第三章-微生物药物的产生菌.ppt

微生物药物研究的一般过程，筛选模型的建立，生产菌的筛选，细菌的保存，细菌的繁殖，发酵培养，分离，纯化，产物的结构鉴定，药物评价，工业生产，作用机理的研究，生产菌，第三章微生物药物生产菌，链霉菌属：氨基环醇，聚酮体，多肽，核苷，芽孢杆菌属：多肽，假单胞菌属：含氮杂环粘细菌属：埃坡霉素，曲马菌素，降血脂药轮霉素，青霉属：青霉素类，灰黄霉素，主要生产菌。自从发现链霉素以来，抗生素的总量迅速增加。到2002年，从微生物中分离出22000多种生理活性物质，其中抗生素20000种，放线菌(80%为链霉菌属)占45%，真菌占38%，其他单细胞细菌(主要是假单胞菌和枯草芽孢杆菌)占17%。另一组数据是截至2002年，约8700种抗生素来自放线菌，4900种来自真菌，2900种细菌来自其他来源。这两个统计数字大致相似。放线菌、丝状结构放线菌是革兰氏阳性菌，它们能形成类似霉菌的细长丝状菌体。电环境中的放线菌、青霉的孢子形成结构、第一节抗菌产药菌的筛选、真菌菌、海洋微生物甚至极端环境微生物可以通过设置不同的培养基和培养条件来选择性地分离：抗生素的早期鉴定、抗菌谱(根据不同的抗菌效果):广谱抗生素、抗革兰氏阳性菌抗生素、抗革兰氏阴性菌抗生素、抗真菌抗生素、 纸色谱的八种溶剂系统：BuOH(H2O)BuOH(H2O)2% PTSA(4-甲苯磺酸)BuOH : HAC : H2O(233601:1)BuOH(H2O)2%六氢吡啶0.5摩尔/磷酸缓冲液H2O(BuOH)用BuOH 2%PTSA苯：甲醇(4:1)饱和，滤纸用0.5摩尔/磷酸缓冲液75%处理人细胞没有，因此它具有更好的选择性：支原体D-丙氨酸-D-丙氨酸二肽合成抑制羧肽酶和抑制糖肽类抗生素的筛选(二乙酰-L-赖氨酸-D-丙氨酸-D-丙氨酸中和万古霉素的作用)细菌自溶酶诱导剂，并根据其作用机理建立了筛选模型： 细菌叶酸代谢抑制剂脱氧核糖核酸回转酶抑制剂：回转酶是一种改变细胞膜通透性的物质，维持脱氧核糖核酸的高分泌状态：增加通透性，使药物进入细胞作用于细胞外膜，作用于细胞外泵；筛选：b -内酰胺酶抑制剂、氨基环醇类抗生素灭活酶和链霉素乙酰转移酶对不同的细菌来源有特定的方法。在新药研究过程中，通过对化合物活性的筛选，获得具有生物活性的先导化合物，这是创新药物研究的基础。筛选：传统筛选：是制药行业新药发现的来源之一，其特点是样本量小、速度慢、模型少。许多药物作用受体已经被分离和纯化。一些基因和相关调节物质的功能已被相继阐明。这使得许多在生命活动中发挥重要作用的生物大分子直接成为大规模药物筛选的新模型，使药物筛选模型从传统的整体动物、器官和组织水平发展到细胞和分子水平。筛查方法和技术发生了根本性变化。新的高通量筛选技术、自动控制集成应用机器人、基于新科学原理的检测方法、计算机信息系统等技术已经出现。以酶活性、受体结合和受体功能的变化为检测指标，可以在很短的时间内完成大量的化合物活性筛选，大大加快了新药的研发进程。随着分子生物学的发展，有可能克隆出大量可用作靶蛋白的蛋白质筛选出的化合物可作为先导化合物，用于进一步研究和开发新一代安全有效的新药。高通量筛选(HTS)，高通量药物筛选平台的组成：化合物库、靶标选择、靶标和化合物反应检测方法的建立、靶标药物的高通量筛选和数据信息处理系统。通过针对各种药物靶标筛选多种合成和天然化合物，找到最佳先导化合物，并进一步用于新药开发。特点：规模大，速度快，成本相对较低，缩短新药开发周期，寻找最佳新药。荧光高通量筛选系统、细胞表面受体结合试验、荧光免疫酶标记试验(FLISA)、细胞毒性试验(cytotoxity)和凋亡筛选试验，在筛选物种的过程中，应注意随时与已知化合物的数据库进行比对，如JournalofAntibiotics抗菌数据库。以便不重复工作或获得没有主要活性的化合物。在1997年，史黛克布拉伯特根据16SrRNA/rDNA的序列分析了：在微生物产药细菌分类的第二部分中，放线菌广泛分布于自然界，具有分枝菌丝和高的碳含量。细菌(细菌)厚壁菌(放线菌)放线菌(放线菌科)，瑞典博物学家林奈的300岁生日2004，基因组DNA (G C)%(鸟嘌呤和胞嘧啶的摩尔百分比)核酸分子杂交(DNA-DNA，DNA-rRNA)rRNA核苷酸序列分析DNA指纹技术基于限制性内切酶消化的DNA指纹技术基于聚合酶链反应技术。基因水平，同一物种内不同菌株的G Cmol%含量差异应小于4 5%，同一物种的差异应小于10 15%，差异10%不相同。原理：根据DNA分子解链的可逆性和碱基配对的特异性，将不同来源的待测DNA在体外加热解链，在适当的条件下将互补碱基重新配对，然后确定百分比(以同源性%或碱基相似性%表示)。百分比越高，两者之间碱基序列的同源性越高，即遗传关系越密切。同样的，应该是100%。脱氧核糖核酸-脱氧核糖核酸杂交，核酸分子杂交就是直接比较不同微生物之间的基因组差异，所以结果更可靠。从测试的细菌中提取DNA，成对混合，其中一个被标记，并且过量添加未标记的以避免标记的DNA本身退火。对照的放射性强度被认为是100%，并根据杂交的数量进行分类。从分离细胞中提取的总DNA的聚合酶链反应扩增序列的比较/blast;分类系统进化树的构建和16SrRNA核苷酸序列分析系统进化树的构建已成为现代分类工作的主要内容。生长在富盐培养基上的变形细菌的16SrDNA系统进化树，系统发育-概述，基因组测序？454测序技术，/,the世界著名的菌株收集中心。美国农业研究服务收藏http:/NRRL。北AUR。美国农业部。GOV/。ATCC有各种各样的收藏品，几乎涵盖了所使用的生物物种：细菌、噬菌体、细胞株和杂合体、丝状真菌和酵母、植物种子、原生动物、藻类、病毒和抗血清、动物、植物等。ATCC鼓励世界各地在ATCC保留生物。它还为研究人员提供付费服务。2004年，ATCC开设了两个亚洲出版中心，新加坡和香港。ATCC和ARS，ARS是第一个保存专利菌株的地方，而且它的规模和收集的生物物种都远不及ATCC。只有霉菌、原核生物(主要是细菌)、酵母等三类。它的专利品种没有列出。ATCC和ARS菌株都有一些，如雷帕霉素产生菌株吸水链霉菌。吸水链霉菌(链霉菌亚种)是ATCC29253和NRRL5491。NRRL是NorthernRegionResearchLab的缩写，指的是ARS。，英国国家标