多肽与蛋白质类药物.ppt

多肽与蛋白质类药物,多肽与蛋白质类药物,一.多肽与蛋白质类药物概述二.多肽与蛋白质类药物的主要生产方法三.重要的多肽与蛋白质类药物的制备,一.多肽与蛋白质类药物概述,(一)多肽类药物由氨基酸缩合而成的化合物称为多肽，它们是通过一个氨基酸分子的-NH与另一分子氨基酸的-COOH脱去一分子水形成-CO-NH-键而相互连接起来的。,一.多肽与蛋白质类药物概述,一般将50或50个以下的氨基酸残基组成的化合物，列入多肽。多数无特定空间构象，某些多肽也有一定构象，但其构象的坚固性远不如蛋白质，其构象的浮动性很大。多肽在生物体内的浓度很低，在血液中一般为,但它们的生理活性很强，在调节生理功能时起着非常重要的作用。,一.多肽与蛋白质类药物概述,活性多肽主要是从内分泌腺、组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的。1953年人工合成了第一个有生物活性的多肽催产素（OT）。到了60、70年代神经肽的研究进入高潮。同时，由于很多脑活性肽也存在于胃肠道组织中，从而推动了胃肠道激素的研究.到了70年代，生物技术的发展更开拓了多肽药物的新领域细胞生长调节因子。现已发现的细胞生长调节因子已近100种.,一.多肽与蛋白质类药物概述,许多活性蛋白质，多肽都是由无活性的蛋白质前体，经过酶的加工剪切转化而来的。它们中间许多有共同的来源，相似的结构，甚至还保留着若干彼此所特有的生物活性。研究活性多肽结构与功能的关系及活性多肽之间结构的异同与其活性的关系,将有助于设计和研制新的活性多肽药物。临床上有一些确有疗效的组织提取制剂其有效成分有的还不十分清楚，从活性肽或细胞生长调节因子的角度去研究它们的物质基础和作用机制，预计可获得成效,主要多肽类药物,1多肽激素垂体多肽激素：促皮质素(ACTH),促黑激素(MSH),催产素(OT)下丘脑激素：促甲状腺激素释放激素（TRH），生长素抑制激素（GRIF）甲状腺激素：甲状旁腺激素（PTH），降钙素（CT）。胰岛激素：胰高血糖素，胰解痉多肽。胃肠胃道激素：胃泌素，胆囊收缩素一促胰激素（CCK-PZ）,缓激肽胸腺激素：胸腺素、胸腺肽,胸腺血清因子,主要多肽类药物,2多肽类细胞生长调节因子表皮生长因子（EGF）、转移因子（TF）、心钠素（ANP）等。3含有多肽成分的其他生化药物骨宁,血活素,氨肽素,蜂毒,蛇毒,胎盘提取物,脾水解物,心脏激素等.,一.多肽与蛋白质类药物概述-蛋白类药物,（一）蛋白类药物的分类（二）蛋白类药物作用方式（三）应用基因工程技术制备重要的蛋白类药物（四）蛋白质工程技术的应用,（一）蛋白类药物的分类,1蛋白质激素（1）垂体蛋白质激素生长素,催乳激素,促甲状腺激素等（2）促性腺激素人绒毛膜促性腺激素,血清性促性腺激素等（3）胰岛素及其他蛋白质激素胰岛素,松弛素等2血浆蛋白质白蛋白，免疫丙种球蛋白,纤维蛋白原,抗凝血因子等。3蛋白质类细胞生长调节因子干扰素,，白细胞介素,肿瘤坏死因子等,返回目录,（一）蛋白类药物的分类,4黏蛋白胃膜素,硫酸糖肽,内在因子等。5胶原蛋白明胶，阿胶,冻干猪皮等。明胶：牛、羊的皮、骨、肌腱中所含的骨胶原，经水煮并蒸发浓缩而得到的干燥蛋白质。治疗吐血、内脏出血，也用于胶囊、肠衣、栓剂的基质。阿胶：驴皮去毛后加水熬制而成的胶块。滋肾补血，止血。,返回目录,（一）蛋白类药物的分类,6碱性蛋白质硫酸鱼精蛋白，存在于鱼类成熟的精子中，强碱性。7蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂，亦称抑肽酶。8植物凝集素PHA、ConA。,返回目录,（二）蛋白类药物作用方式,已从生化药物对机体各系统和细胞生长的调节扩展到被动免疫、替代疗法、抗凝血剂以及蛋白酶的抑制物等多种领域,返回目录,（三）应用基因工程技术制备重要的蛋白类药物,已实现产品工业化的有几十种，并正从微生物和动物细胞的表达转向基因动植物的表达。,返回目录,（四）蛋白质工程技术的应用,鉴于一些蛋白质和多肽生化药物有一定抗原性，容易失活，体内半衰期短，用药途径受限制等缺点。应用蛋白质工程技术对其进行结构修饰，设计小分子代替大分子，并增强或增加其选择性疗效。,返回目录,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(一)蛋白质与多肽类类药物提取,分离纯化1.材料选择原料来源包括动物、植物及微生物等。选择原料时应考虑来源丰富、目的物含量高、成本低且易于提取的材料。同时应考虑其种属、发育阶段、生物状态、来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌或细胞等因素的影响。,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,2.提取将目的物从复杂的生物体系中转移到特定的人工液相体系中.提取的总要求是最大限度的把有效成分提取出来,关键是溶剂的选择.提取所用溶剂的选择标准,首先对被制备物具有最大的溶解度,并在提取中尽可能减少一些不必要的成分.常用的手段是调整溶剂的PH,离子强度,溶剂成分配比和温度范围等.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,3.分离纯化多肽及蛋白质的分离纯化是将提取液中的目的蛋白质与其他非蛋白质杂质及各种不同蛋白质分离开来的过程.常用的分离纯化方法有:(1)根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质在等电点时蛋白质性质比较稳定,其物理性质如导电性,溶解度,黏度,渗透压等皆最小,因此可利用蛋白质等电点时溶解度最小的性质来制备蛋白质.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,用等电点沉淀法可以将所需要的蛋白质从溶液中沉淀出来,还可以将提取液中不需要的杂蛋白通过改变PH而沉淀除去,一般是将PH分别调到需提纯物质等电点的两侧.用等电点法沉淀蛋白质常需配合盐析操作,而除去不需要的杂蛋白时,常需配合热变性操作.等电聚焦电泳除了用于分离蛋白质外,也可用于测定蛋白质的等电点.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(2)根据蛋白质分子形状和大小不同来纯化蛋白质蛋白质的一个特点是分子大,而且不同种类的蛋白质分子大小也不相同.可以用凝胶过滤法,超滤法,离心法及透析法等将蛋白质与其他小分子物质分离,也可将大小不同的蛋白质分离.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(3)根据溶解度的不同来纯化蛋白质分离方法有蛋白质盐溶与盐析法,结晶法和低温有机溶剂沉淀法.乙醇和丙酮是有机溶剂沉淀法中最常用的有机溶剂,由于丙酮的介电常数小于乙醇,故丙酮的沉淀能力比乙醇强.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(4).根据电离性质的不同来纯化蛋白质对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤维和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等为骨架的离子交换剂，主要是取其具有较大的蛋白质吸附容量，较高的流速和分辨率等优点。另外电泳法亦是利用电离性质的不同来分离纯化蛋白质。,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(5)根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质主要手段是亲和层析法,即利用蛋白质分子能与其相应的配体进行特异的,非共价键的可逆性结合而达到纯化的目的.一些蛋白质如胰岛素,胰高血糖素,催乳素,生长素以及酶类都可用专一的抗体作为配基进行纯化,染料配基亲和层析亦用于IL-2的纯化.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(6).根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质。利用蛋白质上的疏水区与吸附剂上的疏水基团结合,在通过降低介质的离子强度和极性,或用去垢剂的溶剂,提高洗脱剂的PH等方法将蛋白质洗脱下来.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(7).根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质这是一种以化合物在两个不相容的液相之间进行分配为基础的分离过程,称之为逆流分溶.利用逆流分溶技术分离垂体激素,氨基酸,DNA是很有效的.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(8).根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质最广泛的吸附剂有结晶磷酸钙,磷酸钙凝胶,硅胶,皂土沸石,硅藻土,活性炭等.(9).根据蛋白质的某些特殊性质进行纯化如蛋白质的热变性,耐水解酶等,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,4.分离纯化方法的选择(1)分离纯化早期使用方法的选择早期分离纯化用萃取,沉淀,吸附等一些分辨力低的方法比较有利.总的来说,早期分离提纯的方法,选择的原则一般是从低分辨率到高分辨率,而且负荷量较大为合适.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(2)各种分离纯化方法的使用顺序纯化方法顺序先后的安排,应考虑到有利于减少工序,提高效率.对于未知物通过各种方法的交叉分离纯化,还可以进一步了解制备物的性质,以补充预实验时所获得的知识片面性.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(3).分离纯化后期的保护性措施后期产品损失主要途径有玻璃器皿的吸附,操作过程中液体的残留,空气的氧化和某些事先无法了解的因素.在探索性实验中为了取得一定量的产品,提供分析鉴定之用,常常加大原材料的用量,并在后期纯化工序中注意保持样品溶液较高浓度,以防止制备物在稀溶液中变性,有时加入一些电解质以保护生化物质的活性,减少样品溶液在器皿中的残留量等.,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,(4)对分离纯化每一步骤方法的优劣进行综合评价每个分离纯化步骤方法的好坏,除了从分辨本领和重现性二方面考虑外,应应注意方法本身回收率的高低,特别是制备某些含量很低的物质时,回收率的高低十分重要.一个好的分离纯化方法应该是提纯倍数和回收率同时都有较大的提高.但必须指出,整个分离纯化步骤是连续进行的.,4.分离纯化方法的选择影响因素,1时间因素在蛋白质分离和纯化过程中，共同的问题是蛋白质反应达到平衡所需要的时间，而且为避免蛋白质的变性、微生物的污染等，操作常在低温环境中进行。通常在25时，化学反应的速率是低温5时的3-4倍。2选择离子交换层析条件的程序,4.分离纯化方法的选择,3.蛋白质分离纯化的可能的技术手段的组合,4.分离纯化方法的选择,分步分离纯化的可能步骤,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,5.溶液中蛋白质浓度的测定1.UV法（1）280nm光吸收法（2）280nm和260nm的吸收差法（3）215nm和225nm的吸收差法2.双缩脲法3.福林一酚试剂法4.考马斯亮蓝G-250染色法,二.多肽与蛋白质类药物的制备方法,6.纯度检查确定protein的纯度标准一般为：分子大小是否均一，电荷是否均一，是否具有恒定的氨基酸组成，是否具有单一的N端和C端残基，能否结晶，进一步纯化时生物活性是否有所提高等。,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,常用蛋白质纯度检查的方法有：1HPLC或FPLC2电泳均一性3免疫化学法4生物测定法,二.多肽与蛋白质类药物的制造方法,5分光光度法（1）UV法（2）IR法6高速离心法7可结晶性8N端，C端的测定9恒定的氨基酸比,返回目录,三.重要的多肽与蛋白质类药物的制备,(一)多肽类药物1.胸腺激素胸腺是一个激素分泌器官。对免疫功能有多方面的影响。胸腺位于纵隔腔上部，胸骨后方.胸腺发生于胚胎第二个月。到出生二年内，生长迅速，体积较大，到青春期仍继续发育，青春期后发生萎缩。因此胸腺原料必须采自幼龄动物.,三.重要的多肽与蛋白质类药物的制备,胸腺依赖性的淋巴细胞群T细胞直接参与有关免疫反应T细胞主司细胞免疫（机体在特异抗原的刺激下，以T细胞为主产生致敏淋巴细胞的免疫反应称细胞免疫）。,主要胸腺激素制剂,1.胸腺激素胸腺素,以胸腺为原料，按一定方法提取纯化胸腺的第五种组分。组分5，在80热稳定的由4050种多肽组成的混合物，MW为1.00015.000。pI3.59.5。分三个区域：区，区，区。其中，主要活性组分为1、5、7、3、4等。,1.胸腺激素胸腺素,主要生物学功能表现在：连续诱导T细胞分化发育的各个阶段，放大并增强成熟T细胞对抗原或其他刺激物的反应，维持机体的免疫平衡状态,1.胸腺激素胸腺素,工艺路线,1.胸腺激素胸腺素,检验方法：活力测定：E-玫瑰花结升高百分数不得低于10%。分子量15.000以下。（T细胞与绵羊红细胞产生E-玫瑰花结）。作用与用途：免疫调节剂临床用于免疫缺陷病、自身免疫病、变态反应性疾病、细胞免疫功能减退的中老年人疾病、抗衰老、抗肿瘤的治疗。,1.胸腺激素胸腺肽,是从幼年动物的胸腺中提取制备的一种具高活力的混合肽类药物制剂。MW是9.600和7.000左右的两类蛋白质或肽类，氨基酸的组成达15种，必需氨基酸含量高，还含有RNA、DNA、对热较稳定，加温80生物活性不降低。经蛋白水解酶作用，生物活性消失,1.胸腺激素胸腺肽,工艺路线,1.胸腺激素胸腺肽,检验方法：活力测定同胸腺素。分子量10.000以下。作用与用途：调节细胞免疫功能，有较好的抗衰老和抗病毒作用。适用于原发性和继发性免疫缺陷病以及因免疫功能失调引起的疾病。对肿瘤有良好的辅助治疗作用。也用于贫血、肝炎等。无过敏反应和不良的副作用。,2.促皮质素（ACTH）,脑垂体包括腺垂体和神经垂体，可分泌多种激素（表13.7）结构和性质：促皮质素是从垂体前叶提取出来的一种多肽激素。MW约为4600。易溶于水，pI6.6，经100加热，活力不减，由39个氨基酸残基组成，其24肽（124位氨基酸残基）已具有全部活性。,2.促皮质素（ACTH）,2.促皮质素（ACTH）工艺路线,2.促皮质素（ACTH）,ACTH冻干制剂每瓶25、50u，还可制成长效制剂。如ACTH-Zn注射液，ACTH-P,Zn混悬液。合成的促皮质素类似物有促皮质18肽、24肽、25肽等。检验方法：ACTH粗品（每1u/mg以上）用小白鼠胸腺萎缩法测定。ACTH精品（每45u/mg以上）用去垂体大白鼠的肾上腺维生素C降低法测定。,2.促皮质素（ACTH）,例：促皮质素ACTH粗品（1u/mg以上）用小白鼠胸腺萎缩法测定。基于ACTH能延缓胸腺前身细胞（淋巴细胞）的成熟，导致胸腺萎缩。ACTH对数剂量与一定体重下胸腺重量的平方根呈线性关系（反比）。,2.促皮质素（ACTH）检定法,供试用动物，出生1823天、体重813g的健康小白鼠，雌雄均可，每次试验各鼠间出生天数和体重相差不得过3天和3g。取供试用小鼠，随机均衡分为4组，每组动物不少于15只。每天分别给各鼠皮下注射0.1ml标准品或供试品高低剂量混悬液，共三天。最后一次注完,隔24hr，将小鼠麻醉处死。逐个称体重，剖开胸腔，小心摘取胸腺，剥离附着组织，用滤纸吸干液体，用扭力天平迅速称取胸腺重量，换算成每百克体重胸腺重量的平方根，按生物检定统计法进行结果处理。,2.促皮质素（ACTH）作用与用途,ACTH能维持肾上腺皮质的正常功能，促进皮质激素的合成和分泌，用于胶原病（关节炎、红斑狼疮、干癣）。也用于过敏症,如严重喘息、药物过敏和荨麻疹等。也可改善老年人及智力迟钝儿童的学习记忆能力。,3.降钙素（CT）结构和性质,CT是一种调节血钙浓度的多肽激素，由甲状腺内的C细胞分泌，由32个氨基酸残基组成，C-端为脯氨酸，如果去掉则生物活性完全消失。溶于水和碱性溶液,不溶于丙酮.乙醇等,难溶于有机酸.CT广泛存在于多种动物体内，既存在于哺乳动物的甲状腺、胸腺和肾上腺等组织中，也存在于鱼类如鲑鱼的终鳃体。,3.降钙素（CT）工艺路线,3.降钙素（CT）检验方法,生物活性测定法：降钙素用0.1%白蛋白溶液溶解，在雄性大白鼠进行静脉注射，1hr收集血样，原子吸收光谱法测定血清钙值，同时，用MRC标准品作对照。,3.降钙素（CT）作用与用途,主要功能是降低血钙，用于骨质疏松、高血钙症、畸形性骨炎等。用化学合成和基因工程技术制备降钙素已获成功,(二).主要蛋白质类药物的制备,（一）白蛋白（二）干扰素（IFN）（三）胰岛素（Insulin）（四）生长素（GH）（五）胃膜素（六）绒毛膜促性激素（HCG）（七）免疫球蛋白（Ig）（八）白细胞介素-2（IL-2）,（一）白蛋白,白蛋白又称清蛋白，是血浆中含量最多的蛋白质，约占总蛋白的55%，由575个氨基酸组成，单链，可溶于水，MW65000、PI4.7。加入NaCl能提高其热稳定性。,（一）白蛋白,血液的组成从健康人的血管内抽一些血放到试管里，并加上一些抗凝物质（如枸橼酸钠），从而使血液保持液体状态。静置一段时间后可发现试管内的血液分成两部分，上面是浅黄色透明的液体，称为血浆。下面为血细胞，大部分是红细胞。在红细胞表面有一薄层白细胞和血小板，因此，血液就是血浆和血细胞两部分组成的。血浆中绝大部分是水，此外还含有：蛋白质、葡萄糖、无机盐和代谢终产物等多种物质。,（一）白蛋白-工艺路线,（一）白蛋白,白蛋白的两种制品：人血清白蛋白（从健康人血浆中分离的）。胎盘血白蛋白（从健康产妇胎盘中分离的）。制剂状态：淡黄色略粘稠的澄明液体或白色疏松状（冻干）固体。作用与用途：维持血浆胶体渗透压，用于失血性休克，严重烧伤，低蛋白血症等的治疗。,（二）干扰素（IFN）,干扰素是1957年发现的第一个细胞因子药物，美国FDA1986年批准2a-IFN,2bIFN上市基因工程的、干扰素分别在1990、1993年批准上市。我国于1992年批准1b干扰素上市。目前国内大约有20家企业生产基因工程干扰素，年销售额达数亿人民币。,（二）干扰素（IFN）结构和性质,IFN系由干扰素诱生剂诱导有关生物细胞所产生的一类高活性，多功能的诱生蛋白质。IFN从细胞中产生和释放之后，作用于相应的其他同种生物细胞，并使其获得抗病毒和抗肿瘤等多方面的免疫力。,（二）干扰素（IFN）结构和性质,人IFN按其抗原性不同，分为、三型，根据氨基酸序列差异，同一型别又分为若干亚型。三种IFN的理化与生物学性质有明显差异,（二）干扰素（IFN）生产工艺,工艺路线,（二）干扰素（IFN）工艺过程,分离灰黄层NH4Cl处理，溶解残存的红细胞。起动诱生，加入人-IFN正式诱生，加入仙台病毒(在鸡胚中培养）收获，将培养物离心，上清液即为粗制IFN纯化,（二）干扰素（IFN）检验方法,国际上规定，能保护50%细胞免受病毒攻击的浓度即为一个IFN活性单位.我国用微量板染色的病变抑制法测定,（二）干扰素（IFN）作用与用途,IFN具有抗病毒、抗细胞分裂、免疫调节作用。可用于病毒性疾病、恶性肿瘤、病毒引起的良性肿瘤的治疗,（二）干扰素（IFN）作用机制,（二）干扰素（IFN）作用机制,干扰素几乎对所有病毒都有一定抑制作用，但它对正常细胞及肿瘤细胞也有明显抑制作用，对迅速分裂的细胞的抑制作用尤为明显。注意：用作治疗的干扰素往往剂量较大，而且其结构同自身产生的天然干扰素有着或或小的差别，因此也容易诱导干扰素抗体（抗IFN）的产生。一旦产生抗IFN，就会使药效下降。,（三）胰岛素（Insulin）,1922年从胰脏中提取得到Insulin。1923年开始供应临床使用。1955年首次报道了胰岛素的氨基酸序列；我国在1965年在世界上首先成功完成牛结晶胰岛素的全合成工作；1969年确定了胰岛素的三维结构；1979年克隆了胰岛素基因；1982年胰岛素被批准上市，成为第一个投放市场的基因工程药物,（三）胰岛素（Insulin）,糖尿病：胰岛素分泌不足或作用障碍，致使血糖升高，肾脏不能将肾小球滤液中的葡萄糖重吸收回血，出现尿糖增加，并伴随多尿，引起多饮多食，体重减少。胰岛中的胰岛素原经过酶水解产生胰岛素，进入血液循环。,（三）胰岛素（Insulin）,胰岛素原是由一条连接肽（C肽）一端与胰岛素的A链的N端相连，另一端与B端相连。胰岛素由51个氨基酸组成。有A、B两链，（A链21个、B链30个），两链由两个二硫键相连。,（三）胰岛素（Insulin）,人体分泌胰岛素过程,（三）胰岛素（Insulin）,胰岛素立体结构图,（三）胰岛素（Insulin）,不同种属动物的胰岛素，主要差别在A链的第8-10位氨基酸及B链的第30位氨基酸（C末端上）,（三）胰岛素（Insulin）性质,胰岛素为白色或类白色的扁斜形六面体结晶粉末难溶于水，易溶于稀酸或稀碱溶液，也易溶于80%以下的乙醇或丙酮。在90%以上乙醇或80%以上丙酮中难溶。在高浓度锌的solu中pH68时胰岛素溶解度急剧下降pI5.30-5.35分子量5000多易与Zn2+,Cd2+,Co2+等2价金属离子结合。在锌盐存在下，胰岛素的pI可增至6.0左右。,（三）胰岛素（Insulin）性质,胰岛素在弱酸性水溶液或混悬在中性缓冲液中较为稳定。在水溶液中胰岛素分子受pH、温度、离子强度的影响产生聚合和解聚现象。胰岛素可被胰岛素酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶等水解，不能口服，只能注射。在血液及组织中也能被蛋白酶水解，因此在体内失效很快，半衰期很短。药用胰岛素常制成锌胰岛素，也可制成鱼精蛋白胰岛素。,（三）胰岛素（Insulin）工艺路线,（三）胰岛素（Insulin）说明与讨论,（1）胰脏质量是胰岛素生产中的关键。采摘胰脏要注意保持腺体组织的完整，避免摘断，要立即深冻。胰尾部分含胰岛素含量较高。并贮存不宜过久。,（三）胰岛素（Insulin）说明与讨论,（2）第一次提取用86%乙醇，与胰糜混合后，其最终百分浓度为70%左右，不仅能完全溶解胰岛素，而且能抑制蛋白水解酶的活力。（3）草酸是弱酸，较温和，控制pH在2.5,不仅胰岛素较稳定，还能抑制蛋白水解酶的活力。（4）提取温度控制在10-15，因为温度偏高会增强酶对胰岛素的破坏作用，会使油脂含量增加，影响分离工序。,（三）胰岛素（Insulin）说明与讨论,（5）碱化时pH控制在8.2-8.4，pH低了除碱性蛋白不完全，且不易过滤，但在碱性条件下，胰岛素不稳定，其蛋白分解酶活力增加，因此pH不应过高，操作应尽快进行。（6）浓缩能直接影响胰岛素的收率，采用离心薄膜浓缩，能缩短受热时间，避免效价损失。（7）浓缩除去乙醇后，油脂与水呈乳浊液，采取速热速冷，先热后冷，可将乳浊液破坏分成两相，分离油脂，也可除去部分杂蛋白。,（三）胰岛素（Insulin）说明与讨论,（8）在常规的结晶胰岛素中，尚含有一些杂蛋白抗原成分，如胰岛素原，胰高血糖素等。美英药典主要控制两个指标，即分子量大于胰岛素的蛋白质和胰岛素原,（胰岛素原等大分子杂质使病人使用后出现付作用，产生抗体引起皮下脂肪萎缩）。用超细sephadexG-50凝胶过滤，可使结晶胰岛素进一步纯化。,（三）胰岛素（Insulin）说明与讨论,（9）胰岛素制剂，有速效、中效、延效三种类型。新剂型：眼用膜剂，鼻腔给药的气雾剂、直肠用栓剂、以及口服的脂质体、微囊、乳剂、微型缓释泵等。（10）胰岛素结构修饰。（11）酶促半合成人胰岛素经胰蛋白酶的转酰胺作用，将猪胰岛素转化为人胰岛素。,（三）胰岛素（Insulin）说明与讨论,（12）重组DNA技术制造人胰岛素AB链合成法反转录法,AB链合成法,（三）胰岛素（Insulin）检验方法,效价测定：药典采用的是家兔血糖降低法（与标准品对照）。,（三）胰岛素（Insulin）作用与用途,Insulin是调节血糖水平的重要激素，能使血糖降低。主要用于治疗Insulin依赖型糖尿病以及糖尿病引起的其它病症和精神分裂症的休克疗法。,（四）生长素（GH）,hGH是垂体前叶分泌的一种促进生长的蛋白类激素。由191个氨基酸组成，含两个-S-S-，MW21700，pI4.9，N端1134个氨基酸段为活性所必需，C端一段可能起保护作用，相当稳定，室温下可放置48h。有明显的种属特异性,只有灵长类的生长激素对人有活性。,（四）生长素（GH）,生产工艺：基因工程法制备hGH合成hGH基因，构建表达载体，细菌转化和表达hGH，提取、纯化，成品。表达系统包括大肠杆菌、枯草杆菌、哺乳动物细胞。还开发出一种转基因小鼠的原型生长系统，从鼠乳汁中获得hGH，每1L乳汁中含0.6ghGH,（四）生长素（GH）,检验方法：生物测定作用与用途：hGH有促进骨骼、肌肉、结缔组织和内脏增长的作用，对因垂体功能不全而引起的侏儒症有效。还用于身材矮小，伤口愈合、烧伤、软骨生长、骨折愈合等。另外人生长激素受体拮