系统性红斑狼疮患者外周血il（可编辑）

系统性红斑狼疮患者外周血IL目录中文摘要。英文摘要符号说明前言材料与方法结果。讨论结论附图参考文献综述口口致谢攻读学位期间发表的学术论文原创性声明。系统性红斑狼疮患者外周血/的变化和临床意义舢哪研究生朱广婷专业免疫学导师李芳教授中文摘要背景年,和伍飙根据细胞因子分泌的不同将细胞分成和眦细胞。早期的研究表明厂细胞之间的比例失衡可导致自身免疫性疾病的发生。多数学者认为活动性表现为细胞功能下降,啦细胞功能亢进,从而出现细胞过度活化,产生多种自身抗体,导致组织损伤。而最近的研究发现了一种新的细胞亚群,即细胞,是不同于砌和毗细胞的一种新型细胞,可分泌白介素【“,和细胞因子等。目前研究表明,能够诱发一系列前炎症因子包括吖、和等产生增加,进而促进的炎症反应。等发现可能通过诱发、抗抗体和外周血单核细胞的过度产生,诱导狼疮肾炎的发生,表明可能间接或直接促进狼疮患者体内细胞的活化。等进一步证实,可以通过诱导自发性生发中心形成而促进自身免疫性疾病的发生。以上这些证据均表明,细胞及可能在的发病和疾病的进展中起着重要作用。然而目前关于细胞及儿在中的作用研究还很有限,认为在的发病机制和病程发展中发挥着重要作用,但是其具体的变化趋势及其临床意义,目前仍存在争议。本课题组根据目前的研究进展,提出假设患者外周血中可能存在细胞数量及表达水平的异常,而且这些异常很可能与疾病活动度、脏器损害、不同的临床表现和实验室指标有关。深入研究细胞及几在发病中的作用,将有望找到新的生物学标记和治疗靶点。目的检测健康者及患者外周血细胞阳性表达率及血清中的值,并比较健康者和患者外周血细胞阳性表达率及血清值的存在的差异。患者组同时与疾病活动性、脏器损害、临床表现及自身抗体等实验室指标进行比较和相关性分析,来进一步探讨在发病及疾病进展过程中细胞和可能的作用机制及变化的临床意义。方法收集泰安市中心医院风湿免疫科年月年月住院及门诊的患加,例,者例,并同时收集与其性别和年龄相匹配的健康者且患者按疾病活动性、脏器损害、相关临床表现及实验室检查分组。收集患者和健康者外周血,分离单个核细胞后,再经体外刺激活化、固定破膜及细胞内染色等一系列处理后,应用流式细胞技术检测细胞阳性表达比率。同时应用法检测患者及健康者血清的值。结果患者与健康者组之间、活动性和非活动性患者之间、肾炎和非肾炎组患者之间外周血细胞阳性表达率的比较。患者外周血细胞阳性表达率高于,士士,活动性患者外周血细胞阳性表达率高于非活动性患者士坩士,患者外周血细胞阳性表达率高于非患者士坩士,酊。患者外周血细胞阳性表达率与疾病活动指数甜相关性分析。患者外周血细胞阳性表达率与呈显著相关,尸。患者外周血细胞阳性表达率与临床特征及实验室检查指标的比较和相关性分析。在患者伴有蝶形红斑和雷诺现象中细胞阳性表达率与无此症状的患者升高。患者外周血细胞阳性表达率与补体呈负相关,尸,与抗双链坂,抗体定量呈正相关,尸。患者和健康者、活动性和非活动性患者之间、肾炎和非肾炎患者之间血清值之间的比较。与健康者相比较,患者血清水平显著升高壬淞士,。析。血清儿水平与临床特征及实验室检查指标未发现存在显著相关性。结论细胞外周血阳性表达率与的疾病活动度呈正相关,活动期患者阳性表达率相应增加还可能与者的脏器损害特别是肾脏损害有关,在患者组中阳性率也相应的增加,还可能与病情活动时抗抗体作用有关。与健康组比较,在患者血清中增加,但未发现疾病的活动性及脏器损害有关,本研究结果表明细胞及可能参与的发病和疾病进展过程。细胞可能作为检测疾病活动和脏器损害及治疗效果的指标,可能是新的生物治疗靶点。关键词系统性红斑狼疮细胞白介素棚随锣妇晒孤锄,趾血嬲、弱鼢,恤鹤傩缸伽【盯船俄晰艉如,培忱粥柚勰弱丘也俩也,虹恤砌姗眦溯黼啦书锄砌锄呻妇一叭血舶,则也哆嘛帅硫硒蜥锄瑚一一】一屺【氨一吼嬲也如也锄切也铋趾玎叩觚血觚越鲥锄锄砌柚铆胁,卸、吼,明,弱、嬲圮,硒,璐锄画丑证血赳皿孤吼啪孤、孤巧嘶玎觚、嬲仞印罄迦啪埘够删眦畸砌触锄锄,昀血彤眦锄巧啷十蝴胍一岣吣璐一、协觚嘶劬协舶邪诅觚鹏埘撕璐妇,鹏也印“孤垃,删部嬲咖,鹏、析晡砌池铆吣士坩士尸刃血士粥士,刃锄计谢勰霉士士尸刃玎谢尸锄锄撕鹏姗巧部龃、耐,嘶眦证玳、祝也一,以以,也觚锄几一仃,撕觚虹,、析城勰嘶锄,玳础咄、祧吐彘蚴嚣啪士士,旧班丘锄晰廿眦硫印研,幽、釉姗骶、珊嘶雒咖舡涮几龃“巧鹏酶一嘶】毗巧明勰觚够卸脚锄,觚一,螂硒锄勰诹锄一也抽【硫一呵他符号说明英文简称英文全称中文全称锄印系统性红斑狼疮辅助细胞嗵印翻印砌实验胜自身勉就橱漪巷寄哆谈认砌胶原诱导的关节炎甜【硫白细胞介素求仃趾转化生长因子锄“趋化因子北人单核细胞趋化蛋白瞰矾类风湿关节炎流式细胞仪加吼美国风湿学会狼疮肾炎晡非狼疮肾炎套化神经精神狼疮址病情活动指数璩非活动性活动性一陋佛波醇蛐二甲基亚砜/,转交影分钟删矾前向角仕侧向角异硫氰酸荧光素也血藻红蛋白健康对照位把磷酸盐缓冲液伽叩补体笛酶联免疫吸附实验抗核抗体出缸鼬陷双链血沉仳干扰素皿肿瘤坏死因子双阴性细胞眦离子霉素钠盐调节性细胞叫翻吨维甲酸相关孤核受体觚伯体信号传导吲豢翮赫衍舀试恤分钟白细胞血小板一刖罱系统性红斑狼疮面哪他璐,是自身免疫介导的,以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。血清中出现多种自身抗体和多系统损害是的两个主要临床特征。本病病程以病情缓解和急性发作交替为特点,有多脏器肾脏、中枢神经系统等损害者预后较差。几乎各种自身免疫性疾病的临床表现均有可能发生在,因此,许多学者称之为自身免疫疾病的原型。在我国的患病率为/,本病好发于生育年龄期女性,多见于岁年龄段,女男发病率比例为。作为最常见的自身免疫性疾病之一,严重影响了受累人群的生活质量,重者甚至危及生命,从而越来越受到广泛关注。而众多自身免疫性疾病的发病机制至今尚不明确,给疾病的有效治疗和治愈带来了阻碍和困难。的病因和发病机制更不明确。目前研究认为,的发病既有免疫遗传、性激素等内在因素,也与环境因素紫外线等、药物、微生物感染等外在因素有关,这些因素相关作用导致免疫反应的异常。异常的免疫反应包括高反应性和高敏感性的、淋巴细胞以及抗原获取能力和抗体反应的调节异常,经过一系列反应,最终持续产生致病性抗体和形成能与靶组织结合免疫复合物,引起发病。目前认为免疫系统中淋巴细胞异常活化是导致发病、病情进展和预后的关键因素。其中淋巴细胞是人体免疫系统的主要调节者,辅助性细胞,作为效应细胞的重要成分,参与免疫应答的各个阶段,并在免疫调节中发挥关键作用,细胞产生的细胞因子在的发病机制中也起着重要作用。年,锄和伍锄【】根据细胞因子分泌的不同将细胞分成和啦细胞,形成了理解细胞免疫生物学、固有免疫和适应性免疫调节的理论框架。多数学者研究表明厂间的比例失衡在自身免疫性疾病的发病中起主导作用【】。多数学者认为活动性表现为细胞功能下降及碱细胞功能亢进,从而出现细胞过度活化,产生多种自身抗体,导致组织损伤【】。也有部分学者发现存在相反的厂失衡现象,即砌细胞功能亢进,抛细胞功能减弱。极少数学者发现,患者无厂地细胞比例异常。的亚群平衡的偏离方向至今尚未定论,现在厂屹模式在被不断更新充实,其中最重要是一种新型的细胞亚群即细胞的发现,目前已经有更多的研究表明细胞与自身免疫性疾病关系密切,进而加深了对于细胞的认知。见附图附图初始细胞分化图砷“孽下删孵蜘研裟勰挚竺掣儆糟列时删呵棚岫赫舢嘶注初始细胞在不同细胞因子和转录因子的作用下,分化成不同的细胞群,主要是、眦、和细胞群,各细胞亚群通过分泌不同的细胞因子来发挥不同的作用。初始细胞在和及转录因子、的作用下,分化为型细胞,可分泌刀吖、儿、师来发挥细胞免疫在及转录因子仉玎和觚的作用下,分化为型细胞,可分泌、及也一,发挥体液免疫在】吖、及转录因子作用下,分化为型细胞,可分泌儿、吓、和趋化因子,来发挥促炎、自身免疫和组织损伤在及转录因子作用下,分化为细胞,可发挥自身免疫抑制作用。实验性自身免疫性脑脊髓炎耐印,和胶原诱导的关节炎,是两种典型的动物的自身免疫疾病模型,发现矿细胞介导了此两种疾病的发病。丫干扰素疵猢岛丫是细胞功能活化的关键性细胞因子和分泌的主要细胞因子,与共同促使珈细胞向细胞转化。在和队的靶器官中,吖的表达与其临床特征有关,且应用吖的多克隆抗体可有效治疗邑垣和认和门是细胞主要的转录因子,缺乏此转录因子的小鼠可不发病,以上研究表明细胞介导了经治患者是指经过不同程度的糖皮质激素和免疫抑制剂治疗的患者,共例合并狼疮肾炎肼,例,其诊断依据除符合年修订的分类标准外,还同时还具备有持续周以上不同程度的肾损害表现,如血尿、蛋白尿、氮质血症、脓尿等或是肾脏穿刺病理检查,例,其结果示级以上狼疮肾炎合并狼疮脑病血诊断依据神经精神症状、颅脑影像学异常、脑脊液检查蛋白增高,具备一条,可伴有自身抗体的阳性,尚需排除感染、药物、代谢等原因,同时加上临床医生的评估。对所有患者病情活动度采用时评分系统评估见表。纳入狼疮非活动组,址纳入狼疮活动组,。狼疮非活动组例,给予口服糖皮质激素/联合或是不联合免疫抑制剂治疗。狼疮活动组例,给予口服糖皮质激素芝/或是静脉输注甲泼尼龙或是甲泼尼龙/冲击治疗,至少联合一种免疫抑制剂治疗。所有患者均排除其他全身性疾病。健康对照者来自门诊健康体检者、泰安市中心医院风湿免疫科职工及学生自愿者,共例。入选标准无分类标准中的任何一项症状无重大及慢性病史无长期服用激素或者是免疫抑制剂本人及直系亲属无自身免疫性疾病。表年修订的分类标准颊部红斑固定红斑,扁平或高起,在两颧突出部位。片状高起于皮肤的红斑,粘附有角质脱屑和毛囊栓陈旧病变可盘状红斑发生萎缩性瘫痕。光过敏对日光有明显的反应,引起皮疹,从病史中得知或者医生观察到。经医生观察到的口腔或鼻咽部溃疡,一般为无痛性。口腔溃疡非侵蚀性关节炎,累及个或更多的外周关节,有压痛,肿胀或关节炎积液。浆膜炎胸膜炎或心包炎。尿蛋白北小时或,或管型红细胞、血红蛋白、颗粒或。、肾脏病变混合管型。神经病变癫痫发作或精神病,除外药物或己知的代谢紊乱。血液学疾病溶血性贫血,或白细胞减少,或淋巴细胞减少,或血小板减少。抗抗体阳性,或抗抗体阳性,或抗磷脂抗体阳性包免疫学异常括抗心磷脂抗体、或狼疮抗凝物阳性、或至少持续个月的梅毒血清试验假阳性三者中具备一项阳性。在任何时候和未用药物诱发“药物性狼疮”的情况下,抗核抗体滴抗核抗体度常。年的分类标准在下列分类标准的项中,符合项或是项以上着,在除外感染、肿瘤和其他结缔组织病后,可诊断为。表系统性红斑狼疮活动性指数积分蜘积分项目临床表现癫痫样发作近期发作,除外代谢、感染和药物因素。严重的认知障碍,因而正常活动能力改变,包括幻觉、精神症状思维无连贯性、不合理,思维内容贫乏、无衔接、行为多变、无意义、呆板。除外尿毒症、药物所致。大脑功能异常,定向力、记忆力或其它智能障碍,临床突出并有波动性,包括意识模糊、对周围环境注意器质性脑综合症力不集中加上以下至少两项异常认知障碍、语言不连贯、嗜睡或睡眠到错、精神运动性增加或减少。除外代谢、感染、药物因素。视网膜病变包括絮状渗出、视网膜出血,严重的视觉受损脉络膜渗出或出血及视神经炎。需除外由于高血压、感染或者因素。颅神经异常新出现的累及包括颅神经在内的感觉、运动神经病。严重持续性头痛,可呈偏头痛,麻醉性止痛药治疗无狼疮性头痛效脑血管意外新出现的脑血管意外,除外动脉粥样硬化破溃、坏疽、痛性指端结节、甲周梗死,片状出血,血管炎或活检或血管造影证实存在血管炎至少两个以上关节痛,并有炎症性表现,如压痛、肿关节炎胀或积液。指端肌痛,无力并有肌磷酸激酶或醛缩酶升高,肌炎肌电图改变或肌肉活检证实有肌炎。管型尿血红蛋白、颗粒管型或红细胞管型。血尿个红细胞/高倍镜,除外结石、感染和其它原因。蛋白尿/,新出现或近期增加/以上。脓尿个白细包/高倍镜,除外感染。新出现或复发的异常斑片状或弥散性脱发。脱发皮疹新出现或复发的炎症性皮疹。新出现或复发的口腔或鼻黏膜溃疡。黏膜溃疡胸膜炎胸膜炎性胸痛伴胸膜摩擦音、胸腔积液或胸膜肥厚。心包痛,加上以下至少一项心包摩擦音、心包积液心包炎或心电图或超声心动图检查证实。低补体,下降,低于正常范围最低值。升高。抗抗体发热,除外感染因素。/。血小板下降白细胞下降/,除外药物因素。注积分对病情的判断分为基本无活动分为轻度活动分为中度活动分为重度活动标本收集在研究对象知情同意后,于清晨采集患者及健康者空腹抗凝血和自凝血,抗凝血用于细胞的流式细胞检测,自凝血室温放置内分离血清,保存用于检测。患者相关临床资料的收集参照年美国修改的分类标准和舭评分表收集每位患者的临床资料。患者一般情况包括患者姓名、性别、年龄、民族、病程及应用药物情况等患者相关临床表现血管炎、关节炎、肌炎、发热、皮疹、口腔溃疡、光过敏、脱发、浆膜炎等脏器损害情况患者实验室检查结果血常规、血沉、尿常规、超敏反应蛋白,血清补体、免疫球蛋白、,及自身抗体包括抗核抗体、抗抗体、抗系列包括抗一抗体、抗抗体、抗抗体、抗删抗体,心和抗抗体检测采用间接免疫荧光法和法定量,其它抗体采用免疫印迹法检测。结合患者临床表现、体格检查及实验室检测指标,计算每位患者的越评分。表收集研究对象的一般情况实验技术路线收集患者及健康者外周血/、肝素抗凝血自凝血上上加入淋巴细胞分离心后取血清冻存离液上分离单个核细胞检测/加入离子霉素加入莫能菌素莫能菌素进行刺激作为未刺激对照检测标本值培养/同型对照组实验组同型对照组实验组软件制作标上上上上准曲线和方程式根据方程式计算土上上值固定和破膜晶王实验方法及步骤细胞流式细胞仪技术检测细胞流式仪检测原理淋巴细胞分离液聚蔗糖泛影蒲胺主要成分是一种合成的蔗糖聚合物称聚蔗糖,分子量,具有高密度、低渗透压、无毒性、时比重为仕的特性。血液中各种细胞的比重不同,淋巴细胞与单核细胞的比重约为,而粒细胞和红细胞的比重为左右。将血液加至分离液上,通过离心,可使一定比重的细胞按相应密度梯度进行分布,从而将淋巴细胞与其它血细胞分离开。静息状态下的原始状态细胞向细胞分化的能力很弱,而当接受外界刺激后,分化能力将大大提高,从而有利于检测。常选用的刺激剂是佛波醇比比此,和离子霉素,为一种广谱性细胞刺激剂,它是蛋白激酶幽,的激活物,从而可激活下游多个蛋白激酶磷酸化,形成级联反应,导致许多蛋白质的表达,进而引起细胞的活化。在细胞内,可被二脂酰甘油和的共同作用而激活,因此在离子霉素的转运剂,可将细胞内的转运至胞浆的参与下,细胞内的进一步被激活。和协同活化细胞,活化的细胞可分泌多种细胞因子至细胞外,而仅能检测到细胞内的细胞因子,可通过破坏高尔基体的方式实现,因为细胞因子在合成后需经高尔基体的加工和转运,到达细胞膜,通过高尔基体体膜和细胞膜的融合作用将细胞因子分泌至细胞外。通常选用的阻断剂是布雷菲德菌素,和莫能菌素,其中的阻断作用优于,但由于前者价格较昂贵,实验中多选用来代替,本实验是选用访。为使荧光标记的抗体进入到细胞内,还需要经过固定与破膜的过程,有利于流式细胞仪捕获荧光信号。细胞通过受体接受一系列等刺激信号后,细胞表面就合成和表达一些新的糖蛋白,被称为活化标志,其中最早表达的是。故常利用作为检测体外细胞经刺激活化后的程度。流式细胞仪见附图技术是一种可以对细胞或是亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞逐个进行检测,能通过信号检测器将经荧光染色的细胞经激光激发产生散射光信号和荧光信号,散射光信号又分为前向散射光信号州仕,和侧向散射光信号,前者表示与细胞直径成正相关,后者指与激光束正交度方向的散射信号,它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感,可以提供细胞内结构及颗粒性质的信息。荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带孔滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号见附图。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号,经处理后可以进行储存、作图、统计分析。主要试剂及材料十四烷酰佛波醇瑞士础瑞士离子霉素莫能菌素美国掣阻固定破膜剂美国标记的鼠抗人的单克隆抗体美国美国标记的同型匹配的无关鼠标记的鼠抗人的单克隆抗体美国标记的同型匹配的无关鼠美国杭州四季青公司培养液磷酸盐缓冲液德国欧蒙公司肝素钠上海多禾公司二甲基亚砜德国舯公司主要实验仪器和设备超净工作台苏州净化设备厂日本三洋培养箱低速自动平衡离心机白洋离心机厂型【流式细胞仪高压蒸汽消毒锅日本公司酶标仪山东新华医疗器械股份公司微量移液器流式管美国公司肝素抗凝无菌离心管自制苏州江东精密仪器有限公司水浴箱瑞洁无菌注射器山东威高集团日本公司低温冰箱“及低温冰箱中国海尔集团常用溶液和的配制和无菌离心管制作配制将妒粉状固体溶于蒸馏水中,配成咖的溶液。固体成分。调值至,分装,高压灭菌,保存备用。规格开盖前短暂离心,充分溶解于武的中,分成管置于一冻存,此时浓度为血。用时取支,用稀释于无菌的中,此时的浓度是酌。规格培开盖前短暂离心,加入砌,充分溶解后分成管置于,此时浓度幽。用时取支,稀释于无菌的中,此时的浓度是删。规格开盖加入甲醇,浓度为,为充分溶解为加速溶解,可置于到水浴。无菌分装管置于保存至少个月。用时取支,稀释于于无菌的中,此时的浓度是删。的超纯水中,培养液将冲干粉完全溶于。的加入碳酸氢钠,最后加超纯水定容至,充分溶解后,用调节值在之间,然后过滤除茵,分装后于保存备用。培养液使用前加入灭活的小牛血清及青霉素和链霉素,配成含小牛血清、/青霉素、酌链霉素完全培养液,并调节值在之间。肝素抗凝无菌离心管将离心管清洗泡酸小时后,高压消毒,烤干后于无菌条件下加入肝素备用。外周血细胞的流式细胞技术检测具体操作步骤血标本的收集用肝素抗凝离心管分别收集健康者和患者外周静脉血外周血单个核细胞的分离在超净台中操作加入等体积的缓冲液稀释血液在室温下,取淋巴细胞分离液等体积加入离心管中将稀释的血液缓慢加入淋巴细胞分离液上,室温下,离心用毛细吸管轻轻吸出单个核细胞层,加入含有缓冲液的试管中,充分混匀印,离心,弃上清,重复洗涤两次用含热灭活的小牛血清重悬细胞定容以取细胞悬液细胞计数和活细胞百分率,调整细胞浓度/柚细胞刺激及培养取稀释液加于孔板中,每孔细胞悬液,加入血含小牛血清等体积稀释取两孔分别作为刺激孔孔和未刺激孔孔,将上述标本等体积分配于两孔中,即每孔刺激孔每样本加入终浓度咖离子霉素终浓度删山莫能菌素终浓度酌未刺激孔每样本加入山莫能菌素终浓度枷混匀后,置于,培养箱中孵育小时固定与破膜培养结束后混匀,取支流式试管,并做好标记,分别为、,和分别为和的同型对照管从孔中分别取标本置于和管,从孔中分别取标本置于和管标记的鼠抗人的单克隆抗体,在在和管中分别加入和管中分别加入标记的同型匹配的无关鼠作为同型对照,室温下,避光孵育血每管加入心【中的认液固定剂和溶血,室温下,避光孵育每管加入缓冲液,呻,离心面,弃上清,此时需剩余些缓冲液轻轻震荡重悬细胞每管加入【中的破膜剂,同时加入胞内抗体,在和管中分别加入标记的鼠抗人的单克隆抗体,在和管中分别加入标记的同型匹配的无关鼠作为同型对照,避光孵育每管加入缓冲液,呻,离心曲,弃上清加入缓冲液重悬细胞,立即上机检测,或是多聚甲醛固定小时内检测。流式细胞仪检测流式细胞仪检测相应细胞因子。参照目前国内外常用的方法双阳性表示细胞亚群。根据和设立淋巴细胞门,以阳性多边形图设门区分细胞。、均以相应的同种型染色细胞为阴性对照,并仔细设置各荧光通道间的补偿。每份标本计数并收集淋巴细胞,最终以其中几散点图染色阳性表示细胞,并计算其所占百分率,结果采用软件分析。患者及健康组血清的检测血清的检测原理的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本测定其中的抗体或抗原与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,通过反应而结合在固相载体上,此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。本实验应用的是双抗夹心法,原理是往预先包被抗体的包被微孔板中,依次加入标本、标准品、辣根过氧化物酶如冲标记的检测抗体,。经过温育并彻底洗涤,用底物佃显色,肥在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在咖波长下测定吸光度值,并计算样品浓度。试剂盒见附图微孔酶标板孔,包被抗人几单抗标准品浓度依次是、咖生物素检测抗体瑚心洗涤缓冲液底物底物终止液封板膜实验仪器管山、出可调移液器、肛、移液器吸头计时器酶标仪啪恒温箱实验前准备提前一天将冻存在的血清标本冷藏于冰箱解冻。洗涤缓冲液的稀释蒸馏水按稀释,即份的洗涤缓冲液的稀释加份的蒸馏水。血清的检测的具体操作步骤用普通离心管分别收集健康者和患者外周静脉血,叩,离心分离血清,置一保存进行集中检测将试剂盒从室温平衡,然后从铝箔袋中取出所需的板条,剩余的板条用自封袋密封存于冰箱中设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加入不同浓度、触的标准品山待测样本孔先加入生物素,再加待测样本山随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶心标记的检测抗体山,用封板膜封住反应孔,水浴锅弃去液体,吸水纸上拍干,每孑加入洗涤液山,静置,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此反复洗板次每孔加入底物、各斗,水浴锅血每孔加入终止液,内,在姗波长处检测各孔的值。绘制标准曲线在工作表中,以标准品浓度幽叫作纵坐标轴,对应的值作横坐标轴,绘制处标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度。一工蝈,菇誓誓警妒弘矽。掣唯”尹簟。誓。彩彩簟譬劳。铲。誓锈一,。,、,。“二”,一,。广一。,/。麓。一,。,冬专“一。/。、/。、。囊羡。么。一一。血清检测的标准曲线轴代表值,轴代表浓度/标准曲线为,一统计学方法实验数据以平均数士标准差士表示,应用进行统计分析。两组间定量资料比较,符合正态分布采用独立样本检验,不符合正态分布采用秩和检验。正态分布资料的相关性分析采用相关分析,不符锄缸合正态分布采用锄矗等级相关分析。以铲作为检验水准。实验结果患者及健康组外周血细胞阳性表达率的比较患者及健康组外周血细胞阳性表达率的比较表注与健康对照组相比,值,尸酊,差异有统计学意义,表明患者的细胞阳性表达率高于健康者与活动组相比,值,尸,差异有统计学意义,表明活动性患者的细胞阳性表达率高于非活动组与狼疮肾炎组相比,值,尸,差异有统计学意义,表明组患者的细胞阳性表达率高于非组。患者外周血细胞阳性表达率与临床症状的关联表患者外周血细胞阳性表达率与临床症状的关联/值值例数临床表现有,无一士丑蝶形红斑一一圭圭士光过敏士士关节炎一士殂侈浆膜炎士一钍脱发一士士贫血士一士口腔溃疡士士雷诺现象士乃勉注伴有蝶形红斑患者细胞阳性表达率高于无蝶形红斑的患者伴雷诺现象的患者细胞阳性表达率高于无雷诺现象的患者尸患者阳性比例与光过敏、脱发、贫血、口腔溃疡、关节炎和浆膜炎等临床症状,值均大于,表明患者阳性比例与这些症状无明显相关性。患者外周血细胞阳性表达率与实验室检查的关联表患者外周血细胞阳性表达率与实验室检查的关联注抗阳性的患者的细胞阳性表达率高于抗阴性患者,尸酊抗阳性的患者的细胞阳性表达率高于抗阴性患者抗册阳性患者的,细胞阳性表达率高于抗姗阴性患者补体降低的患者细胞阳性表达率高于补体正常的患者尸患者细胞阳性表达率与自身抗体抗和抗体,值均大于,差异无统计学意义,表明细胞阳性表达率与这些自身抗体无明显相关患者细胞阳性表达率与补体、降低,值均大于,差异无统计学意义,表明细胞阳性表达率与补体降低无明显相关患者细胞阳性表达率与尿中出现血尿和蛋白尿,值均大于,差异无统计学意义,表明与尿常规异常无明显相关患者细胞阳性表达率与血液中自细胞和血小板降低,值均大于,差异无统计学意义,表明细胞阳性表达率与血液中自细胞和血小板降低无明显相关患者细胞阳性表达率变化与不同类型免疫球蛋白升高,值均大于,差异无统计学意义,表明细胞阳性表达率与不同类型免疫球蛋白升高无明显相关。患者外周血细胞阳性表达率与疾病活动指标的相关性分析患者外周血细胞阳性表达率与俎相关性喜盆会注患者外周血细胞阳性表达率与呈正相关,。抗皇注患者外周血细胞阳性表达率与抗怕值呈正相关,闻,。患者外周血细胞阳性表达率与补体相关性寸砭卜一卜注患者外周血细胞阳性表达率与补体呈负相关,尸。患者及健康组血清变化患者和健康者,肾炎和非肾炎患者,活动期和非活动期患者之间血清值之间的比较。表患者及健康组血清变化的比较注与健康对照组相比,患者血清水平显著升高尸。患者血清儿变化与临床症状的关联性分析表患者血清变化与临床症状的关联临床表现有/无一例数血清水平值值酌士蝶形红斑士一士光过敏士一士关节炎士一士浆膜炎士一士脱发士一士贫血士一士口腔溃疡士一士雷诺现象士一注患者血清变化与蝶形红斑、浆膜炎、光过敏、脱发、雷诺现象、口腔溃疡、贫血无明显相关。患者血清变化与实验室检查的关联性分析表患者血清变化与实验室检查的关联。”。抗烈鹫弓士一”。”抗三鬻罟誓士一/”。”。抗砌岬/无烈黑慧士一抗”。”。”。”臻紫熙士一十抗。”。罂圣篡曼士一。”。”。”。上孽三篡蜚士一。”。工三翟鬻塑士一”。尿隐血罂黛豫士一十”。蛋白尿磐主篡鬟士一【“。臻譬笔蛀一上。罂黛燃士一十”“。三黛塑士一。癸篓士一”。癸紫揪士一“。一微球蛋白罂黛量士一注患者血清变化与自身抗体,抗抗体、抗鼢旧抗体、抗和抗体,值均大于,差异无统计学意义,表明与这些自身抗体无明显相关患者血清变化与补体、降低,值均大于,差异无统计学意义,表明与补体降低无明显相关患者血清变化与尿中出现血尿和蛋白尿,值均大于,差异无统计学意义,表明几与尿常规异常无明显相关患者血清变化与血液中白细胞和血小板降低,值均大于,差异无统计学意义,表明几与血液中白细胞和血小板降低无明显相关患者血清变化与不同类型免疫球蛋白升高,值均大于,差异无统计学意义,表明与不同类型免疫球蛋白升高无明显相关。讨论是一种全身性自身免疫性疾病,好发于育龄期妇女,临床表现多样、变化多端,可以导致多系统受累,累及皮肤、浆膜、关节、肾脏及中枢神经系统等,其中肾脏是最主要最常见的受累脏器,其严重程度直接与的预后有关,甚至成为影响患者生存率的独立危险因素。目前研究发现,免疫系统中淋巴细胞异常活化是导致发病、病情进展和预后的关键。、细胞活化和死亡信号异常是的病理基础【。细胞异常活化和辅助细胞异常分泌细胞因子被认为是对自身抗原失耐的机制之一。现在厂模式在被不断更新充实,其中最重要是二种新型的细胞亚群即砌细胞的发现,被认为是一群重要的介导炎性反应的细胞群,防御胞外病原菌的感染、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等的炎症反应中发挥作用【,尤其成为自身免疫性疾病新的研究热点。细胞主要通过其特异性分泌的细胞因子来发挥生物学功能。与受体结合后并被激活,即可导致趋化因子、集落刺激因子和粘附分子的表达或释放,招募炎症细胞尤其是嗜中性粒细胞,进而引起细胞浸润和组织破坏,影响自身免疫性疾病、炎症及肿瘤等病理过程【】。几主要由记忆性淋巴细胞分泌,但却在天然免疫和宿主防御中有特殊功能,因此成为连接适应性免疫和固有性免疫重要的桥梁【。同时在上述过程中,众多细胞因子均产生重要的正反馈效应,增加细胞分泌的能力,及增强几导致炎症反应的作用。其中在起始阶段是刺激细胞分化及产生的启动者,与或者的协同作用是诱导其分化的关键因素。然而其后细胞的维持、扩增和促进的稳定,均离不开这个重要的促进者【。维甲酸相关孤核受体协印是促进细胞分化、调节其功能的特异性转录因子。作为细胞的一个自分泌调节因子,在诱导细胞产生级联放大反应方面也发挥着关键作用。因此,眦等】认为细胞的分化需要三步和共同启动的分化产生的扩大反应稳定表型。细胞的升高在的发病中具有重要的作用。周茂华等【町发现正常人和患者无体外刺激时,培养上清液中几乎检测不到几蛋白的表达,加入多克隆刺激剂后产生大量的几,且组明显高于正常组,提示患者中存在大量记忆性产生的细胞。【】等证实了主要由细胞所产生,且等细胞因子在患者血清中也有明显升高,提示轴在自身免疫性疾病的发生、发展中起着关键作用。更进一步说明细胞通过其密切相关的一系列重要的细胞因子,促进自身反应性细胞的扩增,增加自身抗体的产生,介导的发生发展。以上研究均支持,细胞在的发病过程中也有作用。本研究显示在患者外周血中淋巴细胞的阳性表达率均明显高于健康正常者,这与国内外类似实验结果相一致。患者外周血中细胞增高其原因可能为发病机制较复杂,为多因素联合作用,如、等多种淋巴细胞及其亚群均参与其中,突出表现为淋巴细胞异常激活,及产生多种特征性自身抗体,同时淋巴细胞也可以出现异常反应,如功能亢进,受累器官出现免疫复合物沉积,及各类白细胞浸润,表现为细胞活性降低,细胞活性增高,从而导致厂也失调,尤其是众多学者均认为发挥主导作用。还与发病机制较复杂有关,、晓及细胞均在中发挥着不可替代的作用,这些细胞的相互作用同时也影响着细胞及细胞因子的变化。细胞在病情活动性及脏器损害中发挥着重要的作用。依积分分组,活动时细胞阳性表达率也升高,且在细胞中占的比例与评分和抗研叮抗体定量呈正相关而与水平呈负相关,提示细胞阳性表达率与疾病活动性密切关系,因此可以作为预测疾病活动度及脏器损伤特别是肾脏损害辅助标志物。国内很早有研究【发现活动期患者培养后的表达升高,且均与越呈明显正相关,提示细胞分泌卟的水平高低与疾病活动性有关。徐雪【等研究发现,肾病组和非肾病组患者砌细胞比例间有明显差异,同时患者蛋白尿阳性组砌细胞比例高于阴性组,提示肾脏损害与否可能与患者细胞水平有关。董富光等【】