乙肝疫苗生产发展简介

基因工程产品成功案例生物技术应用的模型甲基营养酵母-汉森酵母，重组酵母乙型肝炎疫苗HepatitisBVaccine，疫苗生产1，灭活疫苗，患者-病原微生物(细菌或病毒)-细菌(培养基)或病毒(细胞)培养，获得了很多病原微生物-用甲醛停用(杀死)致病微生物-纯化-铝吸附-灭活疫苗。2，弱毒活疫苗，患者-病原微生物(细菌或病毒)-改变培养条件，获得更多病原微生物-培养更多致病微生物，获得更多不再生病的微生物。-铝吸附-弱毒活疫苗。乙型肝炎病毒体外培养还没有成功。之前我们讲过细菌要在培养基上繁殖，病毒要在细胞内繁殖。例如流感病毒在鸡胚胎细胞中生长，狂犬病毒在老鼠肾脏细胞中生长，b脑病毒在Vero细胞中生长。但是乙型肝炎病毒不能在所有实验过的细胞中生长。乙型肝炎疫苗研究遇到了严重的困难。人们不得不寻找其他方法生产乙型肝炎疫苗.乙型肝炎抗原的来源，1，乙型肝炎患者的血液：血性乙型肝炎疫苗。2、重组微生物(酵母)表达(合成)构建乙型肝炎抗原(基因工程乙型肝炎疫苗)。b型肝炎疫苗开发历史11963年，Blumberg发现，与澳大利亚土著人血液中的抗原之一交叉反应的血友病患者血清中存在抗体。21968年，Prince在血清型肝炎患者的血清中发现了抗原性与澳大利亚抗原相同的病毒样颗粒，首次承认澳大利亚抗原是乙型肝炎表面抗原。1970年，Dane使用电子显微镜，在乙型肝炎患者的血清中发现了直径42纳米的完全乙型肝炎病毒粒子，以及直径22纳米的球形和棒状乙型肝炎表面抗原。4，1971年，Krugman发现加热处理的急性乙型肝炎患者血清可以部分预防乙型肝炎感染。5，1981年，Merck开发了世界上第一代乙型肝炎疫苗血液性乙型肝炎疫苗。6，1985年，北京生物产品研究所在国内开发了第一种成功的血液性乙型肝炎疫苗。7，1986年，Merck开发了世界上第一种成功的第二代乙型肝炎疫苗重组酵母乙型肝炎。8，1989北京生物产品研究所与Merck公司签订了合同，引进了重组酵母乙型肝炎疫苗产业生产技术。1993年5月开始试生产。20世纪90年代，德国莱茵生命技术公司开发了可以达到500-1000mg/L乙肝表面抗原表达水平的甲基营养酵母-汉森酵母表达系统。韩国绿色十字疫苗公司应用该表达系统实现了重组汉森酵母乙型肝炎疫苗的大规模工业生产。10、大连高新技术(韩信)生物制药公司从1998年开始重新组织开发韩信酵母乙肝疫苗，2002年6月获得国家药品监督管理局颁发的“新药证书”，2003年开始了商业生产。11化兰生物也将于2009年开始生产坂神酵母乙型肝炎疫苗。乙型肝炎疫苗发展历史，第一代乙型肝炎疫苗；血液乙型肝炎疫苗。第二代乙型肝炎疫苗；基因工程乙型肝炎疫苗。基因工程乙型肝炎疫苗，1，CHO细胞乙型肝炎疫苗。2、重组酿酒酵母乙型肝炎疫苗。(第一代重组酵母乙型肝炎疫苗)3，重组汉森酵母乙型肝炎疫苗。第二代重组酵母乙型肝炎疫苗)，乙型肝炎疫苗开发过程：n80年代早期-血乙型肝炎疫苗(第一代乙型肝炎疫苗)。1995年停产。N80年代中期-基因工程乙型肝炎疫苗(第二代乙型肝炎疫苗)。重组酿酒酵母乙型肝炎疫苗，表达水平不理想-50m g/l. 5ug/0，5ml成人剂量低，抗体效价低。重组CHO细胞乙型肝炎疫苗，低表达，2-5mg/L，帽子阻断效果不理想。表达水平低，无法达到1-3mg/L的产业化生产。N90年代初-重组汉森酵母乙型肝炎疫苗。更先进的基因工程乙型肝炎疫苗。，国外主要乙型肝炎疫苗制造商，国内主要乙型肝炎疫苗制造企业，国内乙型肝炎疫苗制造企业工艺比较。新乡花兰、大连韩信、北京天坛、花兰：菌株优良，表达水平高，净化产率高，所以总体上花兰公司的技术进一步发展。北京生物产品研究所(天坛生物)生产的乙型肝炎疫苗基本情况：生产技术：由美国默克公司介绍。年产量：1000万人，3000万个。生产设备：从美国购买。基本技术资料：菌株：重组酿酒酵母表达水平：1，35%(表面抗原/酵母总蛋白)纯化产量：20%发酵罐工作体积：500L一次发酵抗原量：50m/l ，北京天坛和新乡花兰表达水平和抗原产量比较。北京天坛和新乡花兰疫苗抗原含量与抗体反应的比较。大连韩信和新乡花兰精制阶段和精制产量比较。坂神酵母和啤酒酵母的比较，重组汉森酵母的特征(甲基营养酵母)，甲基营养酵母：以甲醇为唯一能源和碳源的酵母。1、多个HBsAg基因副本整合到染色体中，遗传稳定性好。2、发酵过程中不产生乙醇，粘度小，可进行高密度培养。3，HBsAg400-1000mg/L的高效表示。4、发酵过程中全部使用化学合成培养基，不使用酶粉等营养成分，生产费就少。5、生物安全，汉森酵母是存在于土壤、水中的酵母个体数。不含人和动物的病原体，不产生内毒素。坂神酵母根据国外基因技术规定，被归类为转基因生物安全第一组。与酿酒酵母相同的生物安全等级。外国生物安全委员会还将汉森酵母选为典型工业菌株的研究模型。重组汉森酵母乙型肝炎疫苗生产工艺，菌株小三角病大三角病种子发酵罐生产发酵罐细胞分裂，细胞碎片疏水色谱离子交换色谱过滤器除菌剂过滤铝吸附，种子批系统、种子批系统，在乙肝疫苗生产过程中，种子批系统，即按原种子批、按原种子批、按原种子批、工作种子批、每次发酵均按工作种子批接种三角瓶。种子放置保存在液氮或-80 ，目的是最小化放置和放置之间的菌种差异。重组汉森酵母乙型肝炎疫苗的人体检测结果为a，小学生：348名健康小学生(HBsAg，抗hbs，-HBc阴性)，选择年龄在6-9岁之间，随机分为3组，每组接种1批疫苗，免疫剂量为10ug/0，558结果如下。重组汉森酵母乙型肝炎疫苗免疫小学生抗体阳性率和抗体GMT，结论：1，重组汉森酵母乙肝疫苗免疫小学生后，副作用轻微。2、重组汉森酵母乙肝疫苗免疫小学生后抗体阳性率和抗体水平高。重组汉森酵母乙型肝炎疫苗的人体检测结果，b，母婴传播：HBsAg，HBeAg双阳性母亲出生的新生儿45人0，1，6免疫程序接种10ug/0，5ml重组汉森酵母乙型肝炎疫苗，获得第一免疫后3，7月血样，检测。还比较了41名健康母亲所生的新生儿和5名HBsAg阳性，以及HBeAg阴性母亲所生的新生儿。结果如下。重组汉森酵母乙肝疫苗免疫新生儿后抗体反应，重组汉森酵母乙肝疫苗对新生儿阻断母婴传播的保护作用，结论：阻断母婴传播的效果好，保护率高(95，07%)。，重组汉森酵母表达水平高，因此重组汉森酵母乙肝疫苗含有足够数量的抗原，抗原浓度是其他乙型肝炎疫苗的两倍，成人：20ug/ml，婴儿，儿童：10ug/0，5ml。因此，免疫产生的抗体不仅液滴质量高，而且抗体持续时间长。重组汉森酵母乙肝疫苗的特点：三高1，高抗体量周转率。2、高抗体滴度。帽子阻断率高。重组汉森酵母表达产品-用乙型肝炎表面抗原制备的重组汉森酵母乙型肝炎疫苗是新一代乙型肝炎疫苗，在临床试验中有优秀的“3高”征象，即高抗体阳性率、高抗体滴度、高帽子阻断率。预防乙型肝炎病毒感染：I，被动免疫：免疫球蛋白免疫球蛋白(ImmuneGlobulin)免疫球蛋白使HBsAg阴性献血者的血液变成低温乙醇馏分法，其中antiHBs的含量不确定，预防乙型肝炎病毒感染的效果也不清楚。使用免疫球蛋白的唯一原因是：预防某些乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)、乙型肝炎病毒感染：某些乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)某些乙型肝炎免疫球蛋白，使anti-HBS阳性血供者的血液成为低温乙醇馏分法，其中anti-HBs的含量是确定的低温乙醇馏分制备的特定乙型肝炎免疫球蛋白是安全的。没有证据表明可以传播艾滋病。使用特定的乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)，使用特定的乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)1，伤口和粘膜意外暴露在HBsAg阳性血中。2、HBsAg阳性妈妈生的新生儿。注：注射某些乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)后，也要同时注射乙型肝炎疫苗。特定乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)注射剂量和注射途径；伤口，粘膜意外暴露，0，06ml/kg。最大容量：5ml。HBsAg阳性妈妈生的新生儿。0，5毫升。肌肉内注射。乙肝疫苗接种容量：HBIG HBVaccine被证明是切断妈妈和孩子之间的有效措施。90%左右的婴儿在保护(妈妈、HBsAg、HBeAg )2 0，5毫升HBIG出生的12小时内，就可以接受肌肉注射。3、婴儿离开医院前注射HBVaccine肌肉。4，HBIG和HBVaccine也可以同时注入多个部位。5，1个月和6个月后，注射2号针和3号乙型肝炎疫苗。如果HBsAg()anti-HBs(-)在6-9个月内出现免疫故障，则表明HBsAg(-)anti-HBs()免疫成功，15个月后HBsAg()处于慢性运载状态。repvaccitnation加强疫苗接种1，抗体可能在最初几年后降低到可检测的水平以下。2、可检测抗体期间的长度与3针免疫后抗体的最高大小直接相关。3.美国疾病控制中心(CDC)的免疫咨询委员会(ACIP)