微生物学实验教学大纲

学科课程编号：微生物学实验教学大纲时间：108讲座：108学制：4年制本科适合专业：生物科学相关专业一、本课程的性质和任务(a)课程的性质：微生物学实验的主要任务是使学生掌握研究和应用古典、传统、现代方法和技术等微生物的主要方法和技术，使学生拥有适合从事相关学科的基础理论研究和实际生产应用的微生物学实验技术。提高学生分析问题和解决问题的能力。根据该学科的特点，逐步让学生了解微生物的基本特性，比较与其他生物的相似性和差异，了解和解决研究微生物的方法和研究中出现的问题的点样分析。(b)课程的挑战：微生物学实验是生物学的重要基础课程之一，要求学生熟悉微生物学方法和技术，掌握无菌操作技术，建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握接种、纯培养、计数等最基本的无菌操作技术。二、本课程与其他课程的接触：1.为了使学生通过演示和说明学生的实际操作和结合方法，牢固树立无菌概念，通过显微镜使用、生物染色技术、形态学观察方法、微生物数量、培养基的构成和灭菌方法、微生物分离、纯化等基本操作技术，基本了解常用仪器设备的基本原理、结构、使用方法和使用注意事项，树立严谨、现实的科学态度，观察、问题分析。2.本实验课由验证实验和综合实验两部分组成。验证性实验主要通过光显微镜检查方法进行教学，综合实验则根据学生在教师指导下掌握的理论基础和实验技术，由学生自己进行。实验过程要求学生仔细观察实验现象，完整记录原始实验数据和结果，分析实验现象，认真编写实验报告。三、讲课内容(a)实验1实验室安全教育和微生物学实验室常用的仪器目的要求用于微生物学实验的器皿大部分用于消毒、灭菌和微生物培养，因此确定了解质量、洗涤和包装方法要求的实验室安全规则。实验内容一、碗的类型、要求和应用：1，试管试管(约18mm180mm) :可以容纳倒置平板的徽章。可用于准备边坡。微生物振动培养的液体培养基试管(13 15) mm (100 150) mm :安装了培养细菌或制作斜面的液体培养基。用于细菌、真菌、病毒等的稀释和血清检查。小试管(10 12) mm 100mm :通常用于糖发酵或需要血清检查和节约材料的其他测试。2，容量瓶主要用于精确制造一定浓度的溶液，细颈、梨形扁平玻璃瓶，有袖口，瓶颈上刻有记号。3、梁统测量外墙上有刻度的液体体积的玻璃器具。常用仪表盘的规格包括5ml、10ml、25ml、50ml、100ml和250ml等。4、三角瓶用于盛灭菌水、培养基和振动培养微生物。5，烧杯圆柱形，顶部有凹槽，便于丢弃液体，部分烧杯的外墙上标有刻度，可以粗略估算烧杯中液体的体积，这种烧杯也称为标记烧杯，也称为刻度烧杯，其分度非常不准确，误差一般可以达到5%。6，烧瓶一般壶嘴窄，玻璃棒不好搅拌，所以需要搅拌的时候，稍微转动壶嘴，轻轻搅拌。烧瓶根据外观分为圆形底烧瓶和平底烧瓶两种，通常扁平底烧瓶在室温下反应，圆形底烧瓶在高温下反应，原因是圆形底烧瓶的玻璃厚度均匀，温度变化很大。7、三角形烧瓶(锥形瓶)锥形瓶体长、大、小的口，盛在溶液中后，质心很容易手里拿着震动，因此经常用于容量分析，作为合适的容器。还可以加热、沸腾、储存、消毒100毫升、250毫升、500毫升、1000毫升等多种液体。8、比克用于准备徽章和各种溶液。9、离心管通常使用0.5ml、1.5ml、10ml、15ml、20ml等规格，上面有离心机的刻度。主要用于微生物分子生物学实验中少量细菌的离心，DNA或RNA的检测和提取等。10、吸管和吸管用于吸收和传输少量液体。被液管上刻有标记，使溶液在指示的温度下接触满月面时自然释放溶液，此时释放的溶液体积等于管道的基准量。常用吸管包括1mL、2mL、5mL、1OmL等。吸管通常使用两种规格。一个是没有刻度的毛细管。另一个是刻度吸管。管道壁上有细微的刻度。通常长度为25厘米，常用容量为0.2mL、5mL、5ml、1OmL。11、染色圆柱体有正方形和圆形两种，正方形更大，可以放10张幻灯片，圆形更小，可以放5张幻灯片染色细菌、血液和组织切片的标本。12、漏斗分为短脖子和长脖子两种。漏斗具有直径60mm、100mm、150mm等多种规格，将溶液分装，或将滤纸、纱布、棉用作过滤用杂质。13、滴橡胶帽和玻璃罩，无色、棕色，容量30毫升和60毫升，可储存试剂或染液。14、底部病分为水龙头和水龙头两种。容量有两种规格：2500mL和5000mL。蒸馏水或常用消毒药品的保管用。15，培养皿盘子的底部直径为90毫米，高度为15毫米，盘子的底部盖由玻璃制成的盖子组成。在培养皿中倒入适量的固体培养基，制成了平板，可以用它来分离、纯化、鉴定、存活数、抗生素、噬菌体的效价等。16、幻灯片和封面幻灯片这张幻灯片主要用于微生物涂片、染色、形态观察等。厚玻璃片有活细菌和进行血清检查的圆形巢。封面幻灯片是用于关闭样本和跌落样本等的非常薄的幻灯片。17，德汉小管观察糖发酵培养基中细菌产生气体的样子时，一般在小试管内额外安装倒置的小套管(约6mm36mm)，这种套管是喝的小管，也称为发酵的小电线。18、双重疾病内外两个玻璃瓶，内小锥形瓶，供油镜用于观察微生物，外瓶二甲苯用于擦油镜片。19、接种工具接种工具包括接种环、接种针、接种钩、接种铲、玻璃涂布机等。在细菌检查工作中，接种、分离细菌或选择群体进行涂层的必要工具。接种环经常安装在铝把手上，坏了随时可以更换。二、玻璃制品清洗方法1、清洗新玻璃产品在2%的盐酸溶液中浸泡几个小时，用自来水冲洗干净。2、清洗旧玻璃产品(1)试管、培养皿、三角瓶：洗净洗涤剂和洗涤剂，冲洗自来水。(。a含有固体培养基：刮洗。b携带用器械：2%用苏尔或0.25%的尼日尔消化消毒液浸泡24小时，或煮0.5小时后洗涤。c带病原体培养物的器具：蒸压、培养物倒入。(2)玻璃吸管：吸管端连接到水龙头上的橡胶管，反复冲洗。a吸血、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即浸泡在装有自来水的容器中进行实验，然后集中清洗。b装满棉花的吸管：用水把棉拿出来冲洗。c吸过含有微生物培养物的吸管：2%浸泡在水或0.25%的尼日尔消毒液中24小时清洗。d吸管的内壁有油渍。在清洗液中浸泡几个小时，然后冲洗。试管洗后倒在试管篮子里，三角瓶倒在水槽里，碟子下和碟子盖分开了，把盘子依次压在桌子上晾干。洗后，内壁的水均匀分布在薄薄的一层，就意味着充分冲洗，如果水滴还挂着，就要用洗涤液浸泡几个小时，然后用自来水冲洗。第三，各种器皿的绷带1、培养皿绷带：试用盘通常用一捆7-10件包装旧报纸(也可以用金属桶包装)，然后干燥、炎热、湿热灭菌。2，吸管绷带：目的是在上部1.5厘米左右不使用脱脂棉，插入1.5厘米长的短棉，将外部或嘴内的杂菌吹进管子，或者不小心将菌液排出管子外。然后用4到5厘米宽的长纸条包起来。3、试管和三角瓶等绷带：试管口和三角形瓶盖棉花塞或二氧化硅塞；用双层报纸包装(有牛皮纸效果更好)，干热灭菌。考官很多的时候，通常会用双层报纸包7或10个组。附件：棉塞生产：棉塞被广泛用于微生物工作，因为它可以过滤空气，防止细菌入侵，减缓培养基水分蒸发。棉塞的要求：适当的绷紧，不能太松或太紧，不能太松达到过滤目的，容易脱落，太紧，通风不好，操作不便，容易手拿着转动；深度适中，棉塞的总长度约为1.5英寸，约三分之一位于试管外，三分之二按顺时针方向嵌入试管内。棉花要求普通棉花，它不易防潮，吸水，不使用脱脂药棉。它容易吸收，费用高。(教师示范)实验材料和消耗品上面所有的碗。(b)实验2环境微生物检验目的要求1、实验室环境和体表微生物存在的证明；2、比较不同地点和不同条件下细菌的数量和类型。3、观察不同群体微生物的菌落形态特征。4、体验无菌操作的重要性。实验原理板型培养基含有细菌生长所需的营养素，如果将不同来源的标本接种在培养基上，在适当的温度下培养，1-2d内的各种细菌可以通过多次细胞分裂繁殖，形成可见细胞群体的集合体，称为菌落。各细菌形成的群体具有固有的特性，如群体的大小，表面干燥或潮湿，隆起或平坦，粗糙，边缘整齐或不平，群体透明，半透明或不透明，颜色或纹理松弛或紧贴。因此，平板培养可以检查环境中细菌的数量和类型。实验内容1、环境微生物检测：倒置，环境微生物接种；2、准备灭菌容器：学习包扎、包扎吸管。实验材料和消耗品1、材料：环境中的多种微生物；2、用品：牛肉奶油蛋白胨徽章、无菌盘子、吸管、盘子、酒精灯、牛皮纸、记号笔。(c)实验3显微镜的结构、特性和使用方法目的要求1、学习如何掌握油镜的标准使用方法；2、复习光学显微镜的基本结构和使用方法。实验原理油镜工作原理：1、增加照明亮度；2，显微镜的分辨率：显微镜分辨两点之间最小距离的能力。与接收物镜的数值孔径成正比，与光的波长成反比。分辨率=(半光波长度)/数字光圈实验内容1、审查显微镜的使用情况；2、油镜使用原理、工作要点(包括清洗方法)；3、孔评价油镜使用方法，可通过。实验材料和消耗品学生显微镜，细菌3种膜；双瓶(包括香沥青和醚酒精擦拭溶液)，擦镜子纸。(d)实验4细菌的简单染色和显微镜观察目的要求1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色方法；2、初步了解细菌的个体形态、菌落形态特征；3、整合显微镜(油镜)使用方法和无菌操作技术。实验原理简单染色法是用单一染料染色细菌的一种方法。这种方法操作简便，适合于观察细菌的一般形状和细菌的排列。碱性染料一般在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，碱性染料电离时分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时分子的染色部分带正电荷)，碱性染料的染色部分和细菌结合，容易给细菌上色。染色的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更容易识别。常用于简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性重拍等。分解唐山，降低培养基的pH值，增加可以用李红、酸性李红、刚果红等酸性染料染色的电荷量。实验内容1、观察微生物群落形态：了解和识别微生物群落形态特征的几种代表性类型；2、细菌简单染色和个体形态观察：无菌接种工作；涂层，干燥，固定，染色，洗涤，干燥，显微镜检查。实验材料和消耗品1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、环境微生物检查板；2、用品：学生显微镜、酒精灯、幻灯片、接种环、双瓶(包括香和醚酒精擦拭溶液)、擦镜子纸；Lv碱性黑色素染料(或草酸铵结晶紫染料)。(e)实验奥格拉姆染色目的要求1、学习革兰氏染色法，初步掌握；2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类和鉴定中的重要性。实验原理革兰染色法是细菌学中最重要的识别染色法，1884年丹麦病理学家克里斯托格雷先生创立后，一些学者在此基础上做了一些改进。这种将细菌分类为g-细菌和g细菌的染色方法基于两种细菌的细胞壁结构和成分不同。G-细菌的细胞壁含有更多易溶于乙醇的脂质，由于肽键层薄，交联程度低，因此在向乙醇或丙酮脱色时脂质溶解，细胞壁的渗透性提高，第一次染色的结晶紫和碘的复合物容易渗出，细菌脱色，再染成番红，则变成红色。g细菌细胞壁上的肽聚糖层厚，交联度高，脂质含量低，脱色剂处理后，肽聚糖层的孔径减小，渗透性降低，因此细菌保持了最初染色时的颜色。实验内容1、革兰氏染色法的基本步骤：制作早期染色介质染色染色显微镜检查；2、染色成功或失败分析；3、实验运行评价1。实验材料和消耗品1、材料：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌；2、用品：学生显微镜、酒精灯、幻灯片、接种环、双瓶(包括香和醚酒精擦拭溶液)、擦镜子纸；革兰氏染色液(结晶紫染料，卢戈碘，95%乙醇，鲜红液)。(VI)实验6细菌孢子染色方法目的要求1、学习和掌握孢子染色方法。2、观察孢子的形态特征：形状、大小和出生位置。实验原理孢子染色法利用孢子和菌体对染色体亲和力的不同原理，用不同的染色体上色，使孢子和菌体区分为不同的颜色，容易区分。孢子壁厚、透、着色、脱色都很困难，所以我们要用颜色能力强、浓度高的孔雀绿染色液(5%)染色。染色期间延长染色时间，10分钟(通常2-3分钟)，并在加热条件下染色。进入细菌的染料可以水洗脱色，但进入孢子的染料再染色的话会染成红色，孢子很难着色，仍然是绿色。实验内容1，涂层：24小时用涂层、干燥、固定的方式培养枯草芽孢杆菌。2，