疫：人类对真菌感染有天然免疫力。 皮肤分泌短链脂肪酸和乳酸、血液中转铁蛋白、中性粒细胞和单核巨噬细胞的吞噬作用、正常菌群的拮抗作用。 2特异性免疫：真菌感染中的细胞免疫是机体排菌杀菌和恢复的关键，t细胞分泌的淋巴因子，以t细胞为中心的慢性过敏反应会引起免疫病理损伤，限制和消灭真菌，阻止感染。三、微生物学诊断(一)直接检查，一.不染色标本直接镜检：直接取样，用显微镜直接观察，发现真菌菌丝或孢子存在，可初步判定为真菌感染。1 )标本的制备：2)检查方法：3)密封液：KOH溶液：本液适于检查致密且透明性低的材料(毛发、指甲、鳞屑等)。 墨：主要检测有荚膜的真菌(如新型隐球菌等)。 氢氯醛-苯酚-乳酸封闭液：该液体透明性强，仅限于不透明的标本。 生理盐水：为了观察真菌的出芽现象，用生理盐水代替氢氧化钾溶液。，2 .染色标本检查：1)革兰氏染色：各种真菌革兰氏阳性，深蓝色。 常用于酵母菌、念珠菌、孢子丝状菌、诺卡菌、组织细胞菌等。 2 )乳酸酚棉蓝染色3 )糖原染色：菌体全部染成红色。 用于标本直接涂片及组织病理切片染色。 4 )嗜银染色(GMS ) :染成黑色。5 )粘蛋白胭脂红染色法(MCS ) :主要用于新型隐球菌荚膜的染色。 隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，核呈黑色。 6 )荧光染色：主要用吖啶橙和氢氧化钾直接对涂膜、培养涂膜和组织切片进行染色。(2)培养检查，本法可确定菌种，辅助直接检查不足，通常采用铁锹培养基(SDA)(2228)，深部真菌可在血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37培养.(3)免疫学试验可检测深部感染真菌的抗体，组织细胞菌、念珠菌、曲霉菌检测深部感染真菌抗原，用于早期、快速、特异性诊断。 乳胶凝集法检测新型隐球菌病患者荚膜多糖抗原ELISA法检测念珠菌感染者甘露聚糖抗原免疫荧光法检测孢子丝状菌病患者可溶性抗原，四是预防原则，真菌感染无特异性预防，主要注意公共卫生和个人卫生的碘化物为孢子丝状菌病， 具有治疗毛霉素症效果的赤霉素、赤霉素、氯霉素等外用或内服对白癣病或念珠菌病等有良好疗效，近年来，有报道5-氟胞嘧啶(5-FC )治疗单细胞真菌感染的疗效显着的赤霉素b可用于深部全身真菌感染、第二部分浅部真菌、浅部真菌主要为皮肤丝状菌(Dermatophytes )，侵犯皮肤、毛发、指甲等角化组织引起癣病，又称白癣菌(Ringworm )，分为三属，共37种。(一)，生物学特征，(二)检查方法：1 .直接镜检：取病变部位标本，用显微镜检查有无菌丝或孢子，本法快速简便，是临床真菌检查最常用的方法，2 .分离培养：取毛发、皮屑、甲屑等标本，用70%乙醇消毒，接种沙保氏琼脂斜面培养基，25 白癣菌属、小孢子菌属、表皮白癣菌属、3 .荧光检查：本法主要用于白癣检查。 发病可在过滤紫外灯照射下发出不同颜色的荧光，如白癣菌发病呈暗绿色荧光，白癣小孢子菌属发病呈明亮绿色荧光。第三部分深部感染真菌，深部真菌是侵犯皮下组织和内脏，引起全身性感染的真菌。 常引起慢性肉芽肿样炎症、溃疡、坏死等病变，深部感染真菌分为两类：1.致病性真菌：此类真菌不存在于正常人体内部，侵入生物体后可致病，如组织细胞菌、球孢子菌、芽生菌等外源性， 我国罕见2 .条件致病真菌：人体正常菌群成员，生物抵抗力下降时才致病，如新型隐球菌、白色念珠菌、黄曲霉等。 一、念珠菌、念珠菌(canidiaAlbicans )又称念珠菌，广泛存在于自然界，也存在于正常人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道中，通常在正常机体中数量较少，不发病。 作为条件致病性真菌。(一)生物学特性，卵圆形，大小2m4m，革兰氏染色阳性。 有假菌丝体。 培养特性：典型的酵母菌落表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母味。涂膜镜检查发现表层有卵圆形芽生细胞，下层有很多假菌丝。(二)致病性和免疫性，白色念珠菌可侵犯人体多个部位，引起：1.皮肤白色念珠菌病：皮肤褶中常见的2 .粘膜白色念珠菌病：鹅肝、口角炎、阴道炎最多。 3 .内脏和中枢神经念珠菌病：肺炎、胃肠炎、心内膜炎、脑膜炎、脑炎等。 机体产生一定的免疫力。(三)检查方法和鉴定，1 .直接镜检：革兰氏染色镜检查，2 .培养特征：典型酵母菌落。3 .检定试验、1 )芽管试验：取少许要检查的念珠菌，接种到0.5ml的人或兔血清中，混合，在37的水浴中变成2-3h后，取出接种的菌液，涂片、镜子检查。 芽管发生者为念珠菌，其他念珠菌不发芽管。2)TZC试验：将白色念珠菌接种到含有0.005%氯化三唑的沙保培养基中，在2225、2448h下培养，白色念珠菌不变色，或者只有淡红色，其他白色念珠菌和酵母菌呈红色或深红色。 3 )糖发酵和糖同化试验：通过这两个试验可以鉴别常见的念珠菌。4 )动物实验：本菌对兔有致病力。 兔耳静脉注射本菌，45天死亡。 解剖见肾、肝肿胀、充血，有小脓肿，涂膜和培养见本菌和假菌丝存在。 5 )厚膜孢子形成试验：本试验也是鉴定念珠菌的重要方法之一，在玉米粉山梨80琼脂培养基上培养该菌，镜检观察厚膜孢子和假菌丝。，4 .血清学诊断用于全身性念珠菌病的诊断。 以念珠菌为抗原测定生物体的抗念珠菌抗体，二、新型隐球菌、新型隐球菌又称溶菌酶，是土壤、鸽子类、牛奶、水果等腐生菌，也存在于人的口腔。 侵犯人类和动物一般是外来性感染，但也可能是内源性感染，对人类来说，它通常是一种条件病原菌。(一)生物学特性，比较球形，直径可达520um，有肥厚荚膜，折射性强，一般染料不易着色，难以发现，被称为隐球菌，用墨阴性显像法镜检，发现用透明荚膜包裹菌细胞，菌细胞出芽，但未生成假菌丝。 在shabel琼脂和血琼脂培养基中，25和37可以生长，非致病性隐球菌在37不能繁殖。 酵母型菌落，呈现白色。 本菌可以分解尿素，与酵母菌和念珠菌鉴别。 可致病性，本菌多从呼吸道转入，引起肺部轻度炎症或隐性感染。 侵犯中枢神经系统，发生脑膜炎、脑炎、脑肉芽肿等。 并侵入骨骼、肌肉、淋巴结、皮肤黏膜，引起慢性炎症和脓肿。(三)微生物学检查，1 .直接镜检：常用的墨汁涂膜法。 2 .分离培养：在砂保培养基中，在室温、37的23天内就能形成典型的酵母型菌落。 有荚膜的人菌