第24章_自身免疫性疾病及其免疫检测.ppt

,第二十四章自身免疫性疾病及其免疫检测,第一节概述一、自身免疫性疾病的分类二、自身免疫性疾病的共同特征,第二节自身免疫疾病与免疫损伤一、自身抗原二、免疫调节异常三、遗传因素,第三节常见的自身免疫性疾病一、由型超敏反应引起的自身免疫性疾病二、自身抗体免疫复合物引起的自身免疫性疾病三、T细胞对自身抗原应答引起的自身免疫性疾病,第四节常见自身免疫性疾病的自身抗体检测一、自身抗体的特性二、抗核抗体的检测与应用三、抗ENA抗体谱的检测与应用四、与小血管炎相关的自身抗体检测与应用五、与RA相关自身抗体的检测与应用六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用,第五节自身抗体检测的临床应用一、自身抗体检测的一般原则二、实验室方法的选择及结果的确认,第六节自身免疫性疾病的相关实验检测一、免疫球蛋白及补体检测及临床意义二、淋巴细胞检测及临床意义三、细胞因子检测及临床意义四、循环免役复合物检测及临床意义,第一节概述,自身免疫耐受（autoimmune-tolerance）:正常情况下，机体免疫系统能识别“自我”，对自身组织成分不发生免疫应答反应，或仅产生微弱的免疫应答，此为自身免疫耐受。自身免疫(autoimmunity):是指机体免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象。自身抗体(autoantibody):针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体。,一、自身免疫性疾病分类,系统性自身免疫病(systemicautoimmunedisease)或器官非特异性或全身性自身免疫病器官特异性自身免疫病(organ-specificautoimmunedisease)或局限性自身免疫病,按疾病累及的系统区分,按器官特异性分为两类,结缔组织疾病神经肌肉疾病内分泌性疾病消化系统疾病泌尿系统疾病血液系统疾病生殖系统疾病皮肤组织疾病循环系统疾病,器官特异性非器官特异性桥本甲状腺炎扩张性心肌炎自身免疫性溶血性贫血系统性红斑狼疮原发性粘液水肿恶性贫血特发性血小板减少性紫癜干燥综合征甲状腺机能亢进自身免疫性胃炎特发性粒细胞减少症类风湿关节炎Addisino病自身免疫性肝炎绝经过早（少数病例）硬皮病1型糖尿病原发性胆汁性肝硬化男性不育（少数病例）多发性肌炎/皮肌炎重症肌无力原发性硬化性胆管炎交感性眼炎混合性结缔组织病多发性硬化症溃疡性结肠炎晶状体源性葡萄膜炎系统性血管炎脱髓鞘疾病克罗恩病抗磷脂综合征寻常型天疱疮自身免疫性肾小球肾炎肺肾出血综合征,自身免疫病的“病谱”,1.多数病因不明2.患者以女性居多，并随年龄增加发病率有所增加3.有遗传倾向4.患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋巴细胞存在,二、自身免疫性疾病的共同特征,5.疾病有重叠现象，即一个病人可同时患一种以上自身免疫病6.病程一般较长，多迁延为慢性7.病损局部可发现淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞等浸润8.免疫抑制剂治疗可取得一定疗效,在某些情况下，机体的自身耐受遭到破坏，禁忌细胞株活跃，机体免疫系统针对某些自身组织成份产生了免疫应答，就可能导致自身免疫病的发生。,第二节自身免疫疾病与免疫损伤,隐蔽抗原的释放自身成分的改变共同抗原引发的交叉反应,一、自身抗原,淋巴细胞旁路活化多克隆刺激剂的旁路活化辅助刺激因子表达异常自身致敏T细胞与自身抗原应答,二、免疫调节异常,三、遗传因素,第三节常见的自身免疫性疾病,由于病理性的自身免疫应答可发生在体内任何组织器官，临床上常以病理损害的机制来区分各类自身免疫性疾病，而许多自身免疫性疾病与超敏反应的发生髻之密切相关，因此，可分为由型超敏反应引起的自身免疫性疾病，由型超敏反应引起的自身免疫性疾病及由T细胞对自身抗原应答引起的自身免疫性疾病。当两种或两种以上的自身免疫病出现混合的临床表现时，称为混合性结缔组织病（mixedconnectivetissuedisease，MCTD）。,抗血细胞表面抗原的抗体引起的自身免疫性疾病(如:AIHA/自身免疫性溶细胞贫血;ITP/免疫性血小板减少性紫癜)抗细胞表面受体抗体引起的自身免疫性疾病(如:MG/重症肌无力;Gravesdisease/毒性弥漫性甲状腺肿)细胞外抗原的自身抗体引起的自身免疫性疾病（如：Goodpasture综合征/肺出血肾炎综合症）,一、由II型超敏反应引起的自身免疫性疾病,如：SLE/systemiclupuserythematosus/系统性红斑狼疮；RA/rheumatoidarthritis/类风湿性关节炎；SS/sjogrensyndrome/干燥综合症,二、自身抗体免疫复合物引起的自身免疫性疾病,如：DM1/I型糖尿病；MS/多发性硬化症,三、T细胞对自身抗原应答引起的自身免疫性疾病,第四节常见自身免疫性疾病的自身抗体检测,自身抗体（autoantibody）是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体(谱)分类:脏器特异性自身抗体脏器非特异性自身抗体,自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤,一、自身抗体的特性,自身抗体免疫球蛋白补体淋巴细胞细胞因子,自身免疫性疾病的主要实验检测,1948年Haragraves等发现LE细胞现象1957年Holborow等应用IIF检测ANA1961年Beck等发现ANA不同荧光染色模型6070年代IIF、ID、CIE应用新的自身抗体1979年Towbin等应用免疫印迹技术检测自身抗体80年代IB、RIP应用蛋白多肽水平认识自身抗原1987年DNA基因重组技术开始应用自身抗体研究近十年应用分子生物学技术,自身抗体研究发展简史,抗核抗体（ANA）抗可提取性核抗原抗体（ENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）类风湿因子（RF）抗角蛋白抗体（AKA）抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）抗心磷脂抗体（ACLA）,常检测的自身抗体,常见自身免疫性疾病的标志抗体,间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-blot）酶免疫斑点法,检测自身抗体常用的方法,抗核抗体:以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。,二、抗核抗体的检测与应用,抗核抗体谱,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗体等；以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；以抗原的化学名称分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。,抗核抗体谱的分类和命名,间接免疫荧光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法（Western-blot）,抗核抗体检测方法,间接免疫荧光法示意图,细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型(dots),IIF检测ANA荧光染色模型,斑点型（nRNP/Sm）,高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。,斑点型（SSA/SSB）,抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮（100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。,均质型,抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体抗核小体抗体(nucleosome),周边型,可见于胶原病、PBC、CAH等患者,核点型（DOTS）,见于SLE、SS、PBC、风湿病,抗着丝点型,PSS局限型标志抗体,抗原纤维蛋白型,仅见于5%10%的PSS，男性高于女性,抗RNA多聚酶型抗体,仅见于硬皮病患者，阳性率为4%,抗PM-Scl（PM-1）抗体,见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎DM/弥漫性PSS）,抗Scl-70型,PSS弥漫型的标志抗体,增殖细胞核抗原型（PCNA）SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关,抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体,抗线粒体抗体（AMA）,SLE标志抗体,原发性胆汁性肝硬化标志抗体,抗Jo-1抗体,抗高尔基体抗体,多发性肌炎（PM）标志抗体,偶见于SLE和SS,抗肌动蛋白抗体,见于自身免疫性慢性活动型肝炎,抗双链DNA抗体,抗dsDNA抗体与细胞核DNA（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。,抗双链DNA抗体,检测方法及应用,间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗dsDNA抗体最常用的方法。抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%100%，但其敏感性仅为30%50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。,检测方法及应用,抗dsDNA抗体,SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,抗核小体抗体,核小体（nucleosome）是真核生物细胞核染色质的基本单位。凋亡细胞是核小体的重要来源，当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活B细胞产生抗核小体抗体（Antinucleosomeantibody,AnuA）。,检测及应用,AnuA的检测通常采用ELISA检测法。AnuA具有同抗ds-DNA抗体相同的诊断特异性，可达到95%，在系统性硬化（SSc）病中可有20%50%低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。AnuA的表达与SLE病情活动分数相关。,检测及应用,抗ENA抗体谱:可提取核抗原抗体的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白,三、抗ENA抗体谱的检测与应用,抗可提取性核抗原（ENA）抗体,双向免疫扩散（ID）对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（Western-blot）ELISA酶免疫斑点法,ENA检测方法,免疫印迹法,SDS-PAGE电泳,转移电泳,酶免疫检测,免疫印迹法,抗可提取性核抗原（ENA）抗体,抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%30%）抗nRNP抗体：MCTD95%100%（高滴度）抗SSA抗体：PSS60%75%，其它CTD抗SSB抗体：PSS10%40%，其它CTD抗Scl-70抗体：SSc25%75%,标记性抗体抗Jo-1抗体：PM/DM25%，标记性抗体抗rRNP抗体：SLE特异性抗体（10%30%）,抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,四、与小血管炎相关的自身抗体检测与应用,荧光染色型,靶抗原,胞浆型(cANCA),蛋白酶3（PR3）杀菌/通透性增高蛋白（BPI）,核周型(pANCA),髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（HLE）,非典型型(aANCA),兼有两种特性,ANCA荧光染色型与靶抗原,周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA),主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎,ANCA临床应用,髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关,杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（PR3）与Wegeners肉芽肿（WG）密切相关。仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3可超过95%，活动期几乎100%阳性。,组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF),可见于SLE、IBD、PBC、PSC等,RA早期诊断相关自身抗体抗角质层蛋白抗体（AKA）：1979年Young等报告靶抗原：filaggrin（40KD）抗核周因子（APF):1964年Nienhuis等报告靶抗原：profilaggrin（37-41KD）及其降解产物抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）：1993年Simon等报告靶抗原：filaggrin（40KD）抗Sa抗体：1994年Despres等报告靶抗原:50/55KD非酰基多肽，半抗原-瓜氨酸抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）：1998Schellekens,五、与RA相关自身抗体的检测与应用,类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）为抗变性IgGFc的自身抗体，主要是IgM型致病机理：RF与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。,1.胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF2.速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定IgM-RF3.ELISA定量、准确，可测定不同类型的RF,检测方法,（1）RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,临床应用,（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。（3）IgG-RF与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，在正常人及非RA患者中很难检出。（4）IgA-RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。,AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。,抗角蛋白抗体（AKA）,常用方法：ELISA临床意义：RA特异性自身抗体，敏感性65%85%，特异性为94%98%；高浓度抗CCP抗体是RA发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。,抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）,自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎自身免疫性肝炎(AIH)原发性胆汁性肝硬化(PBC)原发性硬化性胆管炎(PSC)重叠综合征,六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用,在多种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机制中起重要作用自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义,自身免疫性肝病与自身抗体,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,疾病类型相关自身抗体自身免疫性肝炎（AIH）型AIHANA/ASMA型AIHanti-LKM-1anti-LC-1型AIHanti-SLA(可溶性肝抗原)原发性胆汁性肝硬化（PBC）AMA(M2/M4/M8/M9)anti-gp210，sp100ACA原发性硬化性胆管炎（PSC）pANCA,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）抗促甲状腺素受体抗体（TSH-RAb）,七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用,重症肌无力（MG）自身抗体谱：抗骨胳肌抗体（ASA）、抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体多发性硬化（MS）自身抗体谱：抗髓鞘碱性蛋白（MBP）抗体、抗脑苷脂抗体、抗神经结苷脂抗体急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（格林巴利综合征）自身抗体谱：抗髓鞘糖脂抗体、抗髓鞘硫脂抗体,八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用,大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。,第五节自身抗体检测的临床应用,筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合选择相关的自身抗体检测项目切忌盲目的全面检测实验中应同步设置阳性和阴性对照,一、自身抗体检测的一般原则,95%99%可排除SLE（）SLE治疗缓解病情特重（大量IC沉积消耗抗体）（）低滴度常见于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断SLE的依据ENA抗体谱检测（）不能排除抗dsDNA、Sm、rib抗体（）可帮助诊断,ANA初筛,二、实验室方法的选择及结果的确认,ANA在自身免疫性疾病中的检出率,第六节自身免疫性疾病的相关实验检测,在自身免疫病患者体内，因有多种自身抗原的存在，自身抗体的种类也可有交叉重叠现象，故实验中检测出多种自身抗体阳性时还必须结合临床症状进行综合分析。,自身抗体免疫球蛋白II型及I