兽医免疫学课件

兽医免疫学,兽医免疫学,绪论第一篇免疫学基础理论,第四章免疫学技术概述第五章凝聚性反应第六章标记技术第七章单克隆抗体技术,第三篇临床免疫,第一章免疫系统第二章抗原和抗体第三章免疫应答,第二篇免疫学技术及其应用,第八章变态反应第九章抗感染免疫第十章免疫性疾病,绪论主要内容：基本概念，简史和进展,重点：了解免疫学的历史、现状和研究及应用新动态，免疫的新概念，在生命科学中的地位作用。,一、免疫的概念什么是免疫，免疫学研究解决什么问题。,免疫的传统概念：防御疫病（传染病）,免疫的现代概念：,免疫:是机体识别和清除非自身的大分子物质,从而保持机体内外环境平衡的生理反应。,免疫学:是一门新兴的学科，它是研究机体免疫系统的组织结构和生理功能的科学。,绪论一、免疫的概念,二、免疫的基本特点,2特异性和多样性：氨基酸、核酸序列,3记忆：免疫接种的理论基础,4自我调控：基本生理特点,1.识别自身和非自身:抵御.监视：肿瘤（自身变化）、病原（外源）,三、免疫的基本功能,绪论一、免疫的概念二、免疫的基本特点,2.免疫耐受:自身稳定,3.免疫监视:抗肿瘤,1.免疫防御:抗感染,三、免疫的基本功能,四、免疫学的发展简史1.免疫学经验时期(17世纪前),绪论一、免疫的概念二、免疫的基本特点,2.经典免疫学时期(18-20世纪),3.近代免疫学时期(至上世纪50年代),4.现代免疫学时期(上世纪60年代以来),超敏反应，免疫耐受，抗体生成克隆学说，免疫学技术(血凝等）,免疫应答细胞分类，免疫调控，分子水平，免疫学技术,三、免疫的基本功能,四、免疫学的发展简史,绪论一、免疫的概念二、免疫的基本特点,五、现代免疫学的进展和热点1.理论:分子和细胞,2.应用:免疫学方法,免疫遗传学和免疫调控机理(MHC)，肿瘤免疫学(肿瘤发生、发展)，免疫病理学(自身免疫病：变态反应(过敏反应)，免疫缺陷),实验免疫学(单克隆抗体，基因疫苗，标记技术，肿瘤治疗),三、免疫的基本功能,四、免疫学的发展简史,绪论一、免疫的概念二、免疫的基本特点,五、现代免疫学的进展和热点,六、免疫学的应用,诊断：血清学,预防：疫苗,治疗：抗血清,超微量测量,第一章免疫系统,第一节免疫器官中枢免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊外周免疫器官：脾脏、淋巴结要点：来源、结构和功能,第二节免疫细胞淋巴细胞：B细胞、T细胞其他细胞：单核吞噬细胞、粒细胞要点：种类、形态、结构和功能,第三节免疫因子抗体、补体、细胞因子要点：组成、结构和功能,第一章免疫系统,第一节免疫器官中枢免疫器官：骨髓胸腺法氏囊,外周免疫器官：脾脏淋巴结其他,第一章免疫系统,第二节免疫细胞淋巴细胞：B细胞、T细胞、NK细胞其他细胞：单核吞噬细胞、粒细胞要点：种类、发生发育、形态和功能,第一节免疫器官,B细胞在免疫应答中活化增殖和分化,第一章免疫系统,第二节免疫细胞一、淋巴细胞：B细胞、T细胞、NK细胞,第一节免疫器官,1.种类与形态:小淋巴细胞(T.B细胞5-7，NK细胞，亚群)免疫母细胞（2-2030）浆母细胞(7-15)浆细胞(8-20)2.发生和分布:骨髓多能干细胞-胸腺(成熟)-胸腺依赖区(淋巴结等)-活化(抗原)骨髓多能干细胞-法氏囊(淋巴干细胞-前B细胞-B细胞)-淋巴结等,第一章免疫系统,第二节免疫细胞一、淋巴细胞：B细胞、T细胞、NK细胞,第一节免疫器官,淋巴细胞的主要特性特性TBNK主要功能Ab识别、Ab识别细胞毒细胞免疫体液免疫免疫调节免疫调节免疫受体TCR表面IgCD16其他表面标志CD3，4，8CD19-21CD56分布%：血液70-7510-1510淋巴节70-7520-25少脾40-5040-5010,第一章免疫系统,第二节免疫细胞一、淋巴细胞：B细胞、T细胞、NK细胞二、单核吞噬细胞,第一节免疫器官,1.形态与种类单核细胞(血液.15-25)巨噬细胞(组织.80)其他:枯否氏(肝),小神经胶质细胞(脑),星形胶质细胞(脑)滤泡细胞(甲状腺),内皮细胞(血.淋巴组织),成纤维细胞(结缔组织)2.功能吞噬.细胞毒(Fc).调节(抗原处理浓缩等,APC,antigenpresentingcell).白细胞介素,第一章免疫系统,第二节免疫细胞一、淋巴细胞：B细胞、T细胞、NK细胞二、单核吞噬细胞,第一节免疫器官,嗜中性，嗜酸性，嗜碱性，肥大细胞等,三、粒细胞其他细胞,免疫细胞的发生发育示意图,第一章免疫系统,第二节免疫细胞一、淋巴细胞：B细胞、T细胞、NK细胞二、单核吞噬细胞三、粒细胞其他细胞,第一节免疫器官,四、细胞表面标志：CD分子,第三节免疫因子一、补体,2.生物学活性2.1含量相对稳定:10-15%，动物种间有差异2.2不稳定:不耐热,对各种理化因素敏感2.3能被抗原抗体复合物激活（IgM、IgG和部分物质）2.4代谢率高,半衰期短（58H）2.5组成：comlement：C1-C9(共11种成分),1.概念存在于人和动物正常新鲜血液中具有酶样活性的一组不耐热的球蛋白。,第三节免疫因子一、补体1.概念,2.生物学活性,3.激活途径：经典途径:C1q,C1r,C1s(识别单位),C4,C2,C3(激活单位),(攻膜单位)旁路途径(替代途径):C3,(攻膜单位)C6,C7,C8,C9,补体激活途经示意图,经典途经示意图,旁路途经示意图,第三节免疫因子一、补体,1.概念机体的免疫细胞和非免疫细胞能合成和分泌小分子的多肽类因子,它们具有调节多种细胞生理功能,这些因子统称为细胞因子(cytokines)。,二、细胞因子,第三节免疫因子一、补体,1.概念,二、细胞因子,2.种类淋巴因子(淋巴细胞),单核因子(单核细胞)等,白细胞介素(interleukin,IL)干扰素(interforen,IFN)集落刺激因子(colonystimulatingfactor,CSF)肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)转化生长因子(transforminggrowthfacteor,TGF-),第三节免疫因子一、补体,1.概念,二、细胞因子,2.种类,3.功能调节免疫细胞（白细胞介素、干扰素）,免疫效应分子（肿瘤坏死因子、干扰素）,刺激造血细胞（集落刺激因子）,促进炎症反应（白细胞介素）,细胞因子种类及其对T、B细胞的作用,第一章免疫系统,思考题与作业:1.免疫系统分哪几个层次，各有哪些组分？2.免疫系统的不同层次和各个组分之间有何区别与联系？3.参与特异性免疫与非特异性免疫的不同组分有何特点？举例说明。4.设计一个图或表，把所有参与免疫反应的组分都归纳进去。要求：既要把所有组分均表现在图或表内，又要能表现出它们之间的内在关系。,第二章抗原和抗体,第一节抗原抗原的概念、性质和分类来源,第二节抗体和免疫球蛋白抗体与免疫球蛋白的概念及其区别免疫球蛋白的结构、分类及作用抗体的功能及应用,第三节抗原与抗体的关系抗原诱导机体产生抗体抗原抗体特异性结合,第二章抗原和抗体,第一节抗原一、概念凡是能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能与之结合引起特异性免疫的物质,抗原的属性：免疫原性和反应原性,抗原和半抗原,变应原性和耐受原性,第二章抗原和抗体,第一节抗原一、概念,二、抗原的性质,1.异源性,2.分子量(10,000.5,000较弱,1,000为半抗原),3.化学性质:组成.蛋白质多糖;分子结构.环状立体(三级)结构,4.物理状态:吸附于颗粒物质(多糖类或氢氧化铝),第二章抗原和抗体,第一节抗原一、概念,二、抗原的性质,三、抗原决定簇（抗原表位）,抗原决定簇：与抗体结合的部位（基团）,抗原价：单、多价及功能价,性质:化学基团.旋光性.构象.顺序,数量:多价.单价;功能价.非功能价,大小:5-7个氨基酸，5-6个糖基，5-8个核苷酸,抗原与抗原决定簇,一个抗原分子含有数个抗原决定簇,每个抗原决定簇至少诱导一种特异性抗体,蛋白质抗原决定簇由5-7个氨基酸组成,抗原,抗原决定簇,氨基酸残基序列,第二章抗原和抗体,第一节抗原一、概念,二、抗原的性质,四、抗原的种类,三、抗原决定簇,天然抗原人工抗原半抗原,第二章抗原和抗体,第一节抗原,第二节抗体和免疫球蛋白,要点：抗体与免疫球蛋白的概念及其区别。免疫球蛋白的结构、分类、作用。,第二章抗原和抗体,第二节抗体和免疫球蛋白一、抗体与免疫球蛋白的概念,抗体的概念：在抗原和免疫系统相互作用下由B细胞产生的能与相应抗原发生反应的特异性Ig：,种类：异种、同种抗体；自身抗体，异嗜抗体；完全、不完全抗体等,免疫球蛋白的概念：体液中具有免疫功能的一大类具有相似化学性质的球蛋白。,第二章抗原和抗体,第二节抗体和免疫球蛋白一、抗体与免疫球蛋白的概念,二、免疫球蛋白的基本结构和功能Ig的基本结构,Ig结构示意图,五种Ig结构示意图,第二章抗原和抗体,第二节抗体和免疫球蛋白一、抗体与免疫球蛋白的概念及其区别二、免疫球蛋白的结构和功能,三、各类免疫球蛋白的理化特性和功能,IgG:70-80%；单体；160,000-180,000；再次反应IgM:10-15%；五聚体；900,000；初次反应IgA:少双聚体；170,000-390,000；分泌型IgE:少单体；170,000不耐热(56C,1h);过敏IgD:少单体;170,000表面,第二章抗原和抗体,第二节抗体和免疫球蛋白一、抗体与免疫球蛋白的概念及其区别二、免疫球蛋白的结构和功能,三、各类免疫球蛋白的理化特性和功能,四、抗原抗体的结合：亲和力与亲合力,抗原抗体结合力的组成,氢键,离子键,范德华力,疏水力,抗原分子,抗体分子,第二章抗原和抗体,第二节抗体和免疫球蛋白一、抗体与免疫球蛋白的概念及其区别二、免疫球蛋白的结构和功能,三、各类免疫球蛋白的理化特性和功能,四、抗原抗体的结合：亲和力与亲合力,五、抗体的功能及应用,1.医学与兽医学：免疫治疗（被动免疫）；病原诊断（鉴定微生物和抗原分型）；血型鉴定2.生物学其他领域：生物活性物质检测；抗原抗体在细胞和亚细胞的定位。,第二章抗原和抗体,第一节抗原,第二节抗体和免疫球蛋白,第三节抗原与抗体的关系抗原诱导机体产生抗体,传统抗体(多克隆抗体),抗原,免疫（刺激机体）,1,2,3,4,脾脏,淋巴結,B細胞,第二章抗原和抗体,第一节抗原,第二节抗体和免疫球蛋白,第三节抗原与抗体的关系一、抗原诱导机体产生抗体,二、抗原抗体特异性结合,抗体由抗原诱导免疫细胞所产生，并与之结合,1,1,1,1,抗体结合抗原,B细胞,浆细胞,抗体,抗原,第二章抗原和抗体,第一节抗原第二节抗体和免疫球蛋白第三节抗原与抗体的关系,思考题与作业:1.什么是抗体？什么是免疫球蛋白？两者的同异是什么？2.免疫球蛋白的分类与它们的免疫功能有何关系？3.免疫球蛋白的结构与它们功能有何关系？举例说明。4.作出图或表概括免疫球蛋白的结构与理化特性。,第三章免疫应答,第二节特异性免疫与非特异性免疫应答,第三节免疫调节,第一节免疫应答的基本特点,要点：特异性免疫与非特异性免疫的相互作用、调节等关系。,第三章免疫应答,第一节免疫应答的基本特点,二、组成,三、特点,组织器官:皮肤粘膜；血脑屏障、血胎屏障等。脾脏、淋巴结等。细胞：吞噬细胞、粒细胞；淋巴细胞分子：补体、细胞因子；抗体。,非特异性免疫：先天(不感染）性；识别自身和非自身；无再次反应；作用快范围广。特异性免疫：获得性；特异性；记忆性。,一、种类,非特异性免疫；特异性免疫,第三章免疫应答,第二节特异性免疫与非特异性免疫,一、非特异性免疫应答过程,第一节免疫应答的基本特点,1炎症反应,2.吞噬：清除异物,3补体激活,4干扰素等,非特异免疫应答（一）：巨噬细胞对抗原的吞饮、消化,非特异性免疫应答(二)APC对两类抗原的吞饮、消化、处理和呈递,第三章免疫应答,第二节特异性免疫与非特异性免疫,一、非特异性免疫应答过程,第一节免疫应答的基本特点,二、特异性免疫应答过程,1.一般过程：激活、反应、效应,2.反应类型：细胞免疫应答；抗体免疫应答,特异性免疫应答示意图,激活,反应,效应,第三章免疫应答,第二节特异性免疫与非特异性免疫,一、非特异性免疫应答过程,第一节免疫应答的基本特点,二、特异性免疫应答过程,1.一般过程：激活、反应、效应,2.反应类型：细胞免疫应答；抗体免疫应答,3.特异性免疫应答的初次反应和再次反应及其特点,体液免疫应答的特点：初次和再次反应,第三章免疫应答,第二节特异性免疫与非特异性免疫,一、非特异性免疫应答过程,第一节免疫应答的基本特点,二、非特异性免疫应答过程,三、影响免疫应答的因素,1.抗原,2.机体,3.免疫方法,第三章免疫应答,第三节免疫调节,一、特异性与非特异性免疫应答的关系,非特异免疫应答：几种免疫反应途经示意图,第三章免疫应答,第三节免疫调节,一、特异性与非特异性免疫应答的关系,非特异性免疫是特异性免疫的基础,非特异性免疫与特异性免疫互相作用,特异性免疫是非特异性免疫的补充,第三章免疫应答,第三节免疫调节,二、免疫应答的调节机制,一、特异性与非特异性免疫应答的关系,1.神经内分泌调节,中枢神经系统,内分泌系统,免疫系统,垂体激素,激素,免疫因子,激素,神经肽,免疫因子IL-1,第三章免疫应答,第三节免疫调节,二、免疫应答的调节机制,一、特异性与非特异性免疫应答的关系,1.神经内分泌调节,5.基因调节:对不同抗原的反应性(MHC识别抗原)，个体差异，品种间差异，种间差异，免疫缺陷等,3.细胞因子的调节:IL，IFN，TF,MF,2.免疫细胞之间的调节:T细胞ThTsB，NK，CD,红细胞(CR1),4.抗原抗体的调节:反馈,第三章免疫应答,思考题与作业:1.特异性免疫应答与非特异性免疫应答主要有何区别？2.怎么理解特异性免疫应答与非特异性免疫应答是相辅相成、不可分割的？举例说明。3.调节免疫应答的主要成分是什么？主要途径是什么？4.设计一免疫应答的图解。要求：能够显示参与免疫应答的所有调节因素及其互相关系。,第四章免疫学技术概述概念免疫学技术与血清学技术,免疫学技术免疫细胞实验技术(源于细胞免疫),抗体抗原实验技术(源于体液免疫),第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型1.凝聚性反应:沉淀凝集,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型1.凝聚性反应,沉淀:可溶性抗原与抗体,凝集:颗粒性抗原与抗体,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型1.凝聚性反应:沉淀凝集,2.有补体参与的反应,补体结合试验原理（结果阳性）,待检系统抗原,指示系统,补体,消耗,+抗体,不溶血,补体结合试验原理（结果阴性）,待检系统,指示系统,补体,未消耗,+抗体,溶血,无抗原,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型1.凝聚性反应:沉淀凝集2.有补体参与的反应,3.标记抗体技术,1.种类：酶标记，同位素标记，荧光标记，其他标记,3.特点：放大作用,敏感性，微量化,2.原理：化学方法连接,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型1.凝聚性反应:沉淀凝集2.有补体参与的反应3.标记抗体技术,4.中和反应,抗体与毒素或病原体的结合,方法：细胞、鸡胚和动物实验,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型,二、血清学反应的一般特点,1.特异性和交叉性(交叉:多价抗原抗体反应）,2.亲和力和亲合力,亲和力:抗体对简单的单价半抗原或抗原决定簇的结合力、结合簇的大小,吻合的严密性和分子间力的性质和强度,结合力:氢键.静电力.Van-derWaals-力疏水键(50%),亲合力:抗原抗体复合物的稳定性(取决于亲合力和抗体抗原所饱和的价数),第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型,二、血清学反应的一般特点,1.特异性和交叉性(交叉:多价抗原抗体反应）,2.亲和力和亲合力,3.抗原抗体反应的二阶段性和可逆性,结合阶段:快、不可见,可见阶段:凝集,沉淀等.较慢,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型,二、血清学反应的一般特点,1.特异性和交叉性(交叉:多价抗原抗体反应）,2.亲和力和亲合力,3.抗原抗体反应的二阶段性和可逆性,4.抗原抗体的结合比例:带现象,前带:抗体过多在沉淀反应中稀释抗原；后带:抗原过多在凝集反应中稀释抗体.,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型,二、血清学反应的一般特点,1.特异性和交叉性(交叉:多价抗原抗体反应）,2.亲和力和亲合力,3.抗原抗体反应的二阶段性和可逆性,4.抗原抗体的结合比例:带现象,5.血清学反应的影响因素,a.电解质:,b.温度:37-56C,c.pH:6-8低于3解离,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型,二、血清学反应的一般特点,三、应用,1.抗原、抗体检测2.生物活性物质检测3.抗原在细胞和亚细胞的定位4.微生物鉴定和分型5.血型鉴定,第四章免疫学技术概述一、血清学反应的类型,二、血清学反应的一般特点,三、应用,四、血清学试验的发展趋势样品微量化方法标准化试剂商品化检测手段自动化,思考题与作业:1.常用免疫学实验方法有哪些？如何归类？2.血清学方法应用于哪些方面？3.血清学方法的主要特点是什么？,第四章免疫学技术概述,第五章凝聚性反应第一节沉淀反应一、原理二、常用方法:1.絮状沉淀试验和免疫浊度法（液相）,2.环状沉淀试验（液相）,液相沉淀反应,絮状沉淀反应,环状沉淀反应,+,+,抗血清,抗原,抗原,抗体,第五章凝聚性反应第一节沉淀反应一、原理二、常用方法:1.环状沉淀试验（液相）,3.免疫扩散试验（固相）单向单扩散;双向单扩散(辐射扩散);双向双扩散,2.絮状沉淀试验和免疫浊度法（液相）,免疫扩散技术,单向扩散试验,双向扩散试验,固相沉淀反应,应用（定量分析）：抗原或抗体效价测定,抗原性质分析,应用（定性分析）：多抗原成分分析,第五章凝聚性反应第一节沉淀反应一、原理二、常用方法:1.絮状沉淀试验和免疫浊度法（液相）2.环状沉淀试验（液相）,3.免疫扩散试验（固相）单向单扩散;双向单扩散(辐射扩散);双向双扩散,4.免疫电泳:,原理：,抗原的电荷;电场强度(10V/cm);溶液的离子强度(0.02-0.2),5.对流免疫电泳,免疫电泳原理与结果,免疫扩散技术,免疫电泳技术,单向扩散试验,双向扩散试验,火箭电泳,对流电泳,免疫电泳,+,+,+,固相沉淀反应,第五章凝聚性反应第一节沉淀反应一、原理二、常用方法:1.絮状沉淀试验和免疫浊度法（液相）2.环状沉淀试验（液相）,3.免疫扩散试验（固相）单向单扩散;双向单扩散(辐射扩散);双向双扩散,4.免疫电泳:,原理：,抗原的电荷;电场强度(10V/cm);溶液的离子强度(0.02-0.2),5.对流免疫电泳,6.火箭免疫电泳,第五章凝聚性反应第二节凝集反应一、原理二、常用方法:1.直接凝集试验(玻片法;试管法.细菌;红血球),2.间接凝集试验,颗粒性抗原,凝集素(抗体),直接凝集反应,正向间接凝集反应,可溶性抗原,载体颗粒,抗体,颗粒性抗原,反向间接凝集反应,抗体,可溶性抗原,载体颗粒,连接,抗体标记的颗粒,间接凝集抑制反应,凝集,凝集抑制,待检样品,待检样品,凝集抗原,第五章凝聚性反应第二节凝集反应一、原理二、常用方法:1.直接凝集试验(玻片法;试管法.细菌;红血球),2.间接凝集试验a.乳胶凝集试验(聚苯乙烯乳胶作载体,0.8微米)b.炭素凝集试验(抗血清致敏.猪囊虫)c.间接血凝试验(血球选择.醛化.致敏),3.凝集试验的结果判断:定性;定量,凝集反应判断,思考题与作业:设计一个血清学方法，用于诊断鸡新城疫病毒抗原。,第六章标记技术,标记技术的基本特点：间接、放大；敏感，快速，微量,主要介绍酶标技术的原理、常用的酶种类。免疫酶检测技术所使用的常用方法和应用范围。重点是固相酶联吸附法和酶标斑点法。,第六章酶标技术,一、原理,二、常用标记酶：高效催化活性，稳定，易于得到，有可见反应HRP（辣根过氧化物酶）等,抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。,酶（生物催化剂，催化活性）,+抗体（免疫学活性）,一、原理二、常用标记酶,第六章酶标技术,三、酶联免疫吸附检测（ELISA）实例EnzymeLinkedImmuno-SorbentAssay,标记技术直接法,标记技术夹心法,标记技术竞争法,标记技术,一、原理二、常用标记酶,第六章酶标技术,四、免疫酶技术种类免疫酶沉淀技术，免疫酶定位技术，免疫酶定量测定技术,五、抗体酶标记法戊二醛法，过碘酸钠法，SPA系统，亲和素生物素系统,六、酶结合物的鉴定抗体活性测定,七、酶结合物的保存,三、酶联免疫吸附检测（ELISA）实例,思考题与作业:酶标技术的原理和优点是什么？,第六章酶标技术,第七章单克隆抗体技术,一、单克隆抗体技术特点常规抗体与单克隆抗体的比较,多克隆抗体与单克隆抗体的比较,多克隆抗体反应,单克隆抗体反应,抗原,抗原,产生针对多种抗原决定簇的隆抗体,产生针对单一抗原决定簇抗体,保存期短,永久保存,质量难以控制,质量稳定,第七章单克隆抗体技术,一、单克隆抗体技术特点常规抗体与单克隆抗体的比较,常规抗体：多克隆（多决定簇）保存时间短质量难控制,单克隆抗体：针对单一抗原决定簇永久保存质量稳定,短命的浆细胞与骨髓瘤细胞融合,产生特异性抗体,脾脏,浆细胞,瘤细胞,杂交瘤细胞,免疫小鼠,第七章单克隆抗体技术,一、单克隆抗体技术特点,二、单克隆抗体技术原理,长期存活,+,第七章单克隆抗体技术,二、单克隆抗体技术原理,一、单克隆抗体技术特点,三、制备方法,1免疫小鼠（Balb/c，NZB品系)。高纯度抗原。免疫4次后取脾脏，分离淋巴细胞。,2细胞融合：免疫鼠的脾细胞和鼠源B细胞株（Sp/O2），融合剂PEG,3选择培养：Sp/O2细胞株为营养缺陷型，便于筛选。,核苷酸合成途径,核苷酸,次黄嘌呤（H）胸腺嘧啶核苷（T）,核苷酸合成替代途径,氨基喋呤（A）,叶酸,第七章单克隆抗体技术,二、单克隆抗体技术原理,一、单克隆抗体技术特点,三、制备方法,1免疫小鼠（Balb/c，NZB品系)。高纯度抗原。免疫4次后取脾脏，分离淋巴细胞。,2细胞融合：免疫鼠的脾细胞和鼠源B细胞株（Sp/O2），融合剂PEG,3选择培养：Sp/O2细胞株为营养缺陷型，便于筛选。,4筛选阳性细胞株：抗体检测（酶标，同位素标记，荧光标记）,5克隆和亚克隆,2.单克隆抗体的筛选克隆,第七章单克隆抗体技术,二、单克隆抗体技术原理,一、单克隆抗体技术特点,三、制备方法,1免疫小鼠（Balb/c，NZB品系)。高纯度抗原。免疫4次后取脾脏，分离淋巴细胞。,2细胞融合：免疫鼠的脾细胞和鼠源B细胞株（Sp/O2），融合剂PEG,3选择培养：Sp/O2细胞株为营养缺陷型，便于筛选。,4筛选阳性细胞株：抗体检测（酶标，同位素标记，荧光标记）,5克隆和亚克隆,6单克隆抗体生产：方法（体内法，培养法）及其要点,7细胞保存（超低温冷冻）和防止变异。,第七章单克隆抗体技术,二、单克隆抗体技术原理,一、单克隆抗体技术特点,三、制备方法,五、应用,四、单克隆抗体技术的历史和进展,其他：抗体芯片、生物导弹,基于单抗的抗体工程,表位结构分析：噬菌体展示技术,特异性检测:蛋白分子（病原抗原、其他分子）,第八章变态反应,要点介绍参与各种变态反应的组分（细胞、因子）、过程和机制、特点、区别和临床实例。,概念变态反应（allergy）是免疫系统对再次进入机体的抗原作出因过于强烈或不适当而导致组织器官损伤的一类免疫反应。除伴有炎症反应维持机体正常功能的免疫反应并无实质性区别。,第八章变态反应,第一节过敏反应,根据变态反应中所参与的细胞、活性物质、损伤组织器官的机制和产生反应所需时间，分为四型。,第二节细胞毒型,第三节免疫复合物型,第四节细胞免疫（迟发）型,概念：机体再次接触抗原时引起的在数分钟至数小时内以炎症为特点的反应,第八章变态反应,第一节过敏反应,抗原（过敏原）,Th-细胞,B-细胞,IL-4,记忆细胞,浆细胞,抗体（IgE）,肥大细胞,平滑肌,毛细血管,黏液腺,血小板,末梢神经,嗜碱性粒细胞,过敏反应示意图,激活肥大细胞表面受体机理示意图,第八章变态反应,第一节过敏反应,第二节细胞毒型,由抗体介导的细胞毒，即抗体与为抗原细胞发生反应，激活补体，形成以细胞损伤为特征的一种变态反应,细胞毒型变态反应示意图新生儿溶血性贫血,初次妊娠,抗原溢出,母体,再次妊娠,记忆细胞,浆细胞,产生抗体,溶血,胎盘,第八章变态反应,第一节过敏反应,第二节细胞毒型,由抗体与可溶性抗原结合形成的免疫复合物，沉积于局部血管壁，激活补体和吞噬细胞，产生局部组织损伤为特征的变态反应,第三节免疫复合物型,免疫复合物型变态反应示意图,抗原抗体复合物,嗜中性粒细胞,第八章变态反应,第一节过敏反应,第二节细胞毒型,由细胞免疫介导的一种变态反应。T细胞与相应抗原再次反应时，分泌细胞因子，使单核巨噬细胞迁移于局部组织，产生炎症或肉芽肿。,第三节免疫复合物型,第四节细胞免疫（迟发）型,细胞免疫型变态反应,抗原,致敏T细胞,释放细胞因子,活化巨嗜细胞,局部反应,四种变态反应特征,参与成分机理致病机理病例,IgE补体补体T细胞肥大细胞Ab+Ag(细胞)Ab+Ag(可溶)吞噬细胞,致敏IgE结合肥大细胞活性介质,Ab+Ag(自身细胞),Ab+Ag沉积血管组织细胞壁,Ts机能下降介质机制紊乱,补体+Ab+Ag,前提：长期炎症,巨噬细胞+淋巴细胞局部免疫加剧细胞转移,青霉素反应花粉,输血反应新生儿溶血性贫血,血清病自身免疫复合物病,结核菌素肉芽肿,型型型型,慢性感染,第八章变态反应,第一节过敏反应,第二节细胞毒型,思考题与作业:写出参与各种变态反应的组分（细胞、分子）、过程和机制、特点、区别及临床实例。,第三节免疫复合物型,第四节细胞免疫（迟发）型,重点：,感染：病原体侵入机体，定居生长繁殖，直接或通过产生的毒素引起机体组织细胞、器官或全身性病理变化。,第九章抗感染免疫,抗感染免疫：机体在病原体感染后所产生的生理性和病理性反应过程。,概念：,了解不同病原诱导的免疫机理特点,第一节抗细菌感染免疫,第九章抗感染免疫,1.细菌种类及抗原种类、性质和特点O、H、K等。,一、特点：因细菌感染部位、结构特点和抗原性质，引起不同的免疫反应。,2.细菌感染方式：细胞内和细胞外感染。,二、抗细菌感染免疫机制：特异性非特异性免疫机制和调节,1.溶菌酶、补体等；吞噬、消化；,2.细胞免疫；,3.体液免疫：产生抗体和中和作用：毒素、酶类、K抗原；,4.调理作用：抗体依赖性性细胞毒。,细菌结构示意图,菌毛,细胞浆,鞭毛,核糖体,DNA,细胞膜,细胞壁,荚膜,第九章抗感染免疫,第二节抗病毒免疫,1.病毒的结构和抗原,一、病毒的生物学性质和感染特点,二、抗病毒感染的免疫机制,1.非特异性免疫：干扰素（种类及特点）；,2.特异性免疫：,3.病毒持续性感染的特点,细胞免疫：细胞毒：消除病毒（感染细胞，K细胞）；,抗体：中和作用，抗体依赖性细胞毒；,2.感染细胞的特点：寄生部位（胞内外、核内外）和吸附侵入、复制和释放过程，以及对宿主细胞的影响。,壳粒,纤突,囊膜,衣壳,芯髓,核衣壳,病毒结构示意图,第九章抗感染免疫,第三节抗寄生虫免疫,一、畜禽寄生虫的种类及其寄生特点,1.种类：原虫、蠕虫、昆虫等（进化特点和机体生理活动）,2.寄生虫抗原性质：免疫原性低,3.机体抗寄生虫免疫的基本特点（IgA,IgE,过敏反应）,第九章抗感染免疫,第三节抗寄生虫免疫,二、抗原虫感染免疫,1.非特异性免疫：终身不感染,一、畜禽寄生虫的种类及其寄生特点,3.原虫对免疫应答的逃避：（抑制，变换、隐蔽）吞噬不消除，抗原变换，抗原隐蔽,2.特异性免疫：T细胞和抗体,原虫感染示意图,孢子体,裂殖子,配子体,第九章抗感染免疫,第三节抗寄生虫免疫,三、抗蠕虫感染免疫,1.非特异性免疫：宿主与寄生虫，寄生虫之间的拮抗,一、畜禽寄生虫的种类及其寄生特点,二、抗原虫感染免疫,2.特异性免疫：体液免疫：IgE，IgA（肠道血液）细胞免疫：迟发型变态反应，局部炎症环境细胞毒杀伤幼虫等,3.对免疫应答的逃避：MHC，吸附宿主抗原，抗原变换，抑制免疫反应，诱导耐受。,抗蠕虫感染免疫示意图,第四节疫苗,一、对疫苗的要求,二、疫苗的种类,1.传统疫苗：减毒疫苗，灭活疫苗,基因疫苗的发明与后基因组计划,安全性，,有效性,2.工程疫苗：多肽疫苗，重组疫苗,3.基因疫苗（核酸疫苗）,基因疫苗的制作原理,亚单位疫苗的基因操作示意图,保护性抗原基因,转入表达质粒,转入工程菌,表达质粒,重组质粒,诱导表达,多肽疫苗,缺失霍乱毒素A1肽示意图,重组疫苗,重组病毒疫苗示意图,重组质粒示意图,第四节疫苗,一、对疫苗的要求,二、疫苗的种类,1.传统疫苗：减毒疫苗，灭活疫苗,基因疫苗发明与后基因组计划,2.工程疫苗：多肽疫苗，重组疫苗,3.基因疫苗（核酸疫苗）,基因疫苗的制作原理,基因疫苗的作用机制,基因疫苗的评价与发展前景,安全，,作用持久，,可连接多价表位，,问题：,免疫途径，高效表达,核酸疫苗免疫反应示意图,T细胞,B细胞,组织中抗原提呈细胞,杀伤性T细胞,Th1细胞,靶细胞,T细胞增殖分化,杀伤靶细胞,记忆T细胞,记忆B细胞,Th2细胞分泌细胞因子,浆细胞,组织中抗原提呈细胞,Th细胞,抗体,第四节疫苗,一、对疫苗的要求,二、疫苗的种类,三、疫苗的佐剂与免疫载体,1.佐剂的作用：增强机体免疫效果,2.佐剂的种类：化学，生物学，物理学,3.免疫载体,第四节疫苗,一、对疫苗的要求,二、疫苗的种类,四、疫苗的生产、储运和使用,三、疫苗的佐剂与免疫载体,1.疫苗生产工艺与规程,2.疫苗的储运条件要求,3.疫苗的接种途径、质量与安全保障,第十章免疫性疾病,种类,免疫系统或免疫调节系统异常所致,自身免疫与自身免疫病；免疫缺陷病,原因,第十章免疫性疾病,第一节自身免疫与自身免疫病,自身免疫病：因自身免疫应答而产生自身组织损伤或功能障碍，出现临床症状。,一、概念,自身免疫：泛指机体免疫系统对自身成分产生免疫应答，产生自身抗体或致敏淋巴细胞,第十章免疫性疾病,第一节自身免疫与自身免疫病,二、自身免疫病的种类,1.原发型：与遗传相关,一、概念,器官特异性:特定器官,如胰岛素依赖性，人的糖尿病，桥本氏甲状腺炎,非器官特异性:多种器官组，如：类风湿性关节炎人的重症肌无力。,因自身免疫引起的甲状腺亢进示意图,ACh：胆碱能神经递质,第十章免疫性疾病,第一节自身免疫与自身免疫病,二、自身免疫病的种类,1.原发型：与遗传相关,一、概念,器官特异性:特定器官,如胰岛素依赖性，人的糖尿病，桥本氏甲状腺炎,非器官特异性:多种器官组，如：类风湿性关节炎人的重症肌无力。,2.继发型：与用药、外伤、感染有关。,第十章免疫性疾病,第一节自身免疫