药物分析习题解答-第十一章小结

第十一章甾体激素类药物分析小结学习目标知识目标了解本类药物的结构特点，异烟肼比色法、KOBER反应比色法测定药物含量理解甾体药物的化学结构与分析方法之间的关系，药物中有关物质检查及紫外分光光度法测定本类药物含量的特点掌握本类药物的常用的鉴别方法，四氮唑比色法测定含量的原理和方法以及高效液相色谱法在甾体药物分析中的应用能力目标能利用本类药物的分析特点，分析类似结构药物能够依据药典，对本类药物进行质量分析甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核，基本骨架如下23451016789121141371615918ABCDC2021甾体激素类药物主要包括肾上腺皮质激素和性激素两大类。性激素又分为雄性激素、蛋白同化激素、孕激素和雌激素等四类。结构特点A环，不饱和酮，标记为43酮；少数为苯环；C3可能有酮基或羟基；C10、C13多数为角甲基，少数C10无角甲基；C11可能有酮基或羟基；C17可能有羟基、酮基、甲酮基、醇酮基、甲基、乙炔基等；有些在C6或C9上引入卤素，C16上引入甲基、羟基，以及具有C1、C2双键等；有些取代基是型，有些是型。一、药物结构与性质关系分析（熟悉）1溶解性。2氧化呈色3还原性C17醇酮基具还原性，能与四氮唑盐、碱性酒石酸铜、硝酸银反应而呈色。此性质可用于定性、定量反应。4酮基呈色反应43酮基、C17具有醇酮基等均与羰基试剂（羟胺、芳香肼、芳胺等）发生呈色反应。5甲酮基的呈色反应甲酮基以及活泼亚甲基，能与亚硝基铁氰化钠、芳香醛类等反应呈色，可用于黄体酮的鉴别。6有机氟的呈色反应有机氟经氧瓶燃烧成为无机氟，与茜素氟蓝及硝酸亚铈起反应，即显蓝紫色。7C17位乙炔基（炔雌醇）可与AG形成白色沉淀。雌激素A环酚羟基可与FE3、重氮苯磺酸盐呈色。8有些药物制成酯的形式，酯水解后，可产生特殊臭，可用于鉴别。二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（熟悉）与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色。此反应用于多数甾体激素的鉴别。（二）官能团的呈色反应1酮基的呈色反应（掌握）与羰基试剂（异烟肼、2，4二硝基苯肼、硫酸苯肼）呈色。多数甾体激素分子结构中的酮基可发生此反应。如醋酸氢化可的松和黄体酮的鉴别。2甲酮基的呈色反应（掌握）甲酮基以及活泼亚甲基，在碳酸钠和醋酸铵存在的条件下，与亚硝基铁氰化钠、芳香醛类等反应呈色。这是黄体酮的灵敏、专属的鉴别方法。3有机氟的呈色反应（掌握）有机氟经氧瓶燃烧后生成无机氟化物，与茜素蓝及硝酸亚铈反应呈色。醋酸氟轻松、醋酸地塞米松等含氟甾体药物均采用此法进行鉴别。（三）氧化还原反应（掌握）皮质激素的C17醇酮基具还原性，可发生氧化还原反应。1碱性酒石酸铜的反应（与斐林试剂的反应）（掌握）与碱性酒石酸铜反应生成橙红色氧化亚铜沉淀。如醋酸地塞米松的鉴别2与氨制硝酸银的反应（掌握）与氨制硝酸银反应，生成游离金属银。如炔孕酮的鉴别（四）沉淀反应（掌握）含炔基的甾体激素，遇硝酸银试液，即生成白色沉淀。炔雌醇、炔诺酮、炔孕酮片均采用此法进行鉴别（五）药物或其衍生物熔点（了解）（六）有机氟化物反应（掌握）经加热或氧瓶燃烧破坏生成无机氟离子，在PH43的条件下与茜素氟蓝试液和硝酸亚铈试液反应，生成蓝紫色的水溶性配合物。（七）薄层色谱法（熟悉）（八）高效液相色谱法（掌握）多种甾体类药物原料及制剂均采用高效液相色谱法进行鉴别。方法是高效液相色谱图中，供试品溶液的主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。（九）紫外分光光度法（熟悉）可用规定吸收波长和吸光度比值法进行鉴别。（十）红外吸收光谱法（了解）专属性强，大多甾体激素类药物采用该法鉴别。方法按要求制作的供试品的红外吸收图谱与对照图谱一致。二、杂质检查（一）有关物质（熟悉）有关物质的检查方法，主要采用薄层色谱法和高效液相色谱法。1薄层色谱法（熟悉）多采用高、低浓度对照法来限定其它甾体的量。2高效液相色谱法（熟悉）多采用不加校正因子的主成分自身对照法来控制杂质的量。如炔诺酮中“有关物质”的检查（二）游离磷酸盐（掌握）控制在生产和贮存过程中可能引入磷酸盐，如地塞米松磷酸钠中游离磷酸盐的检查。方法该法系利用在酸性溶液中磷酸与钼酸作用生成磷钼酸铵，再经还原形成的磷钼酸蓝钼蓝，在740NM波长处有最大吸收。供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。（三）甲醇和丙酮（熟悉）控制终产物中甲醇和丙酮的量。方法采用气相色谱法检查残留的甲醇和丙酮。如地塞米松磷酸钠中甲醇和丙酮的检查。（四）硒（熟悉）（五）乙炔基（熟悉）乙炔基的检查是利用硝酸银与乙炔基反应，生成硝酸，再用氢氧化钠滴定液滴定生成的硝酸，电位法指示终点。四、含量测定本章仅讨论高效液相色谱法、紫外分光光度法、四氮唑比色法等药典常用或常规方法。（一）高效液相色谱法（熟悉）本类药物及其制剂大多采用高效液相色谱法（绝大多数为内标法）测定含量。固定相多为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相大都是甲醇和水组成的混合液，（二）紫外分光光度法（熟悉）存在43酮基和苯环共轭系统，于紫外光区有特征吸收。具43酮基结构的皮质激素、雄性激素、孕激素以及许多口服避孕药的最大吸收在240NM附近。具有苯环的雌激素的最大吸收在280NM附近。（三）比色法1四氮唑比色法（掌握）四氮唑盐的种类最常用的四氮唑盐有两种2,3,5三苯基氯化四氮唑TTC，其还原产物的MAX在480490NM，也称红四氮唑（RT）；3,3二甲氧苯基双4,4（3,5二苯基）氯化四氮唑，其还原产物为暗蓝色，MAX在525NM左右。反应原理皮质激素C17醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲。1基团影响C11酮基的反应速度快于C11羟基甾体；C21羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢。2溶剂和水分的影响含水量大时会使呈色速度减慢，但含水量不超过5时，对结果几无影响，故多采用95乙醇，必要时也采用无水乙醇。醛有还原性，会使吸光度增高，故一般应采用无醛醇作溶剂。3碱的种类及加入顺序的影响氢氧化四甲基铵是最理想的碱，常用。皮质激素和氢氧化四甲基铵长时间接触，会发生部分分解。因此，以先加四氮唑盐溶液，再加碱液为好。4温度与时间的影响呈色速度随温度增高而加快，一般以室温或30恒温条件下显色，易得重现性较好的结果。中国药典2005年版多数在25暗处反应4045分钟。5空气中氧及光线的影响反应及其产物对光和空气敏感因此须用避光容器并置于暗处显色，在达到最大呈色时间后，立即测定吸光度。醋酸泼尼松龙乳膏即采用本方法进行的含量测定。2异烟肼比色法（了解）甾体激素C3酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收。某些具有两个酮基的甾体激素可形成双腙，如黄体酮、可的松和氢化可的松等。3KOBER反应比色法（了解）KOBER反应是指雌激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变，并在515NM附近有最大吸收。同步测试答案一、单相选择1C2C3A4B5C6B7C8A9D10A二、多项选择1AB2AD3BC4AC5ACD6BCD7AB8ABCD9AD10BC三、计算题1998299931004049四、分析题1醋酸可的松原料和片剂分别用高效液相色谱法和紫外分光光度法测定含量，试