探讨白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌组织凋亡的影响

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/7探讨白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌组织凋亡的影响摘要目的探讨白藜芦醇RES对动脉粥样硬化兔心肌组织线粒体途径凋亡的影响。方法健康雄性新西兰白兔70只，随机分为5组正常组、病理对照组、病理低剂量RES组4MGKG1D1，病理中剂量RES组8MGKG1D1、病理高剂量RES组16MGKG1D1。分笼饲养12周后，取左心室尖部心肌组织。HE染色观察心肌组织形态学改变，原位末端标记法检测心尖部细胞凋亡率，半定量RTPCR检测BAX、BCL2的MRNA变化。结果HE染色下各组细胞形态学改变不明显病理对照组细胞凋亡指数高于正常组P关键词藜芦生物碱类动脉硬化基因，调节心血管药物中药细胞凋亡心肌许多细胞及动物实验研究表明，白藜芦醇RESVERATROL,RES具有抗癌、抗血栓、抗过敏、抗氧化等药理作用1，是红葡萄酒中具有心血管保护作用的最重要的物质。笔者前期工作探讨了RES对血管内皮细胞的保护作用，以及改善动脉粥样硬化兔心肌纤维化的作用23。本研究将进一步探讨RES对动脉粥样硬化兔模型心肌细胞凋亡的影响，以及心肌细胞抗凋亡基因BCL2、促凋亡基因BAX表达情况。1材料和方法精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/7材料主要试剂RES上海纳贝生物科技股份有限公司，批号RES20070401吐温80福建省医学科学研究所TRIZOL试剂美国INVITROGEN公司逆转录试剂盒美国PROMEGA公司TAP酶及DNTP日本TAKARA公司原位细胞凋亡检测试剂盒福州迈新生物技术开发有限公司。主要仪器石蜡切片机RM2245型，美国SHANDON公司生物组织摊烤片机JK5型，武汉俊杰电子有限公司组织匀浆机T18ULTRATURRA型，德国POLYTRON公司核酸蛋白分析仪DU640型，美国BECKMAN公司PCR扩增仪MASTERCYCLERPERSONAL型，德国EPPENDORF公司全自动凝胶成像分析系统IMAGEMASTERVDSCL型，瑞典AMERSHERPHARMACIA公司。方法动物分组及处理普通级8周龄健康雄性新西兰白兔70只上海生旺实验动物有限责任公司，许可证号SCXK沪20020011，饲养于福建省医学科学研究所动物实验室许可证号SYXK闽20060002，体质量KG。经普通饲料苜蓿草粉适应性喂养10D后，随机分成5组，开始实验实验第0周1正常组10只，喂普通饲料生理盐水10ML灌胃。2病理对照组18只，喂高脂饲料吐温溶液10ML灌胃。3病理低剂量RES组14只，喂高脂饲精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/7料RES4MGKG1D1稀释于吐温溶液10ML灌胃。4病理中剂量RES组14只，喂高脂饲料RES8MGKG1D1稀释于吐温溶液10ML灌胃。5病理高剂量RES组14只，喂高脂饲料RES16MGKG1D1稀释于吐温溶液10ML灌胃。高脂饲料配方41胆固醇5蛋黄粉5猪油胆盐普通饲料。每只兔限饲料100G/D，自由饮水，实验第0周开始灌胃，每日1次，连续给药12周。上述RES剂量参照文献5。组织切片观察实验动物于第12周末称质量后予戊巴比妥钠麻醉，立即剖开胸腔，取兔心尖部心肌组织标本置于10中性福尔马林溶液固定24H，常规石蜡包埋、梯度脱水、透明、浸蜡、包埋，5M厚连续切片。苏木素伊红HE染色二甲苯脱蜡蒸馏水冲洗3次，每次3MIN，在苏木素溶液中浸泡10MIN，用蒸馏水冲洗3次，每次3MIN，取出后在1盐酸酒精中分化，立即置入蒸馏水中冲洗在伊红溶液中浸泡5MIN，取出后用蒸馏水冲洗干净，经梯度酒精脱水、二甲苯透明12MIN，共3次。中性树脂封片后显微镜观察。福建医科大学学报2009年11月第43卷第6期朱鹏立等RES对动脉粥样硬化兔心肌组织凋亡的影响原位末端标记检测心肌细胞凋亡采用末端脱氧核糖精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/7核酸转移酶介导的生物素平移末端标记技术TUNEL法标记凋亡心肌细胞，按试剂盒说明书操作。切片常规脱蜡脱水，微波抗原修复，新鲜配制3H2O2，室温处理10MIN，PBS冲洗3MIN2次，20G/ML蛋白酶K消化，PBS冲洗3MIN2次，滴加TUNEL混合液，于孵育盒中3760MIN，PBS冲洗3MIN3次，每片加50L的碱性磷酸酶抗体，孵育盒中3730MIN，PBS冲洗3MIN3次，每片2滴BCIP/NBT染色剂，室温下孵育30MIN，PBS冲洗3MIN3次，水性封片剂封片，60烘干。光镜下观察正常细胞不被标记，细胞核蓝黑色的为阳性细胞。每张切片随机观察510个视野，计数每高倍镜视野400中平均阳性凋亡细胞数，其阳性细胞数与总细胞的百分比为细胞凋亡指数反映各组心肌细胞凋亡的情况。半定量逆转录聚合酶链反应RTPCR称取心尖部心肌组织50100MG，TRIZOL法提取组织总RNA，按说明书操作。核酸检测仪下测定RNA的浓度和纯度，OD260/280在为符合要求。取RNA1G于20L反应体系中逆转录MRNA为CDNA，目的基因及内参的引物序列、退火温度及产物长度见表1。各取PCR产物5L，在1的琼脂糖凝胶上进行电泳，溴化已锭染色，应用IMAGEMASTERVDSCL对凝胶成像，以ACTIN为内参照进行半定量分析。表1半定量PCR的引物序列、退火温度及产物长度精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/7统计学处理数据以XSD表示，使用SPSS进行统计分析。多个样本均数间比较采用单因素方差分析，P2沈阳辉，朱鹏立，贾德安，等白藜芦醇对活化内皮细胞内活性氧表达的影响J中华高血压杂志，2009，1721371403高淑卿，朱鹏立白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌纤维化和基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达的影响J中国动脉硬化杂志，2009，1721011034沈琳，高海青，邱洁，等葡萄籽原花青素对实验性动脉粥样硬化兔基质金属蛋白酶和氧化低密度脂蛋白的影响J中国心血管杂志，2006，113313455ZOUJ,HUANGY,CAOK,ETALEFFECTOFRESVERATROLONINTIMALHYPERPLASIAAFTERENDOTHELIALDENUDATIONINANEXPERIMENTALRABBITMODELJLIFESCI，2000,681531636WALLERATHT,LIH,GODTELAMBUSTUABLENDOFPOLYHENOLICCOMPOUNDSEXPLAINSTHESTIMULATORYEFFECTOFREDWINEONHUMANENDOTHELIALNOSYNTHASEJNITRICOXIDE,2005,12971047KAJSTURAJ,CHENGW,REISSK,ETALAPOPTOTIC精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/7ANDNECROTICMYOCYTECELLDEATHSAREINDEPENDENTCONTRIBUTINGVARIABLESOFINFARCTSIZEINRATSJLABINVEST,1996,74861078ADAMSJM,CORYSTHEBCL2PROTEINFAMILYARBITERSOFCELLSURVIVALJSCIENCE，1998,281132213269MISAOJ,HAYAKAWAY,OHNOM,ETALEXPRESSIONOFBCL2PROTEIN,ALLINHIBITOROFAPOPTOSIS,ANDBAX,ALLACCELERATOROFAPOPTOSISINVENTRICULARMYOCYTESOFHUMANHEARTSWITHMYOCARDIALINFARCTIONJCIRCULATION,1996,941506151210BIONDIZOCCAIG,ABBATEA,VASATUROF,ETALINCREASEAPOPTOSISINREMOTENONINFARCTEDMYOCARDIUMINMULTIVESSELCORONARYDISEASEJINTCARDIOL,2004,9410511011YUKIHIROH,GENZOUT,JUNM,ETALAPOPTOSISANDOVEREXPRESSIONOFBAXPROTEINANDBAXMRNAINSMOOTHMUSCLECELLSWITHININTIMALHYPERPLASIAOFHUMANRADIALARTERIESJVASCBIOL,1999,192066207712OLIVETTIG,ABBIR,QUAINIFAPOPTOSISIN精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/7THEFAILIN