课件2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数、一、课题背景、一、尿素的利用、尿素是重要的农业氮肥。 尿素不能直接被农作物吸收。 土壤中的细菌把尿素分解成氨后再用于植物。 2、细菌利用尿素的原因是土壤中的细菌分解尿素是因为它能合成尿素酶。 3、常见的降解尿素的微生物、芽孢杆菌、小球菌、假单胞菌、杆菌、纺锤状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能降解尿素。 4、课题目的：从土壤中分离能分解尿素的细菌，统计每克土壤样品含有多少细菌，二、研究构想： (一)筛选菌株，(二)统计菌落数，(三)设置对照，一、实例：寻找目的菌种原因：因为温泉温度为70800C，所以淘汰大部分微生物的只有Taq细菌。 DNA聚合酶链反应(PCR )是体外大量复制少量DNA的技术，该技术需要使用高温(930C )的DNA聚合酶。 在美国黄石国家公园的温泉，(1)筛选菌株的方法： (1)抑制很多微生物不能生长。 (2)实验室微生物的筛选原理：人为目标菌株(包括营养、温度、pH等)的生长提供了有利条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 分离一种微生物，根据其微生物特征，必须包括营养、生理、生长条件等结果：培养一段时间后，该菌数上升，用平板稀释等方法纯化培养分离。 3、分解土壤中尿素的细菌分离和计数所需的培养基：从物理性质来看，该培养基属于哪一类？ 固体培养基、该培养基中碳源、氮源是什么？ 碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素，培养基的氮源是尿素，只有能合成尿素酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源。 缺乏尿素酶的微生物不能分解尿素，缺乏氮源不能发育繁殖，受到抑制，因此可以在该培养基上选择分解尿素的微生物。 4、培养基选择分解尿素微生物的原理，5、如何证明该培养基具有选择性？以尿素为唯一氮源的培养基、牛肉膏培养基，分离尿素细菌，判断该培养基的选择性，仅生长尿素细菌，生长大量微生物，是，1、用显微镜直接计数：利用血球计数板，用显微镜计算一定容积样品中的微生物数量。 不适合区分死菌和活菌的运动细菌计数的需要较高细菌浓度的个体小细菌在显微镜下很难观察到的缺点：(2)统计菌落数，(3)常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品的菌落数=(CV)M，2 .间接计数法(活菌计数法)，原理：在稀释度足够高的情况下，微生物在固体培养基上形成的菌落是从单一细胞繁殖的，也就是说，一个菌落表示原单一细胞。 其中，c表示以一定稀释度在平板上生长的平均菌落数，v表示涂布平板时使用的稀释液的体积(ml )，m表示稀释倍数。 注意事项，为了保证结果正确，一般选择的菌落数用30300的平板计数。 为了使结果接近真值，将相同的稀释度加入三个以上的平盘中，涂布、培养，算出菌落的平均数。 统计的菌落多低于活菌的实际数量。 用涂布平板法选择的稀释度很重要，一般3个稀释度中第2个稀释度出现的平均菌落数最好是50个左右。 例题：统计菌落数的方法是() a.b.c.d.、d，涂布平板法重量法直接计数法比浊法生理指标法膜过滤法，设置对照的主要目的是排除实验组的非试验要素对实验结果的影响，提高实验结果的可靠性例如：在进行分解尿素的细菌筛选和统计菌落数的实验时，a先生从对应的106倍稀释培养基中筛选出了约150个菌落，而其他同学在相同稀释度下只筛选出了约50个菌落。 分析原因。 原因： (1)土的花纹不同，(2)培养基的污染和操作错误(或混入了其他含氮物质)，(3)设置对照，总结：从这个事例可以看出，实验结果需要说服力，设置对照是不可或缺的。 提案1 :其他同学用与a先生相同的土色进行实验，提案2 :对a先生调制的培养基不加土色进行培养，作为空白对照证明培养基是否被污染。 结果预测：如果结果与a先生一致，证明a没有错的结果不同，则证明a先生的操作错误和培养基的制备有问题。 调制以尿素为唯一氮源的选择培养基。 三、实验的具体操作： (一)对土壤进行采样，从肥沃湿润的土壤中进行采样。 首先将表层土捞出约3cm，采集样品，放入事先准备好的信封中。 扫土用的铲子和填土的信封在使用前要进行灭菌。 (2)培养基的制备：在稀释土壤溶液的过程中，一步一步地在火焰旁边进行。 (3)样品稀释，在火焰旁边取10g土壤。 实验时必须在培养皿上做记号。 写明培养基的种类、培养时间、稀释度、培养物等。 为什么分离微生物的稀释度不同呢？ 通过测定土壤中的细菌总量和能分解土壤中尿素的细菌数量，选择的稀释范围相同吗？ 结论：为了得到不同种类的微生物，必须以不同的稀释度进行分离，同时也必须明确提供选择培养的条件。 原因：土壤中各种微生物的数量(单位：株/kg )不同。 例如，干燥土壤中的上层样品中，好氧和显性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 (4)取样涂布，分离不同的微生物采用不同的稀释度，原因：不同的微生物在土壤中的含量不同，目的：保证菌落数在30300之间，得到适合计数的平板，(5)微生物培养和观察，菌落计数时，每24小时收集菌落数菌落数量稳定时的记录，防止培养时间不足而失去菌落数量。 培养不同的微生物通常需要不同的培养温度。 细菌：在3037下培养12d放线菌：在2528下培养57d霉菌：在2528下培养34d。 注：如果得到两个以上菌落数为30300的平板，稀释操作比较成功，表示可以进行菌落计数，相同稀释倍数的3个重复菌落数差异较大，表示实验不正确，需要再实验。 微生物的培养和观察，1 .对照实验显示，如果培养物有杂菌污染，则在菌落数变高的其他氮源中混入培养物，菌落的形态多种多样，菌落数变高，难以选择分解尿素的微生物。 2 .提示：最好选择平板长度为30300个菌落的稀释倍，计算每克样品的菌数。 不要在相同稀释倍数的三个重复菌落的数量上有差异。 差异大，表示实验不正确。 四、结果分析和评价、五、操作提示、无菌操作、标记、计划时间、五.课外延长、饮水中大肠菌的数量的方法：用细菌过滤器过滤一定体积的水后，将过滤器放入伊红美蓝培养基中培养，大肠菌的菌落呈黑色，根据描述水样中大肠菌的在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。 培养了某种细菌后，PH值一高，指示剂就变红，这表示该细菌能分解尿素。大肠杆菌呈黑中心，是否有金属光泽，大肠杆菌在伊红美青琼脂(EMB )上有典型特征，本课题知识总结：例3.(2005年江苏)抗生素作为一种治疗细菌感染的药物，其效率和巨大的经济价值不削弱抗生素工业。 其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。 青霉素发酵产生青霉素。 青霉素的新陈代谢类型青霉素是青霉素的代谢产物。 在生产和科学研究中，经常选择同期青霉作为菌种和研究材料，那时青霉代谢旺盛，稳定。 青霉菌体生长状况的测定：采集一定体积的发酵液，离心分离，反复洗涤后，计算发酵槽中菌体的总重量。异养好氧型、二次、对数、个体形态、生理特性、菌体湿重(称为干燥后的重量)1.细菌群的生长规律的准确表达是() a .在液体培养基上接种b .至少一种细菌c .接种细菌d .立即补充消耗的营养物质.使用选择培养基的目的是() a .培养细菌b .培养真菌c .大量繁殖需要的微生物.将某些微生物的特定性状与其他微生物区别开.能够合成尿素酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是() A.CO2和N2B .葡萄糖、NH3C.CO2和尿素d .葡萄糖和尿素、练习问题：a、c、d 4 .以下说法不正确的是() a .科学家从70度到80度的温泉到高温的TaqDNA聚合酶b .总计某稀释度的5个平板的菌落数以M1、M2、M3、M4、M5的顺序将