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实验八血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳,一、实验目的：,1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及影响电泳的因素。2、掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作步骤。,二、实验原理：,电泳：带电粒子在电场中向其与自身电荷相反的电极移动的现象。,-带电粒子移动的速度；q-电荷量；r-球形分子半径；-溶液黏度。,-电场强度,不同分子所带电荷种类及数量不同，在相同电场强度及溶液（）中经过一定时间必然会泳动到不同的位置。因此，含有多种成分的混合物若进行电泳，则各成分在电场中将被逐一分开，并集中到特有的位置上面形成紧密的区带，使混合物成分达到分离的目的。,影响电泳的因素(外因),1、电场强度：越高，电泳速度越快。应选用最适电场强度。,2、溶液的pH值：缓冲溶液的pH值决定了所带电荷的种类和数量。,3、溶液的离子强度：离子强度增加，带电颗粒的泳动速度慢。,4、电渗现象,.,内因:分子大小电荷分子的外形,醋酸纤维薄膜电泳是以醋酸纤维薄膜为支持物的电泳。醋酸纤维薄膜具有均一的泡末状结构，渗透性强，用它作为支持物进行电泳具有简单、快速、定量容易、样品量少、对样品无吸附和拖尾现象、电泳区带清晰等优点。,蛋白质是两性电解质，在不同pH值的缓冲溶液中带有不同的电荷。当pHpI时，蛋白质为负离子，在电场中向正极移动；当pH=pI时，蛋白质既不向负极移动也不向正极移动。血清中含有多种蛋白质，如清蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白等，它们的等电点均小于此实验中缓冲液pH值,因此带负电荷,在电场中向正极移动。,由于血清中蛋白质所具有的可解离基团不同，在同一pH值的缓冲溶液中所带电荷量不同，因此它们在电场中的移动速度不同。它们在电场中移动速度从快到慢依次为:清蛋白、1球蛋白、2球蛋白、球蛋白、球蛋白。,二、实验操作,1、仪器和薄膜的准备,2、点样,1.5cm,+,-,点样区,3、电泳,4、染色：3-8分钟,将点好样的薄膜点样面朝下置于电泳槽上,使点样端置于负极,而另一端置于正极。平衡10分钟，打开电泳仪开关，调节电流为4-6mA，电压为100-120V,电泳40-60分钟。
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