枯草芽孢杆菌b.subt12酶学性质浅析

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/6枯草芽孢杆菌BSUBT12酶学性质浅析摘要考察了分离得到的一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌BSUBT12最适作用温度、PH值以及温度、PH值、金属离子和表面活性剂对酶稳定性的影响。试验研究表明该酶最适作用温度为55，最适作用PH为75，酶在55反应45MIN仍有50的酶活力，热稳定性较好。金属CA2和表面活性剂TWEEN80对酶有一定的激活作用，但激活作用不太明显。关键词枯草芽孢杆菌；中性蛋白酶；酶学性质；中国分类号Q9252文献标码A中性蛋白酶是一类适合于在中性条件下水解蛋白质肽键的酶类,最早被发现并广泛应用于工业化生产,可用于皮革脱毛、动物血液蛋白酶水解制备复合氨基酸营养液1、大豆蛋白水解2以及医学治疗3等应用领域中。目前国内外有关中性蛋白酶的研究相当的多17。酶作用条件不是酶的特征性参数,因环境的改变而改变,酶活力不仅受温度、PH的影响,而且还易受到金属离子、表面活性剂等环境因素的影响。因此,本试验着重考察了酶反应体系温度、PH值、金属离子以及表面活性剂对酶作用条件及稳定性的影精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/6响,希望通过此研究得到BSUBT12的最佳反应条件和酶的稳定性,为其应用奠定良好的理论基础。1材料与方法11材料111供试菌种由课题组分离得到，经初步鉴定为枯草芽孢杆菌。112培养基1121牛肉膏蛋白胨培养基8培养基配方略。1122发酵培养基9培养基配方略。12方法121菌种鉴定通过观察菌落形态、培养特性及生理生化特性等对BSUBT12进行鉴定。122酶活力测定按FOLIN酚法10精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/6124酶最适作用温度将稀释粗酶液分别于40、45、50、55、60、65、70不同温度下反应,测定其蛋白酶活力。以温度为横坐标,相对酶活力为纵坐标作图。125酶最适PH值的研究分别配制PH不同的1的干酪素溶液,按FOLIN酚法10进行蛋白酶活力测定。以PH为横坐标,以相对酶活力为纵坐标作图。其中PH3050由NA2HPO4柠檬酸缓冲液配制,PH6080由磷酸缓冲液配制,PH90由硼酸缓冲液配制,PH100由硼砂NAOH缓冲液配制。126温度对酶稳定性的影响取20ML稀释粗酶液于55恒温水浴10MIN、20MIN、30MIN、40MIN、50MIN、60MIN,然后测定其残存酶活力,以时间为横坐标,相对酶活力为纵坐标作图。127PH对酶热稳定性影响用PH75的缓冲液定容1ML粗酶液至100ML,分别取20ML稀释酶液于40、50、60、70保温30MIN,测残余酶活。以温度为横坐标,相对酶活力为纵坐标作图。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/6128金属离子对酶稳定性的影响在稀释酶液中加入01MOL/L的不同金属离子,保温30MIN,测定蛋白酶活力,以金属离子作横坐标,蛋白酶活力作纵坐标作图。129表面活性剂对酶稳定性的影响在稀释粗酶液中加入不同体积的表面活性剂TWEEN80,于40保温30MIN,然后测定其蛋白酶活力。以TWEEN80添加量作横坐标,酶活力为纵坐标作图。2结果与分析21菌种鉴定细胞杆状,成链状排列,端口成圆形,芽孢椭圆或圆形,单芽孢,兼性好氧,能利用葡萄糖、L阿拉伯糖、D木糖和D甘露糖产酸。葡萄糖产气,最适生长温度3537,5和50以上无法生长,菌落成乳白色,边缘整齐,表面有皱褶、隆起,菌落表面干燥,G,菌落不透明,MR试验、VP试验、过氧化氢酶试验均为阳性,可利用丙二酸盐。初步鉴定为枯草芽孢杆菌精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/622酶最适作用温度将粗酶液分别于不同温度下反应,测定其蛋白酶活力。结果如图1。从图1可以看出，酶在55酶活性最高，在4560有较好的稳定性，酶最适作用温度为55。23酶最适作用PH值将稀释粗酶液于不同PH值的缓冲液体系中反应,然后测定其蛋白酶活力,结果如图2。从图2可以看出,酶在PH75缓冲液体系中酶活力最高。因此酶最适PH为75。图1酶最适作用温度图2酶最适作用PH值24温度对酶稳定性的影响将酶液于55保温10MIN、20MIN、30MIN、40MIN、50MIN、60MIN、70MIN后,按FOLIN酚9法测定蛋白酶活力,结果如图3。从图3可以看出,酶的热稳定性较好。在55保温45