临床微生物学标本采集处理操作规范（可编辑）

临床微生物学标本采集处理操作规范临床微生物学标本采集处理操作规范检验科细菌室标本正确采集的重要性正确的采取处理与运送对于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础标本采取与处理不符合要求,则细菌培养的结果毫无意义。为推行检验方法的标准化,我国借鉴国外部分经验已成立中国临床实验室标准化委员会CLSI,临床实验室的认证工作已经开始准备。微生物检验的标准化首先应从标本采取与处理的规范化开始。全面的检验保证系统更加重视分析前与分析后的因素对检验结果质量的影响,是微生物检验分析前质量控制的主要内容之一,即是对标本采取与处理的质量保证。分以下单元血液细菌培养标本的采集和处理下呼吸道分泌物痰标本采取与质量要求尿液细菌培养标本的采集与运送粪便标本微生物学检查质量要求分泌物标本送检规范厌氧菌标本送检规范一、血液细菌培养标本的采集和处理临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血流感染的患者,做血液细菌培养以明确病原菌。及时、准确地从患者血液中分离出病原菌,才能正确实施有效地抗菌治疗,从而有助于治愈率的提高和医疗费用的降低。1采血时机在患者发热期间越早越好,最好在抗菌治疗前,以正在发冷发热时或发冷发热前半小时为宜。2采血次数及间隔在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎,需马上做抗菌治疗或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者,应立即从两臂分别取2份标本。感染性心内膜炎患者,24H内要取血3次,每次间隔不少于30MIN,必要时次日再做血培养2次。发热原因不明者两次抽血间隔时间60MIN必要时于2448H后再抽血2次。据国外统计1次血培养可检出菌血症的802次血培养检出903次血培养检出99国内统计17家医院1次血培养阳性率10818家医院2次以上血培养阳性率1483采血部位多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。要避免从血管插管内取血,因插管常被污染其培养结果不能反映真实情况。在不同部位取血,2次分离出同样菌种才是确定病原菌的有力证据。4采血量成人菌血症或败血症的血液中含菌量较少,平均13ML血液中仅有1个细菌。采血量一定要足。比例约为增菌肉汤的15110为宜。成人采血810ML儿童采血35ML婴幼儿采血12ML骨髓培养一般接种量为12ML采血量过少影响病原菌的检出,过多可因血中含有抗体,抗生素浓度过浓而不利于细菌的生长。特殊的全身性和局部感染患者采血培养的建议可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎,应在不同部位采集23份血标本。不明原因发热,如隐性脓肿、伤寒热和波浪热,先采集23份血标本,2436H后估计体温升高之前通常在下午再采集2份以上。可疑菌血症或真菌菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,以获得罕见的或苛养的微生物。入院前两周内接受抗菌药物治疗患者,连续三天,每天采集2份选用可中和或吸附抗菌药物的培养基。必要时做L型菌,真菌和厌氧菌培养。5培养瓶消毒程序70酒精擦拭血培养瓶橡皮塞,作用60S。用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞子表面残余酒精,然后注入血液。注入血液培养基瓶内,迅速轻摇混合,防止血液凝固,有利于病原菌的生长。6无菌操作无论采取何种方法,在血液培养的全过程,从皮肤消毒、标本采取、运送、分离移种等,皆应十分注意无菌操作。用头皮针为新生儿和婴儿取血时,应更换针头再将血注入培养瓶中。7标本运送采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置3537孵箱中,切勿冷藏。自动化连续监测系统虽有允许延迟上机监测微生物生长的原理,还是应该尽量减少延迟上机时间。二、下呼吸道分泌物痰培养标本采取与质量要求对病原学诊断的重要作用存在严重的问题标本质量病原学诊断和临床不符或脱节造成抗菌药物的应用不合理甚至耐药菌株的出现或流行痰标本的细菌学检查应注意如下几个问题1标本的采取自然咳痰要求患者清晨留取,留取标本前用清水漱口3次,之后用力咳出。咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中,标本量应1ML,并尽可能在抗菌药物使用之前采集标本。幼儿可用手指轻叩胸骨柄上方以诱发咳痰。2气管穿刺法仅用于昏迷患者,由临床医师进行。3纤维支气管镜抽吸通常用于在给患者行纤维支气管镜检查时顺便抽取。4胃液抽取法多用于可疑患有肺结核的患者在有可能将痰液咽下的情况时采用。5标本的运送标本采集后应立即送检,应争取在20MIN内送达检验科微生物室。特别是痰标本留取后要立即送检,不能立即送检的,室温保存2H,或置于冰箱中保存。因为有些细胞如纤毛柱状上皮细胞有些苛养细菌如脑膜炎奈瑟菌,肺炎链球菌、流感嗜血杆菌很容易自溶死亡,而影响培养结果。同时口咽部非致病细菌过度生长,也使检出率明显下降。6标本验收遇有不合格标本,应及时与临床联系,报告和记录不合格标本拒收的具体理由及相关信息。7标本的贮存检验科细菌室收到标本后,应立即进行标本的质量检查及培养接种,如不能立即进行检查则应暂时放于普通冰箱中4,冰箱中存放标本应在24H以内进行检查。8标本的质量检查1制成涂片行革兰染色2于显微镜低倍镜下检查1010,观察WBC及扁平上皮细胞存在情况表一痰标本显微镜检查的分类细胞数/低倍视野分类白细胞扁平上平细胞62525251025325252102525125表2痰涂片显微镜细胞学检查判别标本合格的推荐标准细胞数/低倍镜分类备注鳞状上皮白细胞细胞A25合格可用于细菌培养1025B25尚合格可用于细菌培养C25不合格,重送标本分类中13类不做培养,要求重新留取标本4、5类为合格标本第6类为气管穿刺液,如未见到白细胞,而扁平上皮细胞10/低倍视野,亦应重新留取标本对可疑烈性呼吸道传染病如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等的患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。三、尿液细菌培养标本的采集与运送尿液的细菌培养检查膀胱炎肾脏感染早期发现病原学诊断很有价值其他如尿道、前列腺及内、外生殖器炎症的诊断也有一定价值。1标本收集需在应用抗菌药物之前停用抗菌药5D之后留取尿液标本尿液在膀胱内应停留68H以上使细菌有足够时间繁殖。夜尿1清洁排尿法女患者应将阴唇分开,用肥皂水或碘伏清洗外阴,然后以清水冲洗尿道口周围,擦干并排出前段尿液后,用无菌容器接取中段尿男患者应翻转包皮冲洗,用2红汞或11000新洁尔灭消毒尿道口婴儿消毒其阴部后,将无菌小瓶直接对准尿道口以橡皮膏贴于皮肤上,待排尿后立即送检。2膀胱穿刺法膀胱穿刺的适应症有尿道感染的临床症状,但中段尿培养细菌数很低,而又难以确定感染源者。婴幼儿、新生儿、不能用导尿者。怀疑有厌氧菌感染时。避免尿道正常菌群的污染,收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。2膀胱穿刺法厌氧菌培养检查时必须采用膀胱穿刺法。穿刺时膀胱应充盈,皮肤严格消毒后用装有19或20针头的注射器在耻骨联合距脐1/3处穿刺。3肾盂尿采集法取左右两侧肾盂尿,应请泌尿科医生采取,左右侧的标本要标记明确,以免出现错误。4对用封闭式引流装置的留置导尿患者留取尿液标本培养时,用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁,用装有21针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本,培养用的尿液标本也不能从引流袋中留取。5膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影时,收集的尿液可用来做细菌培养。6病毒学检测做病毒学检测收集清洁的标本即可,不需特殊方法收集。标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生长,标本需冷藏。巨细胞病毒CMV的检测,需多次检测标本,因其释放常是周期性的。检测衣原体时,尿液标本不能代替尿阴道分泌物。结核分枝杆菌的检查,应留取24H尿,无症状的血尿可能是肾结核病,应用清洁排泄法收集连续3份晨尿标本。淋病奈瑟菌培养留取清晨第1次尿,盛于无菌容器内立即送检。尿道结石标本可作其内部及表面培养,内部培养出的细菌与表面存在者可能不同。2标本的运送和保存用无菌带螺帽的容器盛标本,标本应在2H