实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)VIP

实验前准备工作,菌株的连续活化染色液当天配制无菌液（试管或三角瓶中）的准备,部分同学的实验结果实例,钾细菌的荚膜,水洗,不水洗,番红染色,枯草杆菌的芽孢,孔雀绿+番红染色,部分同学的实验结果实例,问题与建议,按要求准确操作是实验成功的关键,对实验内容不明确,多进行基本技能的训练及实验指导,启发式教学（荚膜/芽孢染色为例）,鼓励交流与分享（成功/失败）,实验七、细菌鞭毛染色和运动性观察（半固体穿刺法）,学习并掌握细菌的鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态特征和着生方式观察细菌是否运动来间接证明是否有鞭毛了解细菌鞭毛染色的应用,一、实验目的,二、实验原理,细菌的鞭毛极细，直径一般为1020nm；长度为1520m。,光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径变粗，然后再进行染色。,观察和判断细菌鞭毛的方法,电子显微镜直接观察,根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态（在半固体培养基中呈扩散性生长）,暗视野显微镜或相差显微镜观察,鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义,了解细菌鞭毛染色的应用,三、实验材料,1、菌种：枯草杆菌（Bacillussubtilis）（连续活化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄球菌（Staphyloccocusaureus）2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林，NaOH）染液B（AgNO3）3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）,四、实验方法,（一）半固体穿刺法观察运动性（无菌操作）1、试管壁上标明BS及学号，用直的接种针火焰灼烧柄及针挑取一点枯草芽孢杆菌沿轴心穿刺接种于半固体培养基中，深34厘米37培养2448小时（1周）后观察生长情况（下次课补记结果）。2、每排找一个人按同样的方式穿刺接种金黄色葡萄球菌，并标明SA。,（二）银染法,1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端，顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。3、染色：滴加过滤的染液覆盖8分钟，用液冲洗去液，再用液覆盖染色，缓缓加热至冒气，维持约05秒(加热时注意勿使出现干涸面)在菌体多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟)，停止加热，用水冲净，干后镜检。4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。,五、注意事项,1、穿刺接种时针及穿刺过程要直。2、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时动作要柔和，因为鞭毛易脱落。,六、视频,细菌鞭毛染色法,1、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形态。2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应掌握哪些环节？注意些什么问题？3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补记）。4、讨论实验成败的原因。,七、作业与讨论,开放设计性实验的准备,分组（每一排为一组，5-6人，推选1人为组长，负责本组协调，每个人都要参与，在完成的实验设计报告中列出所有组员的学号，姓名）选题（选感兴趣的小实验，查资料，讨论可行性）写实验设计（要求详细具体）实验目的（可简单）实验原理实验材料（包括菌种、试剂、仪器设备）方法与步骤可能的结果可能存在的问题4.两星期后交实验设计报告，并讨论实验可能性。该实验设计内容将计算为一次平时成绩。,设计性实验的格式,实验题目成员的姓名，学号，组长及联系方式实验